目的制备稳定表达萤火虫荧光素酶（Luciferase）小鼠T细胞白血病／淋巴瘤细胞系田L4），在细胞水平检测其生物发光能力；建立发光淋巴瘤动物模型，在整体动物水平观察肿瘤的生长及转移。方法通过阳离子脂质体法将含荧光素酶tuc）基因和...目的制备稳定表达萤火虫荧光素酶（Luciferase）小鼠T细胞白血病／淋巴瘤细胞系田L4），在细胞水平检测其生物发光能力；建立发光淋巴瘤动物模型，在整体动物水平观察肿瘤的生长及转移。方法通过阳离子脂质体法将含荧光素酶tuc）基因和绿色荧光蛋白（GFP）基因的慢病毒载体四质粒系统共转染入病毒包装细胞293T，24h后在荧光显微镜下观察GFP表达情况，监测转染效率。72h收集病毒上清，浓缩后以MOI=8感染EL4细胞，在荧光显微镜下和应用流式细胞仪（FACS）观察感染情况。通过流式细胞分选仪无菌条件下筛选出表达GFP的EL4细胞．进行大规模扩增培养并对转染前后的细胞进行生物特性分析和比较。在体外用活体成像技术（in vivo imaging）评价其稳定发光能力。C57BL／6小鼠皮下和尾静脉接种发光细胞，构建淋巴瘤小鼠模型，活体内观察肿瘤的生长和转移情况。结果慢病毒载体系统转染293T细胞24h后在荧光显微镜下观察到GFP表达，病毒滴度测定为8．4×10^7 Tu／ml。感染EL4细胞后，荧光显微镜下观察到GFP的表达，FACS分析转导效率为96．5％。筛选转染后的稳定克隆并扩增细胞，分析其生物学特性与EL4细胞无明显差异（P〉0．05）。活体成像系统分析感染后的EL4细胞释放的光子量与细胞数量成正相关（R^2=0.9896）。利用活体成像观察到了皮下移植瘤的生长，并且光子强度随肿瘤的增大而增强；尾静脉接种小鼠后通过活体成像，能在不同时期动态观察到肿瘤的组织、器官转移。结论我们成功制备了荧光素酶标记的EL4细胞并且构建了生物发光淋巴瘤动物模型。该模型可以非侵入性地动态检测活体内白血病／淋巴瘤的演进过程，为示踪肿瘤体内生长、转移，研究肿瘤发展机制及最佳治疗策略的选择提供了新的手段和工具。展开更多
文摘目的制备稳定表达萤火虫荧光素酶（Luciferase）小鼠T细胞白血病／淋巴瘤细胞系田L4），在细胞水平检测其生物发光能力；建立发光淋巴瘤动物模型，在整体动物水平观察肿瘤的生长及转移。方法通过阳离子脂质体法将含荧光素酶tuc）基因和绿色荧光蛋白（GFP）基因的慢病毒载体四质粒系统共转染入病毒包装细胞293T，24h后在荧光显微镜下观察GFP表达情况，监测转染效率。72h收集病毒上清，浓缩后以MOI=8感染EL4细胞，在荧光显微镜下和应用流式细胞仪（FACS）观察感染情况。通过流式细胞分选仪无菌条件下筛选出表达GFP的EL4细胞．进行大规模扩增培养并对转染前后的细胞进行生物特性分析和比较。在体外用活体成像技术（in vivo imaging）评价其稳定发光能力。C57BL／6小鼠皮下和尾静脉接种发光细胞，构建淋巴瘤小鼠模型，活体内观察肿瘤的生长和转移情况。结果慢病毒载体系统转染293T细胞24h后在荧光显微镜下观察到GFP表达，病毒滴度测定为8．4×10^7 Tu／ml。感染EL4细胞后，荧光显微镜下观察到GFP的表达，FACS分析转导效率为96．5％。筛选转染后的稳定克隆并扩增细胞，分析其生物学特性与EL4细胞无明显差异（P〉0．05）。活体成像系统分析感染后的EL4细胞释放的光子量与细胞数量成正相关（R^2=0.9896）。利用活体成像观察到了皮下移植瘤的生长，并且光子强度随肿瘤的增大而增强；尾静脉接种小鼠后通过活体成像，能在不同时期动态观察到肿瘤的组织、器官转移。结论我们成功制备了荧光素酶标记的EL4细胞并且构建了生物发光淋巴瘤动物模型。该模型可以非侵入性地动态检测活体内白血病／淋巴瘤的演进过程，为示踪肿瘤体内生长、转移，研究肿瘤发展机制及最佳治疗策略的选择提供了新的手段和工具。
文摘目的:探讨维生素C(Vit C)对小鼠淋巴瘤EL4细胞诱导Treg/Th17失衡的影响。方法:采用CCK-8法检测不同浓度Vit C或泼尼松对小鼠淋巴瘤EL4细胞增殖的影响,选出对细胞增殖无明显抑制的浓度用于细胞干预。用转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-6、IL-23诱导EL4细胞发生Treg/Th17平衡向Th17偏移,分别用Vit C、泼尼松干预,取细胞及培养上清,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头蛋白3(Foxp3)mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中IL-17A、IL-10水平。结果:0.2mmol/L Vit C、1μmol/L泼尼松对EL4细胞增殖无明显抑制作用,可使EL4细胞表达RORγt mRNA和Foxp3mRNA相对表达量升高,IL-10分泌减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:0.2mmol/L Vit C对EL4细胞分化的Treg/Th17失衡有调节作用,效果与1μmol/L泼尼松类似,且作用强度与作用时间存在相关性。
