小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂盐酸埃罗替尼

盐酸埃罗替尼是一种小分子表皮生长因子酪氨酸激酶可逆抑制剂,通过抑制酪氨酸激酶的磷酸化,阻断信号传导,抑制肿瘤生长。临床前研究表明其对表皮生长因子酪氨酸激酶有抑制作用;临床研究显示该药对多种肿瘤有抗肿瘤活性,不良反应较轻,与化疗药物合用不增加毒性。2004年经FDA批准上市,用于一线化疗失败的局部晚期或转移性非小细胞肺癌的治疗。

非小细胞肺癌中EGFR酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药的机制

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）酪氨酸激酶抑制剂——厄洛替尼，可有效治疗含有EGFR突变的非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer,NSCLC），然而，分子靶向药物疗效维持时间较短，几乎所有起初治疗有效的患者最终均会复发，提示对此类药物产生耐药。因此，阐明其耐药的具体机制并研发第二代酪氨酸激酶抑制剂以有效治疗这些肿瘤就显得尤为重要。近年的研究已证实存在两种不同的EGFR酪氨酸激酶抑制剂的耐药机制，

EGFR酪氨酸激酶抑制剂的研究进展

恶性肿瘤是一种严重危害人类健康的常见病和多发病。每年癌症导致全世界700多万人丧生,其中我国就有100多万人。据估计,2015年全世界将有900万人死于癌症,2030年将增长到1140万人。因此攻克和治愈癌症成为当今各国研究的热点。1863年,Virchow[1]注意到恶性肿瘤组织中血管绝对数急剧增多,血管发生卷曲和扩张,新生血管集中于肿瘤边缘的现象。1971年,Folkman[2]提出肿瘤生长和转移是血管依赖性的,阻断肿瘤血管生成是遏止肿瘤生长的有效策略这一学说。

非小细胞肺癌EGFR酪氨酸激酶抑制剂的耐药机制及逆转

晚期非小细胞肺癌(non-small-cell lung carcinoma,NSCLC)的治疗以含铂双药联合化疗为标准治疗方案,多项研究表明,化疗药物对于NSCLC的疗效已经进入平台期,因此,寻求新的治疗方式已迫在眉睫。表皮生长因子受体(EGFR)在40%～80%的NSCLC中过表达,通过干预EGFR酪氨酸激酶信号转导已成为治疗NSCLC的主要方式。临床应用的EGFR抑制剂主要有EGFR单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)及特异性小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)。目前已证实EGFR-TKI的疗效肯定,但其原发性及继发性耐药是一个不容忽视的问题,且耐药机制复杂。文章对EGFR-TKI在临床中的应用,EGFR突变与TKI敏感性的关系,EGFR-TKI的耐药机制及逆转耐药的方法进行综述。

选择性EGFR酪氨酸激酶抑制剂-吉非替尼

吉非替尼(Gefitinib,ZD1839,Iressa)是一种口服选择性表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂。表皮生长因子受体在一些类型的人类肿瘤细胞中存在过度表达,吉非替尼通过抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶的ATP结合位点发挥抗肿瘤作用。2003年5月经FDA批准上市,用于一线化疗失败的局部晚期或转移性非小细胞肺癌的治疗。

高效高选择性EGFR酪氨酸激酶抑制剂作为抗癌药的合理设计

随着对酪氨酸激酶的亚型血管生长因子受体(EGFR)的功能和结构了解的提高，以及他们在多种癌症的开始和发展中起到的作用，人们开始寻找有可能被证明的癌症治疗中非常重要的信号分子的抑制剂。EGFR的天然混合物为包括增生的，血管原的，侵入的，和转移等方面在内的一系列癌症的治疗中寻找EGFR抑制剂提高了一个潜在的机会。

EGFR酪氨酸激酶及其抑制剂的研究进展

表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)信号通路在肿瘤无限制生长、抗凋亡、侵袭和转移中发挥重要作用。筛选、评估和开发应用EGFR抑制剂已经成为靶向抗肿瘤药物研究的热点和趋势。目前,已有三代小分子EGFR抑制剂被研发并应用于非小细胞肺癌的临床治疗,但经过一段时间的治疗会出现耐药的现象,第四代的小分子EGFR抑制剂正处于研发阶段。本文对具有代表性的EGFR酪氨酸激酶抑制剂的结构、药效及其与EGFR蛋白的相互作用进行了综述,以此推进基于结构的药物设计策略在药物研发中的重要作用。

