FN-EIIIA肽段表达与皮肤损伤时间推断研究

目的 在mRNA研究的基础上,研究大鼠皮肤挫伤后含EIIIA□段的Fn蛋白水平表达与损伤时间关系。方法片段特异性单克隆抗体免疫组织化学染色。结果伤后6h表皮细胞、毛囊上皮细胞等出现棕黄色阳性染色颗粒,并随损伤时间延长染色加深。结论Fn-EIIIA片段检测可用于法医学生前伤确认和损伤时间推断。

Fn-EIIIA金标试纸条进行损伤时间推断的效果评价

目的评价Fn-EIIIA金标单克隆抗体试纸条在人体皮肤组织损伤时间推断中的有效性和灵敏度。方法提取不同损伤时间人体皮肤组织,匀浆,用Fn-EIIIA金标单克隆抗体试纸条检测其Fn-EIIIA的表达,对其结果进行评价;同时,将大鼠挫伤皮肤组织置于自然环境中,分别提取不同自溶时间段的皮肤样本进行检测,对自溶变化对检测结果的影响进行观察。结果正常皮肤组织样本中试纸条检测线不显色,损伤1h后即显色,随损伤时间延长,试纸条检测线有显色逐渐加深的趋势;在观察时间段内,组织自溶对检测结果无显著影响。结论Fn-EIIIA金标单克隆抗体试纸条可作为法医学损伤时间推断敏感、稳定的检测手段。

代谢组学技术结合机器学习算法在损伤时间推断中的研究进展

损伤时间推断是法医学实践中的重要内容,准确推断损伤时间是国内外法医学者亟待解决的科学问题。代谢组学技术可以有效检测机体受到体内外刺激因素作用产生的内源性代谢物,描述生物体内代谢物的动态变化,具有操作性强、检测效率高、定量结果 准确等优势。机器学习算法对高维数据集的处理具有独特优势,能够有效挖掘生物信息,真实反映机体生理、疾病或损伤状态,是高效处理高通量大数据的新型技术手段。本文综述了代谢组学技术与机器学习算法的研究现状和自身优势,探讨应用代谢组学技术结合机器学习算法在法医学损伤时间推断研究中的应用前景,为法医学损伤时间推断研究提供新思路。

用GFAP和VIM表达推断脑损伤时间的实验研究

用落体撞击法复制大鼠闭合性脑损伤模型 ,经免疫组化法观察脑挫伤后不同时间GFAP、VIM的相关改变 ,并对其阳性细胞面积进行图像分析及统计学处理 ,旨在得出脑挫伤后GFAP、VIM表达的动态变化规律 ,为推断脑损伤时间的研究提供理论参考。结果显示 :GFAP阳性细胞在伤后 12h开始表达 ,7d达高峰 ,阳性细胞面积较对照组有显著差异 (P <0 0 1) ;VIM阳性细胞在伤后 3d开始表达 ,5d达高峰 ,阳性细胞面积较 3d组有显著差异 (P <0 0 5 )。GFAP及VIM阳性细胞均为星形胶质细胞 ,在损伤部位上 ,GFAP较VIM更为广泛 ,且反应更强烈。提示可用GFAP。

大鼠皮肤创伤后EⅢA-FN mRNA表达与损伤时间推断研究

目的研究皮肤创伤后不同时间纤连蛋白剪接方式变化及EⅢA剪接异型体的表达。方法提取伤区组织总RNA,RT-PCR方法扩增目的条带。结果大鼠皮肤损伤后表达出正常组织中没有的EⅢA+(526bp)片段,其中伤后1h该条带肉眼可辨认,在伤后24h内,随损伤时间延长其条带亮度相应升高。结论EⅢA-FN剪接异型体表达变化可为法医学损伤时间推断较理想指标。

Fas蛋白表达与大鼠脑损伤时间推断的研究

目的:探讨Fas蛋白在大鼠脑损伤后不同时间的表达规律。方法:建立大鼠脑损伤模型。应用免疫组织化学染色方法和图片分析软件Image-ProPlus6.0对脑损伤后不同时段皮质和海马区的Fas蛋白表达进行检测,并做Fas表达高峰时的稳定性实验。结果:伤后0.5 h Fas开始表达,此后浓度逐渐升高,至伤后48 h达峰值,其后开始下降,至伤后14 d左右表达基本消失。结论:Fas有望成为脑损伤后损伤时间推断的可靠指标。

