P4HA2通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞的增殖

目的:探讨P4HA2在食管鳞癌中的表达情况及作用机制。方法:利用基因表达综合数据库(GEO)的RNA表达谱数据及免疫组织化学染色和Western blot技术分析食管鳞癌组织及正常食管组织中P4HA2的mRNA和蛋白表达情况;通过细胞增殖实验、集落形成实验和裸鼠移植瘤实验,在体外和体内检测P4HA2对食管鳞癌细胞恶性表型的影响;利用Western blot检测P4HA2调控的下游通路及关键分子。结果:与正常食管组织相比,食管鳞癌组织中P4HA2的mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.01);体外和体内实验结果显示,与对照组相比,敲降P4HA2可显著抑制食管鳞癌细胞的增殖、集落形成以及裸鼠移植瘤的生长(P<0.01);分子水平检测表明,敲降P4HA2显著降低EGFR的蛋白水平,以及AKT和S6的磷酸化水平(P<0.05);在食管鳞癌细胞中敲降P4HA2后回复EGFR的表达,AKT和S6的磷酸化水平以及细胞增殖和集落形成表型均得以恢复(P<0.01)。结论:P4HA2在食管鳞癌组织中高表达,且P4HA2通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞的增殖和肿瘤生长。

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

目的:探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果:Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论:miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。

槲皮素调控EGFR/AKT/mTOR信号通路影响人乳腺癌细胞株T47D增殖、凋亡的实验研究

目的对槲皮素调控表皮生长因子/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(EGFR/AKT/m TOR)信号通路影响人乳腺癌细胞株T47D增殖、凋亡进行分析。方法人乳腺癌细胞株T47D随机分为三组:对照组、雷帕霉素组和槲皮素组。对照组T47D细胞给予溶剂DMSO孵育,雷帕霉素组T47D细胞给予雷帕霉素(10μM)孵育,槲皮素组T47D细胞给予槲皮素(20μM)孵育。分析各组T47D细胞的凋亡蛋白及EGFR/AKT/m TOR信号通路蛋白的表达。结果与对照组相比,槲皮素组和雷帕霉素组细胞增殖受到明显地抑制(P<0.05);槲皮素组和雷帕霉素组T47D细胞的促进凋亡分子Bax、Caspase3和Caspase9蛋白及mRNA水平明显高于对照组而抑制凋亡分子Bcl2蛋白及mRNA水平明显低于对照组(P<0.05);槲皮素组和雷帕霉素组T47D细胞EGFR、AKT及m TOR蛋白及荧光强度均明显低于对照组(P<0.05)。结论槲皮素能够通过抑制EGFR/AKT/m TOR信号通路促进人乳腺癌细胞株T47D的细胞凋亡过程。

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制。方法利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RTPCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平。结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P<0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力。

桥粒胶蛋白-3介导促卵泡激素通过EGFR/Akt信号通路对卵巢癌细胞增殖活性的调控

目的通过检测桥粒胶蛋白-3(Dsc3)在卵巢癌中的表达以及促卵泡激素(FSH)对Dsc3、EGFR/Akt信号通路下游分子以及细胞增殖的影响,探讨Dsc3是否介导FSH通过EGFR/Akt信号通路对卵巢癌细胞增殖活性的调控,进而促进肿瘤的发生。方法免疫组化检测Dsc3在卵巢肿瘤组织中的表达;运用蛋白质印迹分析方法检测Dsc3在6种卵巢肿瘤细胞及卵巢永生化上皮细胞中的表达情况和FSH对Dsc3、EGFR的调控,以及干扰Dsc3、EGFR和应用Akt通路阻断剂对信号通路分子的调控;运用MTT方法检测干扰Dsc3、EGFR以及使用Akt阻断剂后对卵巢癌细胞增殖活性的影响。结果 (1)Dsc3在卵巢癌及交界性卵巢肿瘤中的阳性表达率均高于良性卵巢肿瘤,差异均有统计学意义(P<0.05),Dsc3在卵巢癌中的阳性表达率与交界性卵巢肿瘤的差异无统计学意义(P>0.05);Dsc3在某些卵巢癌细胞如Hey、HO8910中及交界性卵巢肿瘤细胞MCV152中的表达高于卵巢永生化上皮细胞Moody;(2)FSH呈剂量-时间依赖效应上调Dsc3、EGFR的表达;(3)干扰Dsc3后,信号通路分子EGFR、pAkt受到抑制,Akt无明显改变;干扰EGFR后,信号通路分子Dsc3、pAkt受到抑制,Akt无明显改变;应用Akt通路阻断剂后,Dsc3、pAkt受到抑制,Akt无明显改变;以上三种处理均可抑制FSH对Akt信号通路的调控;(4)干扰Dsc3、EGFR,及应用Akt通路阻断剂均可抑制FSH介导的卵巢癌细胞增殖活性(P<0.05)。结论 Dsc3介导FSH通过EGFR/Akt通路调控的卵巢癌细胞增殖活性,进而促进卵巢癌的发展。