EGFR基因突变及其预测酪氨酸激酶抑制剂对非小细胞肺癌疗效的作用

肺癌是目前发病率、死亡率最高的肿瘤之一，其中约80％是非小细胞肺癌fnon—smallcellungcancer,NSCLC）．而且大部分患者确诊时已属晚期。尽管手术、化疗、放疗等综合治疗有所进步，但总的治疗效果并不理想。近年来随着分子生物学的进展和对癌症发病机制的深入研究．出现了以特定分子为靶点的抗肿瘤药物。表皮生长因子受体（epidermalgrowtllfactorreceptor．EGFR）在多种上皮肿瘤中过表达．在肿瘤的发生发展中起重要作用．成为抗肿瘤药物的重要靶点之一。目前肺癌分子靶向治疗中研究较多的是以gefitinib（Iressal和erlotinib（Tarceva）为代表的EGFR酪氨酸激酶抑制剂fEGFR—tyrosinekinaseinhibitor。早期临床试验表明,EGFR-TKI）EGFR-TKI在部分化疗耐药的NSCLC中仍然有较好的效果．统计显示EGFR—TKI在女性、腺癌、不吸烟患者和东亚人群中疗效更佳。有研究表明EGFR酪氨酸激酶区突变与TKI疗效密切相关。本文综述了EGFR突变和它在预测EGFR—TKI疗效中的进展。

含3-羟基-4-吡啶酮片段的EGFR酪氨酸激酶抑制剂的合成及抗肿瘤活性研究

目的设计合成含具备铁离子螯合功能的3-羟基-4-吡啶酮片段的4-芳胺基喹唑啉类衍生物,并评价其体外抑制肿瘤增殖活性。方法 4-芳胺基-6-硝基-7-氟喹唑啉与3-苄氧基吡啶-4-酮脂肪醇发生取代反应,再经过硝基还原得到4-芳胺基-6-氨基-7-(3-苄氧基-4-吡啶酮)烷氧基喹唑啉中间体,该中间体与各种酰氯或者酸缩合后再脱去苄基得到目标化合物1~6;4-芳胺基-6-氨基-7-烷氧基喹唑啉与3-苄氧基吡啶-4-酮-1-乙酸经缩合后脱苄基得到目标化合物7~12。采用MTT法,以吉非替尼(gefitinib)为阳性对照药,测定目标化合物对人表皮癌细胞系A431、人肺腺癌细胞系H1975和人宫颈癌细胞系HeLa的增殖抑制活性。结果与结论合成了12个未见文献报道的新化合物,其结构经~1H-NM R、MS谱确证;初步体外生物活性筛选结果显示,该类化合物具有较好的抗肿瘤细胞增殖活性,其中化合物1~4、7~10在人表皮癌A431细胞株上的抗增殖活性与阳性对照吉非替尼相当。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶的克隆表达和酶抑制剂筛选模型的构建

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)属受体酪氨酸激酶(tyrosine kinase,TK)家族,其胞内的酪氨酸激酶在细胞信号转导通路中具有十分重要的作用。许多肿瘤的发生、发展都与EGFR胞内酪氨酸激酶的异常表达密切相关。因此,EGFR胞内酪氨酸激酶的抑制剂有可能成为治疗肿瘤的有效药物。从人脐静脉内皮细胞(HUVEC)提取总RNA,采用RT-PCR获得EGFR酪氨酸激酶催化域的编码基因。将其克隆至载体pET-30a,在E.coliBL21(DE3)中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行了纯化。通过对酶的活性的测定,证明重组EGFR酪氨酸激酶蛋白具有利用ATP催化底物发生磷酸化反应的激酶活性。以该重组激酶为靶位构建了酶抑制剂筛选模型,拟对微生物代谢产物进行筛选。

聚羟基丙烯酸和Van-clear在qRT-PCR法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变中的应用研究

