苹果酸舒尼替尼对体外膀胱癌5637细胞系增殖的影响

苹果酸舒尼替尼是靶向受体酪氨酸激酶（recep-tortyrosinekinases，RTKs）的小分子抗肿瘤药物，已被EAU肾癌临床治疗指南和NCCN肾细胞癌指南推荐为晚期转移性肾细胞癌的一线药物，可通过抑制多个RTKs磷酸化和激活阻断信号传导，抑制肿瘤细胞增殖和新生血管形成。苹果酸舒尼替尼的作用靶点较广泛，

重组分泌型内皮抑素腺相关病毒的包装及在膀胱癌EJ细胞系中的表达

目的:包装重组分泌型内皮抑素腺相关病毒(rAAV-Endostatin)制备内皮抑素原位基因治疗膀胱癌的基因载体药物。方法:采用分子生物学方法构建腺相关病毒质粒载体(pAAV-IgG-Endostatin),酶切、测序鉴定;经质粒共转染方法包装rAAV-Endostatin,测定病毒颗粒滴度并电镜下鉴定;转染膀胱癌EJ细胞后,ELISA法测定重组内皮抑素的浓度。结果:pAAV-IgG-Endostatin的构建和rAAV-Endostatin的包装均获成功,病毒滴度达1.0×1012v.p/ml。感染EJ细胞后内皮抑素成功表达并分泌,上清液中浓度达54.09ng/ml。结论:rAAV-Endostatin载体的构建、包装与表达的成功为rAAV-Endostatin原位基因治疗膀胱癌的实验研究奠定了基础。

siRNA下调SNCG基因表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖和侵袭

目的探讨突触核蛋白γ(SNCG)基因对膀胱癌细胞5637增殖和侵袭能力的影响。方法设计并合成3对SNCG-siRNA序列,转染5637细胞后,用RT-q PCR和Western blot检测SNCG的表达。分别通过CCK-8增殖实验和侵袭实验评估5637细胞增殖和侵袭能力。结果与膀胱癌细胞系T24、EJ和UMUC-3相比,5637细胞中SNCG表达水平最高(P<0.05);与空白和阴性对照组相比,3对SNCG-siRNA序列转染5637后均可抑制SNCG mRNA和SNCG蛋白的表达(P<0.05),但SNCG-siRNA-244组抑制效果最明显;实验组5637细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05),且细胞的侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论通过特异性干扰SNCG基因的表达可抑制膀胱癌细胞5637的增殖和侵袭,SNCG的siRNA序列可能成为膀胱癌治疗的新靶点。

二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响

目的探讨二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响。方法选用膀胱癌5637细胞,分为对照组、二甲双胍2 mM组、5 mM组、10 mM组、20 mM组,各组分别处理膀胱癌5637细胞。采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期变化,采用平板克隆形成试验检测细胞克隆形成率,采用Western blot法检测细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平。结果与对照组比较,二甲双胍各浓度组在24、48、72 h对膀胱癌5637细胞增殖抑制率较高（P〈0.05）,且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞克隆形成率较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组G1期细胞比例较高,S期细胞比例较低（P〈0.05）,二甲双胍2 mM组、5 mM组G2期细胞比例较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平较低（P〈0.05）。结论二甲双胍对膀胱癌5637细胞系HSP-70、HSP-90α及VEGF表达有明显抑制作用,能够抑制细胞增殖、克隆,促进细胞发生G1期阻滞,引起细胞凋亡,作用呈剂量依赖性。

慢病毒介导的过表达microRNA-663a对膀胱癌细胞功能学的影响

目的探讨负载microRNA-663a(miR-663a)的慢病毒上调miR-663a对膀胱癌EJ和5637细胞系功能学的影响。方法将负载过表达miR-663a的慢病毒转染人膀胱癌EJ和5637细胞系。EJ和5637细胞系各设干扰组、阴性对照组和空白对照组,转染72h后置于荧光显微镜下观察转染效率,采用实时定量PCR法检测miR-663a的表达量,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测膀胱癌细胞增殖生长情况,通过细胞划痕实验检测膀胱癌细胞迁移能力,通过Transwell小室侵袭实验检测膀胱癌细胞侵袭能力。结果 EJ和5637细胞系中,干扰组的miR-663相对表达量均显著高于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05),空白对照组的miR-663a相对表达量与阴性对照组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。EJ细胞系转染miR-663a后第4、5天,干扰组D值显著低于阴性对照组和空白对照组同时间(P值均<0.05);5637细胞系转染miR-663a后第3、4、5天,干扰组D值显著低于阴性对照组和空白对照组同时间(P值均<0.05)。EJ和5637细胞系中,干扰组细胞培养48h时的闭合率均显著低于空白对照组和阴性对照组同时间(P值均<0.05)。EJ和5637细胞系中,干扰组Transwell小室滤膜下表面细胞数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05)。结论 miR-663a体外可显著抑制膀胱癌EJ和5637细胞系的细胞增殖、迁移和侵袭能力,为miR-663a可能成为膀胱癌的治疗新靶点提供了实验依据。

消癌平对人膀胱癌细胞体外生长作用的实验研究

目的探讨不同浓度的消癌平注射液对人膀胱癌细胞(EJ细胞)体外生长的抑制作用。方法通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度消癌平注射液对EJ细胞体外生长的抑制率,从而筛选出能够抑制EJ细胞体外生长的药物浓度。结果消癌平注射液浓度为30、40、50、60μl/ml时对EJ细胞生长具有明显抑制作用,实验组OD值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。实验组生长抑制率随药液浓度的升高而升高,计算出的半抑制率(IC)=54.17μl/ml。结论消癌平注射液浓度在≥30μl/ml时对EJ细胞体外生长有较好的抑制作用。

