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基于紫胶红素的靶标有色化免疫层析试纸条联检大肠杆菌O157∶H7和沙门氏菌
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作者 刘坤 王英林 +1 位作者 黄志强 刘箐 《工业微生物》 CAS 2024年第3期104-110,共7页
为摆脱免疫层析试纸条对配对抗体的依赖,文章设计了一种新型靶标有色化免疫层析试纸条,使用紫胶红素和十二合水硫酸铝钾媒染剂,通过先媒后染的方法,实现了免疫层析试纸条的“可视化”。验证结果显示,该试纸条对大肠杆菌O157∶H7和沙门... 为摆脱免疫层析试纸条对配对抗体的依赖,文章设计了一种新型靶标有色化免疫层析试纸条,使用紫胶红素和十二合水硫酸铝钾媒染剂,通过先媒后染的方法,实现了免疫层析试纸条的“可视化”。验证结果显示,该试纸条对大肠杆菌O157∶H7和沙门氏菌的检测限均达到了106 CFU/mL;同时,与常见食源性致病菌间不存在交叉反应,在鸡胸肉、鸡蛋、牛奶等食品基质中能够在增菌9 h内检出。文章成功设计了一种操作简单、检测成本低,更易国产化的快速检测免疫层析试纸条,为后续免疫层析试纸条的设计提供了新思路。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157h7 沙门氏菌 紫胶红素 靶标有色化 免疫层析试纸条
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安徽省114株EHECO_(157)∶H_7菌株毒力因子基因的初步分析 被引量:2
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作者 胡万富 贾嘉 +1 位作者 虞勇 陆美娟 《疾病监测》 CAS 2003年第10期367-369,共3页
目的 对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7(EHECO1 57∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7的毒力特征和致病特性。方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO1 57∶H7的两种重要的... 目的 对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7(EHECO1 57∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7的毒力特征和致病特性。方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO1 57∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论 检测结果显示 ,有 6 3 2 %的EHECO1 57∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33 3% ,说明分离的EHECO1 57∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中 ,有 14 0 %的菌株在 2 4h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18 8% ,显著低于不发酵菌株的 70 4 % 。 展开更多
关键词 安徽 eheco157:h7 毒力因子 基因缺失 基因携带率 肠出血性大肠杆菌 聚合酶链反应
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一株与EHECO_(157):H_7诊断血清交叉凝集的维罗纳气单胞菌温和生物变种的分离鉴定 被引量:6
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作者 李刚山 范泉水 +3 位作者 朱姝媛 周卫国 龙沛然 邱薇 《解放军预防医学杂志》 CAS 北大核心 2005年第3期219-220,共2页
目的对检出引起腹泻的新病原菌进行分离鉴定,为腹泻病原学理论及腹泻病因的防治提供依据。方法采取在SMAC上分离获纯培养菌、血清学检验、药敏试验和电子显微镜观察形态,以及微生物鉴定仪进行系统生化鉴定的方法。结果检出1株氧化酶阳... 目的对检出引起腹泻的新病原菌进行分离鉴定,为腹泻病原学理论及腹泻病因的防治提供依据。方法采取在SMAC上分离获纯培养菌、血清学检验、药敏试验和电子显微镜观察形态,以及微生物鉴定仪进行系统生化鉴定的方法。结果检出1株氧化酶阳性且能与EHECO157:H7诊断血清发生强凝集反应的维罗纳气单胞菌温和生物变种。结论该菌株的发现提示在分离EHECO157:H7时,为避免出现假阳性,必须进行系统化鉴定,以确保菌株鉴定的准确性。 展开更多
关键词 维罗纳气单胞菌温和生物变种 肠道病原菌 EhEC O157:h7诊断血清
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发酵山梨醇的EHECO_(157):H_7的分离 被引量:1
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作者 许龙岩 王志强 +3 位作者 翁文川 胡科锋 黄美婵 谢均宪 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期964-965,共2页
关键词 发酵山梨醇 EhEC-O157:h7 肠出血性大肠杆菌 生化实验 血清学实验 毒力实验
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EHECO157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC)的表达纯化及免疫检测的初步应用 被引量:2
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作者 罗云 易勇 +3 位作者 毛旭虎 邹全明 肖敏 敬华 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第8期1473-1476,1555,共5页