目的比较环保固定液聚羟基丙烯酸、环保透明脱蜡液Van-clear单独或联合替代传统固定液4%中性缓冲甲醛、传统透明脱蜡液二甲苯应用于实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法,检测非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变率的敏感性、特异性及符合率的差异,评估qRT-PCR法及其环保技术平台的临床应用价值。方法选取中山市博爱医院、中山市中医院2013年5月至2016年3月期间手术切除的原发性NSCLC标本91例,同一肿瘤病变部位切取5个样本,采用随机数字表法分为A、B、C、D、E。A组使用4%中性缓冲甲醛固定、二甲苯透明脱蜡制作切片、直接测序法检测EGFR基因突变;B组使用4%中性缓冲甲醛固定、二甲苯透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变;C组使用聚羟基丙烯酸固定、二甲苯透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变;D组使用4%中性缓冲甲醛固定、Van-clear透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变;E组使用聚羟基丙烯酸固定、Van-clear透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变。分别测定5组NSCLC中EGFR基因第18、19、20、21号外显子的突变情况。结果 (1)B、C、D、E组与A组比较,EGFR基因发生突变人数百分率、基因靶位点突变率的差异均无统计学意义(P>0.05);(2)B、C、D、E组与A组比较,EGFR靶位点突变检测结果的灵敏度好、特异度强、符合率高。结论聚羟基丙烯酸、环保透明脱蜡液Van-clear单独或联合替代传统试剂,应用于qRT-PCR法检测NSCLC中EGFR基因突变,与以传统试剂应用于直接测序法的检测结果一致性好,有在临床推广应用的意义和价值。

EGFR-TKIs治疗晚期非小细胞肺癌的研究进展

肺癌是我国及世界各国发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一。在过去的几十年里,预测靶向治疗的致癌驱动基因的识别,推动了肺癌治疗从组织学向分子亚型的彻底转变,从而建立了精确医学的新模式。表皮生长因子受体(EGFR)基因激活突变是2004年在肺癌中发现的第一个分子预测生物标志物,随着EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的研制开发,晚期非小细胞肺癌进入了一个全新的靶向治疗时代。随着EGFR-TKIs类药物的迭代更新,药物的有效性、安全性以及相关的不良反应、耐药以及相互作用都是值得临床深入研究的内容。本文针对上述内容做一综述。

EGFR-TKI在非小细胞肺癌中耐药机制的研究进展

目前,肺癌是全世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占全部肺癌的80%左右,而NSCLC患者中有很大一部分在确诊时已经处于晚期。因此,对于晚期NSCLC的治疗也越来越受到人们的重视。虽然晚期NSCLC的标准治疗为含铂双药联合化疗,但是化疗药物对改善晚期NSCLC患者的生存期方面作用十分有限,因此寻求新的治疗方式迫在眉睫。随着对肺癌发病机制及其生物学行为的深入研究,分子靶向治疗已成为治疗晚期NSCLC最具前景的研究领域。其中表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)在晚期NSCLC治疗方面取得了突破性进展,其代表药物为吉非替尼和厄洛替尼,这两种EGFR-TKIs已在全世界范围内得到认可并被广泛用于晚期NSCLC的治疗,尤其是对于EGFR敏感突变者。然而,经过一段时间(中位时间为6个月-12个月)的治疗后,大部分患者会对EGFR-TKIs产生耐药,其耐药机制主要包括原发性和获得性耐药。由于EGFR-TKIs在改善晚期NSCLC患者总生存期和无进展生存期方面的突出作用,对于EGFR-TKIs耐药机制的探索已成为国内外研究的热点。该文章就EGFR-TKI耐药机制的研究进展进行了综述。

非小细胞肺癌中EGFR和K-ras基因突变与蛋白表达相关性的研究

背景与目的:当前表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因靶向治疗已成为晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗的研究的热点之一。本研究旨在探讨NSCLC患者中EGFR基因和K-ras(Kirsten rat sarcoma viral oncogene)基因突变的情况,分析其与蛋白表达的相关性及对吉非替尼(gefitinib)治疗的指导意义。方法:收集200例NSCLC患者新鲜组织,采用基因测序法检测EGFR及K-ras基因突变的状态;同时采用免疫组织化学法检测EGFR和K-ras蛋白的表达。结果:200例患者中,EGFR基因突变率为33%,主要发生在19号和21号外显子;K-ras基因突变率为5.5%,主要位于第12密码子;不存在同时携带有EGFR和K-ras两种基因突变的病例。腺癌尤其是含细支气管肺泡癌(bronchioloalveolar carcinoma,BAC)病理分型的患者、非吸烟患者和女性患者EGFR突变率较高。EGFR蛋白表达阳性率为16%,与总的EGFR突变无关(P>0.05),但与19号外显子突变具有统计学意义(P<0.05)。K-ras蛋白表达阳性率为52.5%,与K-ras基因突变无关(P>0.05)。15例携带有EGFR基因突变的NSCLC患者服用吉非替尼,12例(其中8例为EGFR蛋白表达阴性)有效。结论:EGFR蛋白表达与EGFR基因19号外显子突变具有一定相关性;联合检测EGFR和K-ras基因突变可用来筛选对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗敏感的人群,并预测吉非替尼治疗晚期NSCLC的疗效及预后。