基于网络药理学和动物实验探讨慈菇消脂方对非酒精性脂肪性肝炎“炎癌”转化中EGFR/PI3K/AKT信号通路的干预研究

目的基于网络药理学研究慈菇消脂方(Cigu Xiaozhi decoction,CXD)的主要活性成分、关键靶点及通路,分析其对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)“炎癌”转化的作用机制,并进行动物实验验证。方法基于网络药理学预测得到CXD治疗NASH“炎癌”转化的潜在作用靶点和信号通路。采用蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(MCD)诱导小鼠NASH模型,给予CXD及表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂干预28 d,干预结束后处死小鼠,苏木精-伊红法(HE)观察各组小鼠肝脏组织形态学变化;Western blot检测各组小鼠肝组织EGFR、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及蛋白激酶B(AKT)蛋白相对表达量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;结果经网络药理学筛选得到CXD潜在活性成分284个、潜在治疗靶点159个及关键靶点20个。CXD可影响细胞增殖、炎症反应等多个生物过程,涉及肿瘤、PI3K/AKT等多个信号通路。动物实验验证结果表明CXD能够降低NASH小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平;降低肝组织中PI3K、AKT蛋白相对表达量,升高EGFR蛋白的相对表达量。结论CXD可通过参与细胞增殖和炎症反应等生物过程,调控EGFR/PI3K/AKT信号通路,改善NASH小鼠的肝组织损伤。

T-cadherin通过下调EGFR-PI3K-AKT信号轴抑制膀胱癌的发展

目的探究T-钙黏蛋白(T-cadherin,T-cad)在膀胱癌发生发展中的作用及其机制。方法检测膀胱癌患者和对照组人群血清中T-cad mRNA的表达差异;比较T-cad低表达和高表达膀胱癌患者的临床分期和肿瘤组织病理分级差异;建立T-cad过表达EJ1细胞系,通过CCK 8实验、克隆形成实验检测过表达T-cad对EJ1细胞增殖和克隆形成能力的影响;利用Western blot技术分析过表达T-cad对EJ1细胞PI3K-AKT信号的影响。结果与对照组人群相比,膀胱癌患者血清中T-cad mRNA表达水平较低(P<0.001);T-cad低表达膀胱癌病理分级较高(P<0.05);过表达T-cad抑制EJ1细胞的增殖(P<0.0001)和克隆形成(P<0.05)能力;过表达T-cad下调EJ1细胞中EGFR(P<0.01)、PI3Kα(P<0.001)和p-AKT(P<0.001)表达水平。结论T-cad通过下调EGFR-PI3K-AKT信号轴抑制膀胱癌的发展。

EGFR/AKT信号转导通路在调控结肠癌LoVo细胞生物学行为中的作用研究

目的:探讨EGFR/AKT(表皮生长因子受体/蛋白激酶B)信号转导通路在调控人结肠癌细胞株LoVo生物学行为中的作用机制方法:用EGFR抑制剂AG1478处理人结肠癌细胞LoVo;用免疫细胞化学法检测p-EGFR及p-AKT蛋白表达;用MTT法检测细胞的增殖;用流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;用Transwell小室观察体外细胞迁移能力;用Transwell小室结合Matrigel胶检测肿瘤细胞侵袭能力结果:AG1478(20μmol/L)处理后,p-EGFR及p-AKT的表达水平明显降低(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05)。结论:EGFR与人结肠癌细胞LoVo的增殖、凋亡、迁移和侵袭性密切相关,并可能通过AKT信号转导通路调控人结肠癌的发展。