不同功能基因mRNA推断损伤时间的指标同质性

目的探索大鼠骨骼肌挫伤后PUM2、TAB2、Cx45、CHRNA1四个不同功能基因mRNA表达在个体间的同质性高低。方法利用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测上述PUM2、TAB2、Cx45、CHRNA1 mRNA的相对表达量,计算每个损伤组不同个体间的相对表达量的变异系数(coefficient of variation,CV),并比较CV极值、累积变异度、集中趋势(XCV)和离散趋势(CVCV)。结果 PUM2、TAB2 mRNA在多个时间点出现较大CV,而Cx45、CHRNA1 mRNA的CV较小。累积变异度从大到小依次为PUM2 mRNA、CHRNA1 mRNA、TAB2 mRNA和Cx45 mRNA。PUM2 mRNA相对表达量的CVCV高于TAB2、Cx45、CHRNA1 mRNA的相对表达量(P<0.05)。TAB2、CHRNA1、Cx45 mRNA间相对表达量的CVCV差异无统计学意义(P>0.05)。结论参与生物过程调控作用的PUM2、CHRNA1 mRNA相对表达量个体间同质性最低,其次为TAB2 mRNA,参与细胞结构组成的Cx45、CHRNA1 mRNA相对表达量个体间同质性较高,在今后筛选用于损伤时间推断的mRNA指标时应注意其功能分类。

创缘周围血管生成在皮肤损伤时间推断中的应用

皮肤损伤时间推断一直以来都是法医病理学者所需解决的重要问题,免疫组织化学技术具有方便、敏感的特性,它的应用大大提高了皮肤损伤时间推断研究的发展。然而,有效指标的缺乏却限制了免疫组织化学技术的应用。血管生成在皮肤损伤愈合过程中发挥着非常重要的作用,因此,血管生成相关因子可能在皮肤损伤时间推断方面具有重要价值。

荧光原位杂交技术在推断皮肤损伤时间中的应用研究

目的应用荧光原位杂交技术检测大鼠皮肤挫伤后细胞间粘附因子-1(ICAM-1)mRNA表达,分析其与损伤时间的关系。方法建立大鼠皮肤挫伤模型,分别取挫伤后0.5h、1h、6h、12h、18h、24h、30h、36h皮肤组织及正常对照组皮肤。冰冻切片后进行荧光原位杂交,激光共聚焦显微镜观察、拍照,采用Image-proplus进行结果分析。结果大鼠皮肤挫伤后I-CAM-1mRNA在真皮层可见绿色荧光杂交点,其表达量在损伤后0.5h达到峰值,24h下降至正常对照组的2.25倍,随后又开始升高。结论FISH技术检测大鼠皮肤挫伤后36h内ICAM-1mRNA的表达有一定时间规律性,可望作为推断皮肤早期损伤时间的指标之一。

探讨脑细胞Bcl-2、Fas的表达推断脑损伤时间

目的 探讨脑挫伤后细胞凋亡相关基因Bcl -2、Fas表达的变化规律推断脑损伤时间。 方法 通过组织学和免疫组织化学法 (SP法 )观察、分析大鼠脑挫伤早期脑组织病理形态学改变及Bcl -2、Fas表达的变化规律。 结果 伤后 3 0min在脑挫伤周围神经细胞可见Bcl -2、Fas阳性表达 ,以后呈上升趋势 ,并且范围逐渐扩大 ,其中Bcl -2蛋白表达在 6h达高峰 ,随着呈下降趋势 ,8h后可见典型的凋亡神经细胞。

应用中性粒细胞迁移距离推断损伤时间

目的探索中性粒细胞迁移距离在大鼠骨骼肌损伤时间推断中的应用,为后续损伤时间推断研究提供方法学依据。方法建立大鼠骨骼肌挫伤模型,设置对照组和损伤后2、4、6h组,采用免疫组织化学染色技术检测损伤后中性粒细胞参与炎症的反应规律,运用TissueFAXS PLUS软件检测中性粒细胞的迁移距离,并探讨其与损伤时间的关系。结果骨骼肌损伤后2～6h中性粒细胞浸润明显,伤后2h中性粒细胞阳性率为(28.75±0.94)%,伤后4h达到峰值[(45.50±3.63)%],伤后6h下降为(31.92±1.56)%。中性粒细胞迁移距离随炎症进展逐渐增大,伤后2、4、6h分别为(124.80±12.32)μm、(229.03±21.45)μm、(335.04±16.75)μm。结论骨骼肌损伤后2～6h,中性粒细胞的数量及迁移距离与损伤时间之间存在相关性,有望用于骨骼肌早期损伤时间推断。

IL-33在小鼠皮肤创伤后损伤时间推断中的作用

目的通过观察白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)在皮肤创伤后的时序性变化规律,探讨IL-33在法医学实践中用于损伤时间推断的应用价值。方法利用直径为5mm的圆形锉刀在小鼠背部建造皮肤损伤模型,于伤后1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d取损伤处组织,对照组在与创伤组小鼠相同部位取同等大小的皮肤样本。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察皮肤创伤后愈合过程中的形态学变化,通过Western印迹法、免疫组织化学染色和双重免疫荧光染色法检测皮肤创伤样本IL-33的表达变化。结果Western印迹法结果显示,伤后3h,IL-33蛋白表达稍有下降,6h后IL-33蛋白表达逐渐增加,于伤后3d达峰值,随后逐渐减少。免疫组织化学染色结果显示,在对照组皮肤的表皮、毛囊、皮脂腺及真皮中固有细胞有少量IL-33阳性表达,伤后3h,IL-33阳性细胞率开始增加,伤后3d达到峰值,随后逐渐减少。双重免疫荧光染色结果显示,伤后1~3d,IL-33阳性表达细胞主要为巨噬细胞,伤后5~7d,IL-33阳性表达细胞主要为肌成纤维细胞。HE染色结果显示该皮肤损伤模型创口愈合过程符合炎症的病理学发展规律。结论IL-33有望成为法医学推断皮肤损伤时间的参考指标。