血清肿瘤标志物与一线EGFR-TKIs治疗晚期EGFR突变型肺腺癌患者疗效相关性分析

背景与目的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)在EGFR突变型肺腺癌人群中能显著提高生存,从而改变了晚期肺癌的治疗模式,但并不是所有EGFR敏感突变者均能从EGFR-TKIs治疗中获益。本研究欲通过外周血肿瘤标志物的检测对突变型肺腺癌患者的靶向治疗进行预测及指导。方法回顾性分析2009年6月-2014年6月于北京大学肿瘤医院胸部肿瘤内一科一线接受EGFR-TKIs治疗的EGFR突变型IIIb期-IV期肺腺癌患者的临床资料,分析其基线肿瘤标志物与EGFR-TKIs疗效及生存的关系。结果总体人群客观有效率(objective response rate,ORR)52.8%,疾病控制率(disease control rate,DCR)89.3%。基线癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)水平升高者对EGFR-TKIs疗效更佳(ORR 61.3%vs35.9%,DCR 95.2%vs 74.4%,P<0.001),治疗1个月后CEA、细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragments,CYFRA21-1)以及CA125水平下降者有效率更高(ORR分别是61.5%vs 25%,P=0.002;58.5%vs 37.5%,P=0.004;61.8%vs 20%,P=0.027)。生存分析中,基线CEA水平正常者较高水平者无进展生存期(progression-free survival,PFS)明显缩短(中位PFS 5.9个月vs 9.8个月,P=0.027),而基线CYFRA21-1、CA125水平升高者PFS明显缩短(中位PFS 9.0个月vs11.4个月,P=0.029;9.0个月vs 11.5个月,P=0.023)。多因素分析显示,美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)评分0-1分、基线CYFRA21-1正常水平、治疗1月后CEA下降阳性患者PFS更长。总生存期(overall survival,OS)与CYFRA21-1、CA125升高有关(中位OS分别为25.1个月vs 52.5个月,P=0.003;22.7个月vs55.0个月,P<0.001),而多因素分析中总生存与CEA下降有关(P=0.046)。结论治疗前高水平CEA以及治疗后CEA下降可以预测晚期肺腺癌患者一线接受EGFR-TKIs的疗效,而治疗前高水平CYFRA21-1以及CA125则预示着生存期缩短。

血清CEA水平与EGFR-TKI治疗晚期非小细胞肺癌疗效及预后分析

目的探讨非小细胞肺癌患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平与EGFR-TKI治疗疗效及预后之间的关系。方法收集88例(腺癌69例,非腺癌19例)经吉非替尼或厄罗替尼治疗、疗效可评价的晚期非小细胞肺癌患者,有完整的血清CEA检测结果,分析CEA水平与EGFR-TKI药物治疗反应及预后之间的关系。结果血清CEA<5 ng/ml者的有效率(CR+PR)为18.2%(6/33),稳定率(SD)为18.2%(6/33),进展率为63.6%(21/33);CEA≥5 ng/ml者的有效率为30.9%(17/55),稳定率为43.6%(24/55),进展率为25.5%(14/55)。2组EGFR-TKI治疗的疗效差异有统计学意义(P=0.003)。血清CEA水平高的患者,服用TKI药物后疗效更好,而较低CEA值的患者效果较差。生存分析结果表明,血清CEA≥5 ng/ml组患者经EGFR-TKI治疗后有更长的无疾病进展时间及生存优势,差异有统计学意义(P=0.020,P=0.019)。结论血清CEA水平可作为预测晚期非小细胞肺癌患者服用EGFR-TKI药物疗效及预后指标。