亚硒酸钠通过增加ROS抑制PI3K/AKT通路改善肺癌PC-9/GR细胞对吉非替尼的耐药性

目的:探讨亚硒酸钠对肺癌耐药细胞PC-9/GR增殖、凋亡的影响,研究其是否能改善吉非替尼耐药及可能机制。方法:不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)亚硒酸钠处理细胞24、36、48 h后,CCK-8法检测亚硒酸钠对细胞增殖的影响并选择合适浓度用于后续实验。不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol/L)吉非替尼单药及联合亚硒酸钠(6μmol/L)处理细胞48 h,分别计算半数抑制浓度(IC50),得出亚硒酸钠对PC-9/GR逆转倍数;流式细胞术检测各组细胞凋亡;DCFH-DA法检测细胞内ROS水平;Western blot实验检测各组细胞中p-PI3K、p-AKT、Bax、Bcl-2表达水平。结果:随亚硒酸钠浓度升高及作用时间延长,细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.05);单药吉非替尼组的IC50值为16.051μmol/L,联合亚硒酸钠后IC50值为5.406μmol/L,表明亚硒酸钠能够逆转吉非替尼的耐药,其逆转耐药倍数为2.969倍。与吉非替尼和亚硒酸钠单药组相比,联合治疗组的细胞凋亡率显著升高,ROS水平及Bax蛋白表达上调,p-PI3K、p-AKT、Bcl-2表达下调,经N-乙酰半胱氨酸(NAC)消除ROS后抵消了亚硒酸钠对PI3K/AKT通路的抑制作用(P<0.05)。结论:亚硒酸钠联合吉非替尼能提高肺腺癌耐药细胞的敏感性,抑制细胞的增殖,同时诱导细胞凋亡,这一过程可能通过ROS依赖性下调PI3K/AKT通路的表达实现。

EGFR与PI3K/AKT信号通路相关蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)和磷酸肌醇3激酶、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶信号通路相关蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达以及其临床意义。方法应用免疫组化学SP法检测100例NSCLC组织及其相应正常癌旁组织中的EGFR、PI3K、AKT蛋白表达水平。结果 100例正常的癌旁组织中EGFR、PI3K及AKT蛋白的阳性表达率分别为13%、11%、7%,100例NSCLC组织中EGFR、PI3K及AKT蛋白的阳性表达率分别为63%、51%、23%,两种组织的3种阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EGFR可能通过激活其下游的PI3K/AKT通路发挥致癌作用。

miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖研究

目的:探究miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路对脑膜瘤细胞增殖的影响。方法:生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-1231与EGFR之间的靶向结合作用;RT-PCR检测脑膜瘤细胞miR-1231表达和EGFR mRNA表达;Western blot检测EGFR蛋白表达、PI3K和AKT磷酸化水平;CCK-8检测脑膜瘤细胞活力;集落形成实验和EdU实验检测脑膜瘤细胞增殖。结果:与正常脑膜细胞相比,脑膜瘤细胞中miR-1231表达显著下调(P<0.05),EGFR表达显著上调(P<0.05);生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因证明EGFR为miR-1231的靶基因;与miR-NC组相比,miR-1231显著抑制脑膜瘤细胞增殖和抑制EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-1231显著促进脑膜瘤细胞增殖和激活EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-1231+EGFR-NC显著抑制脑膜瘤细胞EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05),显著下调细胞增殖能力(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-NC+EGFR显著激活脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路(P<0.05),显著上调细胞增殖能力(P<0.05),且能逆转miR-1231+EGFR-NC对脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路和细胞增殖能力的抑制作用。结论:miR-1231通过靶向EGFR调节PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖。

miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖

目的探究miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路对脑膜瘤细胞增殖的影响。方法生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-1231与EGFR之间的靶向结合作用,RT-PCR检测脑膜瘤细胞miR-1231表达和EGFR mRNA表达,Western blot检测EGFR蛋白表达、PI3K和AKT磷酸化水平,CCK-8检测脑膜瘤细胞活力,集落形成实验和EdU实验检测脑膜瘤细胞增殖。结果与正常脑膜细胞相比,脑膜瘤细胞中miR-1231表达显著下调,而EGFR表达显著上调(P<0.05)。生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因证明EGFR为miR-1231的靶基因。与miR-NC组相比,miR-1231组显著抑制脑膜瘤细胞增殖、抑制EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-1231组显著促进脑膜瘤细胞增殖、激活EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-1231+EGFR-NC组显著抑制脑膜瘤细胞EGFR/PI3K/AKT通路,并显著下调细胞增殖能力(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-NC+EGFR组显著激活脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路,并显著上调细胞增殖能力(P<0.05),且能逆转miR-1231+EGFR-NC对脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路和细胞增殖能力的抑制作用。结论miR-1231通过靶向EGFR调节PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖。

肾安方对慢性肾脏病大鼠EGFR介导的PI3K/Akt通路的影响

目的:观察肾安方对慢性肾脏病(CKD)大鼠生化指标和表皮生长因子受体(EGFR)介导的PI3K/Akt通路的影响,探讨其对慢性肾脏病的保护机制。方法:48只大鼠随机分为正常组12只和造模组36只,造模组大鼠采用腺嘌呤诱导法复制CKD模型,造模成功的30只大鼠随机分为模型组、肾安方组、羟苯磺酸钙组各10只。肾安方组大鼠以肾安方24.1 g/(kg·d)灌胃,羟苯磺酸钙组以羟苯磺酸钙100 mg/(kg·d)灌胃处理。模型组和正常组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,给药4周后,检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、24 h尿蛋白(24 h UTP)、甲状腺激素(PTH)、β2微球蛋白(β2-MG)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1);HE染色和Masson染色观察肾脏病理变化程度;Real-time PCR法检测大鼠肾组织中EGFR mRNA、Akt mRNA、PI3K mRNA表达水平;Western blotting法检测EGFR/Akt/PI3K信号通路关键蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,肾安方组、羟苯磺酸钙组BUN、Scr、PTH、β2-MG、24 h UTP、IL-6、TNF-α、TGF-β1、p-EGFR、p-PI3K,p-Akt及肾脏纤维化程度显著降低(P<0.05);肾安方组上述指标改善情况均优于羟苯磺酸钙组(P<0.05)。结论:肾安方可能通过抑制EGFR磷酸化,抑制PI3K/Akt通路的激活,减少TGF-β1的含量,从而减缓肾脏纤维化的进程。

EGFR、Raf、Akt在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的:检测食管鳞癌中EGFR信号传导通路相关分子EGFR、Raf、Akt的表达情况及三者之间的相互关系。方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测60例食管鳞癌组织和15例食管正常黏膜中EGFR、Raf、Akt的表达情况。结果:在60例食管癌中EGFR、Raf、Akt阳性表达率分别为61.6%(37/60)、56.6%(34/60)和67%(40/60),15例食管正常黏膜中分别为33.3%(5/15)、13.3%(2/15)和20%(3/15);EGFR、Raf和Akt表达与鳞癌分级及肿瘤侵犯深度无关(P>0.05),与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:食管鳞癌组织EGFR、Raf、Akt的过表达可能与食管癌的发生发展有关;有可能成为靶向治疗的新靶点。

宫颈鳞状细胞癌中MUC4、EGFR和p-AKT的表达及意义

目的探讨宫颈鳞状细胞癌中MUC4、EGFR和p-AKT的表达及意义。方法选择宫颈鳞状细胞癌患者120例的癌组织标本与癌旁组织标本作为研究对象,所有标本都给予MUC4、EGFR和p-AKT的免疫组化分析,分析其与临床病理特征的相关性。结果癌组织中MUC4、EGFR和p-AKT表达阳性率分别为90. 8%、74. 2%和93. 3%,癌旁组织分别为28. 3%、36. 7%和30. 0%,对比差异有统计学意义(P <0. 05)。在宫颈鳞状细胞癌组织中,MUC4、EGFR和pAKT表达阳性率随着分化程度的降低、临床分期的增加、肌层浸润深度的加深、淋巴结的转移而显著增高(P <0. 05)。Spearman等级相关分析显示MUC4与EGFR、p-AKT呈显著正相关性(P <0. 05),EGFR与p-AKT呈显著正相关性(P <0. 05)。结论 MUC4、EGFR和p-AKT在宫颈鳞状细胞癌中呈现高表达状况,与临床病理特征参数密切相关,共同参与调节宫颈鳞状细胞癌的发生与发展。