目的:克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC),摸索其免疫检测的初步应用。方法:设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增紧密粘附素胞外特异性片段的编码基因eaeC,T-A克隆后构建原核表达质... 目的:克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC),摸索其免疫检测的初步应用。方法:设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增紧密粘附素胞外特异性片段的编码基因eaeC,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-21a(+)-eaeC,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测。目的蛋白经包涵体洗涤,使用含谷胱甘肽氧化还原系统的复性缓冲液进行稀释并结合透析复性后,再用阴离子交换柱Resource Q和分子筛柱Superdex200进行纯化。将所得高纯度目的蛋白包被ELISA酶标板,对实验动物的免疫血清进行检测。结果:PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增出了约570 bp的目的片段;原核表达质粒pET-21a(+)-eaeC经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E.coliBL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约35%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20×103,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达。包涵体复性后目的蛋白纯化效果明显,高纯度的intiminC蛋白包被ELISA板,对实验室动物免疫血清的检测效果良好。结论:EHEC O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段经基因克隆后获得了较好的表达,复性纯化后获得高纯度的目的蛋白intiminC,在此基础上建立的ELISA检测方法对实验室动物免疫血清的检测效果良好。为进一步的人血清抗体检测及EHEC O157:H7感染的流行病学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌(EhEC)O157:h7 紧密粘附素 克隆表达 免疫检测
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食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测技术研究进展 被引量:4
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作者 周炳武 于泽 +5 位作者 闫兆伦 刘雨涵 侯嘉欣 刘晓倩 谢婧宜 刘晔 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第1期303-313,共11页
近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌(E.coli)O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全... 近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌(E.coli)O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全问题有着重要的意义,是预防和控制食源性疾病传播的重要技术,为此本文对E.coli O157∶H7的常规检测方法、免疫学法、分子生物学法和其他方法进行论述,介绍了这些方法的优缺点,对各种方法进行了整体比较,以期为有关工作者在选择检测方法或研发新方法提供参考。 展开更多
关键词 食源性致病菌 大肠杆菌O157h7 食品安全 检测方法
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EHECO157∶H7基因文库中含eae基因的LEE克隆子的筛选
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作者 李文全 俞守义 王红 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期1097-1098,共2页
PCR扩增EHECO15 7∶H7eae基因的特异片段并制成杂交探针 ,采用斑点杂交和酶切方法从自构建的基因文库中筛选不含SmaⅠ的LEE片段。结果筛选到长约 2 3kb的LEE片段。表明筛选片段长度与预测不符 ,可能存在变异 。
关键词 出血性大肠杆菌O157:h7 肠细胞 粘附 消除 基因筛选
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基于分子生物学方法的食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7检测技术研究进展
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作者 孙千雪 周炳武 +3 位作者 王婷 蔡琳雅 胡珊珊 刘晔 《粮食与油脂》 北大核心 2024年第11期6-13,共8页
对检测大肠杆菌O157∶H7(E.coli O157∶H7)的预富集技术和聚合酶链式反应(PCR)技术、等温扩增技术、基于成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白质系统(CRISPR/Cas)的技术等分子生物学方法进行论述,介绍了这些方法在E.coli O157∶H7检测... 对检测大肠杆菌O157∶H7(E.coli O157∶H7)的预富集技术和聚合酶链式反应(PCR)技术、等温扩增技术、基于成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白质系统(CRISPR/Cas)的技术等分子生物学方法进行论述,介绍了这些方法在E.coli O157∶H7检测中的研究进展,并对其检出限和靶基因等进行了比较,以期为E.coli O157∶H7的快速检测提供参考依据。 展开更多
关键词 食源性致病菌 大肠杆菌O157h7 分子生物学检测方法
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Antibacterial mechanism of kojic acid and tea polyphenols against Escherichia coli O157:H7 through transcriptomic analysis 被引量:1
