EHT1864对低氧诱导内皮细胞的影响和机制研究

目的探讨Rac抑制剂EHT 1864对低氧诱导的内皮细胞凋亡和氧化应激的影响。方法在低氧和正常氧的情况加入EHT 1864孵育HUVECs(人脐静脉内皮细胞)24 h,CCK-8(细胞增殖-毒性检测试剂盒)法检测细胞活性,DCFH-DA(二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯)荧光探针检测活性氧簇(ROS)水平,TUNEL(原位缺口末端标记法)染色观察细胞凋亡水平,免疫印迹法检测氧化应激、凋亡及相关通路蛋白的表达。结果培养处理24 h后,低氧刺激组细胞促氧化因子Gp91、p47 phox蛋白表达及凋亡水平高于正常氧浓度组,而抗氧化因子SOD2蛋白表达低于正常氧浓度组,差异均有统计学意义(P<0.05);而EHT 1864处理后能抑制低氧诱导的炎症和凋亡因子表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论EHT1864能够通过AMPKα-NOXs信号通路改善低氧诱导的内皮细胞氧化应激及凋亡。

Rac1通过调控JAK2/STAT1信号通路参与神经炎症

目的研究BV2小胶质细胞上Ras相关C3肉毒菌素物底物1(ras-related C3 botulinum toxin, Rac1)参与神经炎症的作用。方法采用脂多糖(lipopcly saccharide, LPS)诱导BV2小胶质细胞,加入Rac1抑制剂EHT1864,用MTT法检测细胞活力;G-LISA和免疫荧光检测Rac1活性的变化;荧光酶标仪检测ROS的含量,Griess试剂法检测一氧化氮的含量以及酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)和前列腺素E_(2)(prostaglandin E_(2),PGE_(2))的含量;Western blot法检测环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的表达,观察神经炎症反应的变化。结果 LPS诱导BV2小胶质细胞细胞后,Rac1的活性升高,炎症反应增强;当给予Rac1抑制剂EHT1864后,LPS诱导的炎症反应减轻,表现为炎症蛋白(COX-2和iNOS)的表达减少以及炎症因子(ROS、NO、TNF-α和PGE_(2))的释放减少。初步机制研究发现EHT1864能抑制Janus激酶2信号转导和转录激活因子1(Janus kinase 2 signal transducers and activators of transcription, JAK2/STAT1)炎症信号通路的激活。结论在小胶质细胞上,Rac1通过调控JAK2/STAT1信号通路参与神经炎症。