非小细胞肺癌患者血清CEA水平与EGFR-TKI疗效的关系

背景与目的:靶向治疗药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中的疗效预测评估成为近年来研究的热点之一。本研究旨在探讨NSCLC患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平与EGFR-TKI治疗疗效的关系。方法:收集83例(腺癌67例,非腺癌16例)经吉非替尼或厄罗替尼治疗且疗效可评价的晚期NSCLC患者,有完整的血清CEA检测结果,分析CEA水平与EGFR-TKI药物治疗疗效的关系。结果:血清CEA<5 ng/mL者的有效率(CR+PR)为15.6%(5/32),疾病控制率(CR+PR+SD)为34.4%(11/32);CEA≥5 ng/mL者的有效率为29.4%(15/51),疾病控制率为74.5%(38/51)。两组EGFR-TKI治疗的疗效差异有显著的统计学意义。血清CEA水平高的患者,服用EGFR-TKI药物后疗效更好,而CEA值较低的患者疗效较差。进一步分析血清CEA<5 ng/mL与CEA≥5 ng/mL患者一般临床特征,发现两组患者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清CEA水平可作为预测晚期NSCLC患者服用EGFR-TKI药物的疗效指标。

直接测序法与蝎形探针扩增阻滞突变系统检测肺癌小活检标本EGFR基因突变的比较

背景与目的:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因的突变状态与肺癌患者应用EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)的疗效密切相关。目前,临床上缺乏统一的方法检测EGFR基因突变。本研究旨在探讨直接测序法与蝎形探针扩增阻滞突变系统(scorpions amplification refractory mutation system,scorpions ARMS法)在检测肺癌临床活检小标本EGFR突变时敏感性的差异,以及相关靶向治疗疗效的分析。方法:采用直接测序法和ARMS法共同检测168例石蜡包埋肺癌标本,并随访评估其中行靶向治疗患者的临床疗效。结果:手术标本80例中,直接测序法与ARMS法所检出的突变阳性率分别为18.8%和25.0%,敏感性分别为71.4%和95.2%,差异无统计学意义(P>0.05)。而活检小标本88例中,直接测序法与ARMS法所检出的突变阳性率分别为19.3%和42.0%,敏感性分别为42.5%和92.5%,前者均显著低于后者(P<0.01)。靶向治疗疗效方面,直接测序法与ARMS法野生型患者客观缓解率(objectiveresponse rate,ORR)分别为26.3%和3.8%,前者明显高于后者(P<0.05),而在小活检标本中,直接测序法野生型患者ORR达32.0%。直接测序法野生型患者中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)为4.0个月,明显长于ARMS法野生型患者的1.5个月(P<0.05)。结论:对活检小标本而言,ARMS法较直接测序法的敏感性更高,其检测结果与临床疗效的一致性更好,纤维支气管镜活检等小标本EGFR突变检测更适合用ARMS法。

非小细胞肺癌原发灶与淋巴结转移灶中KRAS和EGFR基因状态的比较及其临床意义

目的:比较表皮生长因子受体(EGFR)基因和KRAS基因在非小细胞肺癌原发灶及其淋巴结转移灶之间突变状态的差异,并分析其与吉非替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)疗效之间的关系。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2010年5月至2010年11月间手术切除的80例NSCLC病例标本,利用直接测序和实时荧光定量PCR的方法分别检测原发灶和相应淋巴结转移灶中EGFR基因第18、19、20、21外显子及KRAS基因第12、13密码子的突变情况;其中5例在淋巴结转移灶中检出EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)敏感型基因突变的患者接受了吉非替尼的新辅助靶向治疗。结果:80例患者中,检出原发灶携带KRAS和EGFR基因突变分别为1例和21例,检出转移灶携带KRAS和EGFR基因突变分别为7例和26例;分别有6例(7.50%)和7例(8.75%)患者其KRAS和EGFR基因状态在原发灶和转移灶之间不一致。直接测序法和实时荧光定量PCR法的检测结果一致。在5例接受吉非替尼治疗的患者中仅1例原发病灶中未检出EGFR-TKI敏感型基因突变,并表现为疾病进展。结论:部分NSCLC患者中KRAS和EGFR的基因状态在肿瘤转移过程中会发生改变,在给予患者靶向治疗时不应忽视这一现象的存在。实时荧光定量PCR法比直接测序法更适用于临床的快速检测工作。

HGF/MET信号通路在非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药性中的研究进展

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌约占80%。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/上皮间质转化因子(mesenchymal-epithelial transition factor,MET)信号通路在许多生物学进程中都发挥着多效性影响,然而,在多种类型的肿瘤中都观察到HGF/MET信号通路的异常激活,并且通过生长因子受体和其他致癌性基因受体通路促进细胞增殖和转移。近年来,HGF/MET信号通路的异常激活被认为是对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)产生耐药的一个重要原因。本文将重点阐述该通路异常激活与非小细胞肺癌患者EGFR-TKI耐药的联系。