EGFR/TGF-α/P-AKT/PTEN联合检测在非小细胞肺癌中的临床意义及相关性

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中EGFR、TGF-α和P-AKT蛋白与PTEN基因的表达及其与临床病理特征的关系。方法EGFR、TGF-α和P-AKT蛋白采用免疫组化法、PTEN基因采用原位杂交技术分别检测在NSCLC和正常肺组织中的表达,同时分析各因子间的相关性及其与临床病理特征的关系。结果在NSCLC和正常肺组织中,EGFR的阳性率分别为68.5%(50/73)、30.0%(3/10),P-AKT的阳性率分别为76.7%(56/73)、30.0%(3/10),TGF-α的阳性率分别为72.6%(53/73)、20.0%(2/10),PTEN的阳性率分别为30.1%(22/73)、80.0%(8/10),差异有统计学意义(P<0.05);EGFR、TGF-α和P-AKT蛋白与PTEN基因的表达分别与淋巴结转移、远处转移和分化程度有关,差异有统计学意义(P<0.05);EGFR、TGF-α和P-AKT相互之间呈正相关,三者与PTEN呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EGFR、TGF-α和P-AKT的高表达以及PTEN基因缺失在NSCLC的生长增殖和侵袭转移中发挥着重要作用,可以作为NSCLC的检测和预后指标以及靶向治疗药物的研究靶点。

金雀异黄酮对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及EGFR/PI3K/Akt通路的影响

目的研究金雀异黄酮(genistein)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其机制。方法 MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞核凋亡形态学的影响;qRT-PCR法观察金雀异黄酮干预MDAMB-231细胞36 h后,EGFR mRNA表达水平的变化;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3,EGFR、Akt、p-Akt蛋白的变化;Akt激活剂胰岛素(insulin)、金雀异黄酮单独及联合胰岛素干预乳腺癌MDA-MB-231细胞后,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白表达量的变化。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间浓度依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖;Hoechst 33258染色结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDAMB-231细胞36 h后细胞核呈现典型凋亡形态学改变;qRTPCR结果显示,经金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,EGFR的mRNA表达水平明显下降(P<0.01);Western blot结果显示金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组对比,Bcl-2、EGFR、Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调(P<0.01),Bax、caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.01),Akt激活剂胰岛素可以明显激活p-Akt(P<0.01),金雀异黄酮可以明显下调被激活的p-Akt(P<0.01)。结论金雀异黄酮能抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。

miRNA-7通过EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖

目的:探讨过表达微小RNA(microRNA-7,miRNA-7)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,也称Akt)通路的关联情况。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染入人鼻咽癌5-8F细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-7的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖能力变化;细胞平板克隆形成实验观察转染后细胞克隆能力变化情况;real-time PCR法检测EGFR/PI3K/Akt通路各mRNA表达水平的变化;Western blotting法检测EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达水平的变化。结果:real-time PCR结果显示,转染miRNA-7模拟物组细胞中的miRNA-7表达水平显著高于无关序列组和空白对照组(P<0.01);5-8F细胞转染miRNA-7模拟物后,细胞增殖和平板克隆能力均呈明显下降(P<0.01);real-time PCR及Western blotting结果显示,转染组的5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路中各主要成员的mRNA及相应蛋白表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论:过表达miRNA-7可以显著降低鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而显著抑制其增殖和平板克隆形成能力。