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作者 Yilin Lin Ruifei Wang +4 位作者 Xiaoqing Li Keren Agyekumwaa Addo Meimei Fang Yehui Zhang Yigang Yu 《Food Science and Human Wellness》 SCIE CSCD 2024年第2期736-747,共12页
Escherichia coli O157:H7 is one of the major foodborne pathogenic bacterial that cause infectious diseases in humans.The previous found that a combination of kojic acid and tea polyphenols exhibited better activity ag... Escherichia coli O157:H7 is one of the major foodborne pathogenic bacterial that cause infectious diseases in humans.The previous found that a combination of kojic acid and tea polyphenols exhibited better activity against E.coli O157:H7 than using either alone.This study aimed to explore responses underlying the antibacterial mechanisms of kojic acid and tea polyphenols from the gene level.The functional enrichment analysis by comparing kojic acid and tea polyphenols individually or synergistically against E.coli O157:H7 found that acid resistance systems in kojic acid were activated,and the cell membrane and genomic DNA were destructed in the cells,resulting in“oxygen starvation”.The oxidative stress response triggered by tea polyphenols inhibited both sulfur uptake and the synthesis of ATP,which affected the bacteria's life metabolic process.Interestingly,we found that kojic acid combined with tea polyphenols hindered the uptake of iron that played an essential role in the synthesis of DNA,respiration,tricarboxylic acid cycle.The results suggested that the iron uptake pathways may represent a novel approach for kojic acid and tea polyphenols synergistically against E.coli O157:H7 and provided a theoretical basis for bacterial pathogen control in the food industry. 展开更多
关键词 Kojic acid Tea polyphenols Antibacterial mechanism Escherichia coli O157:h7 RNA-SEQ
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EHECO157∶H7粘附Caco-2细胞缺陷突变株的构建
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作者 杜春明 车会莲 李蓉 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第10期1169-1172,共4页
目的:构建对肠上皮细胞粘附缺陷的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(EHEC O157)突变株,为体内、体外研究其粘附机制提供可用工具。方法:将pSC101和m in i-Tn5Km2分别通过转化和结合导入O157Sakai菌株中,筛选粘附力缺陷的转化子感染Caco-2细胞... 目的:构建对肠上皮细胞粘附缺陷的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(EHEC O157)突变株,为体内、体外研究其粘附机制提供可用工具。方法:将pSC101和m in i-Tn5Km2分别通过转化和结合导入O157Sakai菌株中,筛选粘附力缺陷的转化子感染Caco-2细胞株,观察Caco-2单层细胞中的微菌落数量和m in i-Tn5Km2插入位点。结果:经诱变,共分离到3组粘附缺陷突变株,1组完全丧失了粘附力,2组粘附力减弱,3组的粘附力更弱。1组和3组拥有LEE岛上多基因的转座子插入,而2组m in i-Tn5Km2的插入位点在LEE岛之外。结论:O157Sakai的肠道粘附能力可能与LEE岛的III型分泌系统有关。 展开更多
关键词 肠出血性大肠埃希菌O157:h7 粘附 LEE岛
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动物宿主的EHECO_(157)H_7带菌调查 被引量:1
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作者 李丽萍 杜敏 +3 位作者 韩秀兰 徐保宏 候通 张弘 《中国卫生检验杂志》 CAS 2001年第3期358-359,共2页
关键词 动物宿主 eheco157h7带菌调查 食源性疾病 病原体
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大肠杆菌O157:H7烈性噬菌体SF08的分离、表征及在食品中的应用
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作者 后鹏飞 连军强 +5 位作者 向丹 黄静 罗丹 唐人杰 童武林 苏柳 《食品与发酵科技》 CAS 2024年第3期1-6,54,共7页
