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马疱疹病毒8型gD蛋白的生物信息学分析及多克隆抗体制备
1
作者
徐萌
郗灿坤
+7 位作者
王天娇
李瑞博
丁相丹
孙祺
胡乐玉
任慧英
李亮亮
王彤彤
《动物医学进展》
北大核心
2023年第8期11-16,共6页
旨在探索马疱疹病毒8型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)囊膜蛋白gD的生物信息学特性、原核表达和多克隆抗体制备。用生物信息学分析软件对gD基因编码蛋白质的理化性质、亲/疏水性和跨膜区进行分析,以EHV-8 SDLC66毒株为模板,通过PCR...
旨在探索马疱疹病毒8型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)囊膜蛋白gD的生物信息学特性、原核表达和多克隆抗体制备。用生物信息学分析软件对gD基因编码蛋白质的理化性质、亲/疏水性和跨膜区进行分析,以EHV-8 SDLC66毒株为模板,通过PCR扩增gD蛋白的胞外区并克隆至pET-32a(+)载体中,将重组质粒pET-32a-gD转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,收集菌体超声破碎,纯化并获得重组gD蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,用间接ELISA测定所制备多克隆抗体的效价,同时用Western blot与间接免疫荧光试验(IFA)明确所制备多克隆抗体的特异性。结果表明,EHV-8 gD编码的蛋白稳定,是亲水性蛋白,有跨膜区,位于30-330 aa。gD蛋白跨膜区正确克隆入pET-32a(+)载体,获得重组质粒pET-32a-gD。重组gD蛋白在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,分子质量约为55 ku,将其纯化后免疫新西兰兔获得抗gD多克隆抗体,该抗体的效价高达1∶200 000,Western blot与IFA结果表明该多克隆抗体具有良好的特异性。
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关键词
马疱疹病毒
8
型
囊膜蛋白gD
生物信息学分析
多克隆抗体
原核表达
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职称材料
题名
马疱疹病毒8型gD蛋白的生物信息学分析及多克隆抗体制备
1
作者
徐萌
郗灿坤
王天娇
李瑞博
丁相丹
孙祺
胡乐玉
任慧英
李亮亮
王彤彤
机构
聊城大学毛驴高效繁育与生态饲养研究院
青岛农业大学动物医学院
出处
《动物医学进展》
北大核心
2023年第8期11-16,共6页
基金
聊城大学大学生创新项目(CXCY2022121,CXCY2022250,CYCX2022434)
国家自然科学基金(32002248)
山东省自然科学基金(ZR2020QC016,ZR2020QC017)。
文摘
旨在探索马疱疹病毒8型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)囊膜蛋白gD的生物信息学特性、原核表达和多克隆抗体制备。用生物信息学分析软件对gD基因编码蛋白质的理化性质、亲/疏水性和跨膜区进行分析,以EHV-8 SDLC66毒株为模板,通过PCR扩增gD蛋白的胞外区并克隆至pET-32a(+)载体中,将重组质粒pET-32a-gD转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,收集菌体超声破碎,纯化并获得重组gD蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,用间接ELISA测定所制备多克隆抗体的效价,同时用Western blot与间接免疫荧光试验(IFA)明确所制备多克隆抗体的特异性。结果表明,EHV-8 gD编码的蛋白稳定,是亲水性蛋白,有跨膜区,位于30-330 aa。gD蛋白跨膜区正确克隆入pET-32a(+)载体,获得重组质粒pET-32a-gD。重组gD蛋白在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,分子质量约为55 ku,将其纯化后免疫新西兰兔获得抗gD多克隆抗体,该抗体的效价高达1∶200 000,Western blot与IFA结果表明该多克隆抗体具有良好的特异性。
关键词
马疱疹病毒
8
型
囊膜蛋白gD
生物信息学分析
多克隆抗体
原核表达
Keywords
ehv-8
envelope protein gD
bioinformatic analysis
polyclonal antibody
分类号
S852.652 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马疱疹病毒8型gD蛋白的生物信息学分析及多克隆抗体制备
徐萌
郗灿坤
王天娇
李瑞博
丁相丹
孙祺
胡乐玉
任慧英
李亮亮
王彤彤
《动物医学进展》
北大核心
2023
0
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