黄芪总皂苷与莪术醇抑制肿瘤血管生成及其对EGFR/PI3K/AKT和HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的通过观察黄芪、莪术主要有效抗癌成分黄芪总皂苷、莪术醇单独及联合应用体外抑制肿瘤血管生成的作用及其对EGFR/PI3K/AKT和HIF-1α/VEGF信号通路的影响,进一步阐明临床常用配伍黄芪-莪术的抗癌作用机制和内在物质基础。方法采用CCK8法筛选黄芪总皂苷及莪术醇体外有效浓度,设对照组、黄芪总皂苷组、莪术醇组、两药联合组进行HUVECs细胞体外培养,CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,光镜下观察HUVECs细胞体外成血管能力,Westernblot及RT-qPCR法检测EGFR/PI3K/AKT及HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白及其mRNA的表达。结果干预24 h后,50μmol/L黄芪总皂苷及50μmol/L莪术醇对HUVECs细胞具有较强抑制作用;细胞增殖抑制率分别为黄芪总皂苷组3.06%、莪术醇组3.14%及两药联合组11.75%,两药联合组显著优于单药组(P<0.01);体外成血管能力,黄芪总皂苷组、莪术醇组与对照组比较未显示明显差异(P>0.05),两药联合组的血管管腔数显著少于对照组、黄芪总皂苷组及莪术醇组(P<0.01);各蛋白的表达,黄芪总皂苷组EGFR、PI3K、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降,其中EGFR下降尤为显著(P<0.01),莪术醇组HIF-1α、VEGF蛋白表达下降明显(P<0.01),两药联合组EGFR、PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降,其中EGFR、PI3K、HIF-1α、VEGF降低尤为显著(P<0.01);各mRNA转录,黄芪总皂苷组EGFR、PI3K、AKT、VEGF mRNA表达降低,莪术醇组AKT、HIF-1α、VEGF mRNA表达降低,两药联合组EGFR、PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF mRNA表达降低,其中EGFR、PI3K、AKT、VEGF mRNA降低尤为显著(P<0.01)。结论黄芪总皂苷和莪术醇可通过抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路、HIF-1α/VEGF信号通路EGFR、PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF等相关mRNA转录及蛋白表达,进而抑制血管内皮细胞增殖及毛细血管样结构形成,两者联合作用更强,揭示了黄芪-莪术配伍抑制肿瘤血管生成的主要作用靶点及物质基础。

GTPBP4基因沉默介导EGFR/PI3K/AKT信号通路对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的调控机制

目的:探讨GTP结合蛋白4(GTPBP4)基因介导EGFR/PI3K/AKT信号通路对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的调控机制。方法:选取人胃癌细胞株MGC-803、NCI-N87、SGC-7901、MKN-45及人胃黏膜上皮细胞株GES-1,筛选癌细胞中GTPBP4表达最高的细胞株并分为6组:Blank组(胃癌细胞不做处理)、阴性对照组(转染含有无关序列的重组质粒)、GTPBP4 shRNA组(转染含有GTPBP4 shRNA的重组质粒)、GTPBP4过表达组(转染含有GTPBP4片段的重组质粒)、EGFR/PI3K/AKT inhibitor组(EGFR/PI3K/AKT通路抑制剂处理细胞)、Combined treatment组(EGFR/PI3K/AKT通路抑制剂联合GTPBP4 shRNA处理细胞),分别给予顺铂处理。qRT-PCR和Western blot检测EGFR/PI3K/AKT信号通路和凋亡相关基因的mRNA和蛋白表达水平。MTT法检测各组细胞的增殖活力。Transwell检测各组细胞侵袭情况。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:与人胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞株中GTPBP4表达显著上调(P<0.05)。给予顺铂处理后,胃癌细胞GTPBP4表达下调。与Blank组相比,GTPBP4 shRNA组及EGFR/PI3K/AKT inhibitor组Bax表达上调,Bcl-2、EGFR、PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT表达均下调,细胞增殖、侵袭能力降低,凋亡率上升(P<0.05),且Combined treatment组各指标变化趋势更为明显(P<0.05)。GTPBP4过表达组与GTPBP4 shRNA组、EGFR/PI3K/AKT inhibitor组及Combined treatment组变化呈相反趋势(P<0.05)。Blank组和NC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GTPBP4基因沉默可抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路激活,抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力,促进顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。