本研究通过双层平板法从湖水中分离、纯化出一株大肠杆菌O157:H7烈性噬菌体,并命名为SF08。对其生物学特性、基因组序列及在即食鸡爪中的抑菌效果进行分析。结果表明,SF08由长约124 nm的可收缩尾巴和直径约76 nm的多面体头部组成。最佳... 本研究通过双层平板法从湖水中分离、纯化出一株大肠杆菌O157:H7烈性噬菌体,并命名为SF08。对其生物学特性、基因组序列及在即食鸡爪中的抑菌效果进行分析。结果表明,SF08由长约124 nm的可收缩尾巴和直径约76 nm的多面体头部组成。最佳感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)为0.01;潜伏期为20 min,裂解期为20~110 min,爆发量为66 PFU/cell;在pH 3~12和30~70℃条件下能保持较高的活性。基因组全长59704 bp,G+C含量为56.52%,共有72个开放阅读框(ORF)。SF08在4℃下可以极显著地抑制即食鸡爪中模拟污染的大肠杆菌O157:H7(P<0.01)。本研究表明SF08具有较好的生物学特性及安全性,为后续研发和制备天然杀菌剂提供理论基础和参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:h7 噬菌体 生物学特性 全基因组分析
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辽宁地区猪源大肠埃希菌O157:H7的流行病学调查和耐药性分析
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作者 徐茜 《养猪》 2024年第4期68-69,共2页
猪源大肠埃希菌O157:H7是一种新型的人畜共患致病性大肠埃希菌[1],可通过污染的牛肉、奶制品、蔬菜、水果等途径感染人类或畜禽。不仅严重危害生猪养殖业的发展,而且对人类的健康也构成巨大威胁,人感染后主要表现为腹泻、出血性肠炎、... 猪源大肠埃希菌O157:H7是一种新型的人畜共患致病性大肠埃希菌[1],可通过污染的牛肉、奶制品、蔬菜、水果等途径感染人类或畜禽。不仅严重危害生猪养殖业的发展,而且对人类的健康也构成巨大威胁,人感染后主要表现为腹泻、出血性肠炎、溶血性尿毒综合征、血栓性血小板减少性紫癜等症状。众多动物食品污染源中,猪是其最重要宿主之一。本文从辽宁省9个地区的无害化处理厂、生猪养殖场和生猪屠宰场采集猪肛门拭子900份,进行大肠埃希菌O157:H7分离鉴定以及耐药性分析,为了解辽宁地区猪大肠埃希菌O157:H7的感染情况提供基础数据。 展开更多
关键词 猪源大肠埃希菌O157:h7 流行病学 分离鉴定
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一种可快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器的制备与应用
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作者 王晓颖 施锦辉 +3 位作者 王金娟 戴晗祎 郭骁驹 王晓惠 《现代食品》 2024年第3期173-177,共5页
大肠杆菌O157:H7是一种致病性较强的食源性细菌,通常在生制食品中被检出,一旦被人体摄入会引发肠道疾病,严重危害公众健康。本研究制备了功能化的长余辉探针,并结合适配体的特异性识别功能构建了能快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器... 大肠杆菌O157:H7是一种致病性较强的食源性细菌,通常在生制食品中被检出,一旦被人体摄入会引发肠道疾病,严重危害公众健康。本研究制备了功能化的长余辉探针,并结合适配体的特异性识别功能构建了能快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器,检出限达7.5×10^(3) CFU·mL^(-1)。该传感器可同时检测3个样品,具有特异性好、操作简便和环境友好的特点,可应用于大量样品中大肠杆菌O157:H7的快速筛查。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:h7 长余辉探针 纸基传感器 快速筛查
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不同方法检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7/HM能力验证结果比较与分析
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作者 燕妮 段鹏 杨雅珺 《甘肃科技》 2024年第1期70-73,共4页
为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃... 为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157∶H7/NM检验》(GB 4789.36—2016)中的第一法和实时荧光PCR方法,分别对能力验证样品进行检测。结果显示,样品23-G520中未检出大肠埃希氏菌O157∶H7;样品23-F568中检出大肠埃希氏菌O157∶H7,结果反馈为满意。在能力验证实验中,不同检测方法同时使用、综合判断,能有效提高检测能力和结果的准确性。 展开更多
关键词 能力验证 大肠埃希氏菌O157:h7 实时荧光PCR
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北京市食品(生禽畜肉及奶制品)中EHECO_(157):H_7及ESIEC污染状况调查研究 被引量:1
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作者 陈倩 田建新 +2 位作者 贾珍珍 刘雪云 陆峥 《中国卫生检验杂志》 CAS 2000年第5期547-550,共4页
关键词 北京市 食品 ESIEC病原体 污染 eheco157:h7
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应用免疫磁珠法分离大肠杆菌O_(157)H_7 被引量:16
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作者 赵文彬 周克捷 +2 位作者 李家富 李莉 林红玉 《现代预防医学》 CAS 2000年第3期331-332,共2页