羟基喜树碱对3种人膀胱癌细胞体外生长作用的实验研究

目的探讨不同浓度的羟基喜树碱(HPT)对3种人膀胱癌细胞(EJ细胞、T24细胞及5637细胞)体外生长的抑制作用。方法通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度HPT对EJ细胞、T24细胞、5637细胞体外生长的抑制率,从而筛选出能够抑制多种膀胱癌细胞体外生长的药物浓度。结果当加入的HPT浓度≥5ng/ml时,实验组3种膀胱细胞的OD值低于对照组,且呈剂量递减;生长抑制率高于对照组,且呈剂量逆增,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 HPT浓度在≥5ng/ml时对3种膀胱癌细胞体外生长有较好的抑制作用。

塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及机制

目的初步探讨塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及相关机制。方法将60只雄性BALB/c裸鼠随机分为3组:对照组、模型组及观察组。模型组及观察组利用注射人膀胱癌细胞系5637制备小鼠膀胱癌模型。观察组小鼠给予塞来昔布治疗,对照组及模型组小鼠给予同剂量0.9%氯化钠溶液。治疗4周后,取模型组和实验组小鼠瘤组织及对照组正常组织,检测3组小鼠组织中CD4^+、CD8^+表达量及CD4^+/CD8^+比值;利用Western blot检测COX-2、VEGF及cPLA2阳性表达;利用TUNEL法检测模型组及观察组小鼠肿瘤细胞凋亡率。结果对照组小鼠正常生长,皮下无肿瘤生成。模型组和观察组小鼠成瘤率100%。模型组和观察组小鼠的瘤体质量分别为(2.08±0.36)g和(1.18±0.21)g,与模型组相比,观察组小鼠瘤体质量显著降低(P<0.05)。观察组小鼠的肿瘤抑制率为43.33%。模型组及观察组小鼠移植瘤中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均显著低于对照组,CD8+水平均显著高于对照组(P<0.05)。观察组小鼠瘤组织中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平明显高于模型组,CD8+水平明显低于模型组(P<0.05)。COX-2及cPLA2蛋白在对照组小鼠组织中不表达,VEGF蛋白在3组中均有阳性表达。观察组小鼠中COX-2、VEGF及cPLA2蛋白表达水平明显低于模型组,细胞凋亡指数明显高于模型组小鼠(P<0.05)。结论塞来昔布对小鼠膀胱癌具有一定的抑制作用,其作用机制可能与提高膀胱癌小鼠免疫系统水平、减轻炎性反应、促进癌细胞凋亡有关。

Adp27^(KIP1)基因的过度表达对人膀胱癌细胞系EJ的抑制作用

目的 探讨ｐ２７ＫＩＰ１ 的过度表达对人膀胱癌细胞系ＥＪ的影响。 方法 构建含人ｐ２７ＫＩＰ１ 基因的重组缺陷腺病毒，并感染ＥＪ细胞，７２ 小时后检测ｐ２７ＫＩＰ１ 蛋白的表达、生长曲线、克隆形成率和细胞周期分布。 结果 转基因后，ＥＪ细胞过度表达ｐ２７ＫＩＰ１ 蛋白，增殖明显受阻，细胞停滞于Ｇ１ 期。 结论 ｐ２７ＫＩＰ１ 的过度表达可明显抑制ＥＪ细胞的增殖，提示ｐ２７ＫＩＰ１ 基因在人膀胱癌的发生中起重要作用，用重组腺病毒转ｐ２７ＫＩＰ１ 基因可成为潜在的膀胱癌治疗方法。

RNAi靶向抑制suvivin基因对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响

用真核转录载体pSilencer2．0-U6在膀胱癌细胞系EJ细胞内表达针对Survivin基因的短发卡状RNA（shRNA），以阻断细胞中Survivin基因的表达，观察Survivin基因沉默后对EJ细胞凋亡、细胞周期产生的影响。一。

吉西他滨、紫杉醇时序联合对膀胱癌细胞系细胞毒效应研究

目的评价吉西他滨(GEM)、紫杉醇(TAX)时序联合抗膀胱癌细胞系效应。方法MTT法检测GEM与TAX同时(A组)、先后间隔24h时序(B组为GEM先于TAX24h,C组为TAX先于GEM24h)联合用药对膀胱癌细胞系5637和EJ细胞的细胞毒活性,Chou和Talalay方法评估两药物作用关系;流式细胞仪碘化丙啶法检测药物作用细胞后的细胞周期分布变化;AnnexinV检测各组细胞凋亡率的变化;蛋白印迹法检测细胞周期CyclinD1和CyclinB1蛋白的变化。结果药物浓度为1.0μg/ml时,A组5637、EJ细胞生长抑制率为38%、40%,细胞凋亡率为29.3%、15.4%,细胞毒联合指数(CI)均<1;C组5637、EJ细胞生长抑制率为15%、13%,细胞凋亡率为11.5%、6.7%,CI均>1;B组结果与A组相仿。给药第48h细胞周期分布显示细胞B组主峰在G1期积聚(≥60%),A组G1、G2/M期略有增加,C组主峰在G2/M期积聚(≥65%)。A组CyclinD1蛋白表达较无药物对照组下降,CyclinB1表达上调。结论联合应用GEM和TAX治疗膀胱癌,存在时序效应,即同时用药产生协同作用,先用GEM,后用TAX也可产生较好的细胞毒效应,而先用TAX,后用GEM,则产生拮抗作用。