联合多个修复相关基因的mRNA用于大鼠骨骼肌损伤时间推断

目的探讨DNA聚合酶δ相互作用蛋白3(polymerase delta-interacting protein 3,POLDIP3)、类染色体浓缩调节样蛋白(regulator of chromosome condensation 1 like,RCC1L)、高脯氨酸蛋白5(proline-rich 5,PRR5)、核糖核酸输出蛋白1(ribonucleic acid export 1,RAE1) 4种修复相关基因的mRNA联合应用于早、中期损伤时间推断的方法。方法制备大鼠骨骼肌挫伤模型,于损伤后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44和48h取挫伤区肌肉组织,观察大鼠骨骼肌挫伤后修复过程中的组织形态学变化。利用逆转录实时定量聚合酶链反应(reverse transcription real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Poldip3、Rcc1l、Prr5、Rae1 mRNA的相对表达量。利用4种基因在损伤后各时间点的表达模式对损伤过程进行分段,再通过Fisher判别法对上述分段结果进行准确性验证。结果组织形态学变化结果显示,骨骼肌挫伤后随着时间的延长发生修复,联合4种基因的表达趋势可将48h内的损伤时间分为4～12h、16～28h、32～48h 3个时间段,Fisher判别分析结果显示此3个时间段分类的准确率分别为83.3%、75.0%、73.3%。结论根据各基因相对表达量进行分组判别的准确度较高,联合多种基因mRNA的相对表达较单一指标进行损伤时间推断更为准确,结合Fisher判别分析可应用于早、中期损伤时间推断。

法医学损伤时间推断:过去、现在与未来

损伤时间(wound age)是指人体器官组织损伤后至检验时所经历的间隔时间。就被鉴定对象而言,损伤时间推断(wound age estimation)包括人体死亡前形成的损伤和活体上的损伤所经历的时间推断。有些情况下机体内源性因素导致的器官组织损害,如脑出血或梗死、蛛网膜下腔出血、硬脑膜下或硬脑膜外出血、心肌梗死、粥样硬化斑块、血栓、肿瘤等病变的形成时间也需要在法医学鉴定中加以判断,均属于损伤时间推断的范畴。

MicroRNA在皮肤损伤时间推断中的应用前景

损伤时间推断是法医学实践中的主要工作之一,但准确推断损伤时间一直是国内外尚未解决的难题和研究热点。研究证明,微RNA(microRNA,miRNA)参与皮肤损伤修复的整个过程,由于miRNA的特性优势,有望成为推断皮肤损伤时间的生物学指标。本文综述了miRNA的基本生物学功能、特性、皮肤损伤时间推断研究进展及其存在的主要问题,展望了miRNA在损伤时间推断中的应用和研究前景。

大鼠Gpnmb基因表达线性回归模型在损伤时间推断中的应用

目的探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,Gpnmb)mRNA表达受损伤时间、死亡时间及死后保存温度的影响,建立Gpnmb mRNA表达与损伤时间的线性回归模型,为损伤时间推断提供潜在指标。方法将SD大鼠麻醉后钝性挫伤,随机分为损伤后0h、4h、8h、12h、16 h、20 h和24 h组,每组18只,大鼠颈椎脱臼处死后各取6只分别保存在0℃、16℃、26℃中,在同一温度下于死后0 h、12 h、24 h重复收集大鼠后肢股四头肌损伤处肌肉组织样本,验证组大鼠分组与处理方式同上。使用RT-qPCR技术检测大鼠骨骼肌Gpnmb mRNA的表达。使用Pearson相关系数评价Gpnmb mRNA表达与损伤时间、死亡时间、死后保存温度的相关性,SPSS 25.0软件构建线性回归模型,验证组数据用于回代检验。结果Gpnmb mRNA的表达随损伤时间延长而持续增加,表达量与损伤时间高度相关(P<0.05),与死亡时间和死后保存温度基本不相关(P>0.05)。损伤时间(y)与Gpnmb mRNA相对表达量(x)的线性回归方程为y=0.611 x+4.489。回代检验结果证明该模型预测结果准确。结论Gpnmb mRNA的表达基本不受死亡时间及死后保存温度的干扰,而与损伤时间相关,因此可建立线性回归模型用于损伤时间推断。