目的 :进一步探讨免疫磁珠法 (IMS)分离大肠杆菌 O1 5 7H7(E.O1 5 7H7)的敏感性。方法 :应用 IMS检测该菌的主要贮存宿主动物 (家禽、家畜 ) E.O1 5 7H7感染情况 ,同时用传统分离法作对照。结果 :家禽 (畜 )粪便中 E.O1 5 7H7分离率分... 目的 :进一步探讨免疫磁珠法 (IMS)分离大肠杆菌 O1 5 7H7(E.O1 5 7H7)的敏感性。方法 :应用 IMS检测该菌的主要贮存宿主动物 (家禽、家畜 ) E.O1 5 7H7感染情况 ,同时用传统分离法作对照。结果 :家禽 (畜 )粪便中 E.O1 5 7H7分离率分别为鸡 2 .38% (2 / 84)、牛 9.5 2 % (4 / 42 )、猪 2 .41% (2 / 83) ,鸭、鹅、狗、驴和羊的粪便中未分离到 E.O1 5 7H7;传统法均未从上述家禽 (畜 )粪便中分离到 E.O1 5 7H7。结论 :据本次检测结果 ,表明 IMS分离 O1 5 7能提高检测的灵敏度 (检测水平为 2 cfu/ g,传统法为 2 0 0 cfu/ g) ,并缩短检测时间 1天 ,是开展 E.O1 5 7H7病原学分离 (包括人间和宿主动物的流行病学监测 ) 展开更多
关键词 免疫磁珠法 大肠杆菌O157h7 分离
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免疫磁分离结合胶体金免疫层析法快速检测大肠杆菌O157∶H7 被引量:36
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作者 崔希 熊齐荣 +2 位作者 熊勇华 山珊 赖卫华 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1812-1816,共5页
以抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体偶联磁珠制得免疫磁珠;以胶体金标记的抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体为标记抗体,抗大肠杆菌O157∶H7多克隆抗体和驴抗鼠二抗分别作为检测线和质控线成分制备胶体金免疫层析试纸条。将免疫磁珠分离和胶体... 以抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体偶联磁珠制得免疫磁珠;以胶体金标记的抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体为标记抗体,抗大肠杆菌O157∶H7多克隆抗体和驴抗鼠二抗分别作为检测线和质控线成分制备胶体金免疫层析试纸条。将免疫磁珠分离和胶体金免疫层析法相结合应用于大肠杆菌O157∶H7的现场快速检测中。结果表明:1 mL 7.6×103CFU/mL菌液经过免疫磁珠分离富集后,用胶体金免疫层析法检测可得到阳性结果。对于10 CFU/g大肠杆菌O157∶H7污染的食品样本,经过6 h预增菌,免疫磁珠分离和胶体金试纸条检测72 min即可检出。本方法的建立对于食品中有害物质的现场快速检测具有重要意义。 展开更多
关键词 免疫磁分离 胶体金 免疫层析 大肠杆菌O157 h7
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上海市动物及其产品中大肠埃希菌O157:H7带菌情况的调查 被引量:11
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作者 王建 沈莉萍 +3 位作者 刘佩红 周锦萍 徐锋 薛霞 《动物医学进展》 CSCD 2005年第4期87-90,共4页
为了解上海市动物及动物产品中大肠埃希菌O 157∶H 7带菌情况及其毒力采集上海市猪、牛等动物粪便以及市场和超市猪肉、牛肉、牛奶、虾仁等样本568 份,应用免疫胶体金技术、分离培养、形态特征观察生化特性鉴定、血清学试验、多重引物PC... 为了解上海市动物及动物产品中大肠埃希菌O 157∶H 7带菌情况及其毒力采集上海市猪、牛等动物粪便以及市场和超市猪肉、牛肉、牛奶、虾仁等样本568 份,应用免疫胶体金技术、分离培养、形态特征观察生化特性鉴定、血清学试验、多重引物PCR进行大肠埃希菌O 157∶H 7的分离、鉴定及毒力基因分析。结果表明,上海市动物及动物产品中存在大肠埃希菌O 157∶H 7,检出率为2.05%。其中牛粪、猪粪中检出率较高,分别为9.76%和8.57%。 展开更多
关键词 大肠埃希菌O157:h7 动物及动物产品 带菌率 毒力
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大肠杆菌O157:H7特异基因的实时荧光定量PCR检测 被引量:28
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作者 胡慧 陈雅君 +5 位作者 段志刚 孟振北 彭新然 张龙现 崔保安 王亚宾 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第12期278-282,共5页
为建立快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chainreaction,RT-PCR)方法,针对大肠杆菌O157:H7的特异基因rfbE设计一对特异引物,建立SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,并进行灵敏度、重... 为建立快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chainreaction,RT-PCR)方法,针对大肠杆菌O157:H7的特异基因rfbE设计一对特异引物,建立SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,并进行灵敏度、重复性和特异性实验,同时与常规PCR方法进行比较。结果显示所建立的SYBRGreenⅠ实时定量PCR方法可以快速、特异地检测出大肠杆菌O157:H7,细菌纯培养物中其灵敏度可达2×101CFU/mL,临床模拟污染肉样中能最低能检测到1×102CFU/mL的大肠杆菌O157:H7。与常规PCR方法相比,SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法对临床样品中大肠杆菌O157:H7的检出率大大提高。本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术能快速准确、特异、敏感地检测大肠杆菌O157:H7。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:h7 rfbE基因 SYBR GreenⅠ 实时PCR
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