人用狂犬疫苗相对效力检定的新方法——ELASA法

用ELASA法测定10批狂犬疫苗相对效力,并与生物法测定结果比较,经t检验,P>0.05,两方法间无显著差异。

基于核酸适体LYGV1c的酶联吸附法检测石斑鱼虹彩病毒感染

【目的】利用核酸适体LYGV1c构建可快速、准确识别石斑鱼虹彩病毒(Grouper iridovirus Guangxi strain,SGIV-Gx)感染的酶联吸附法(Aptamer LYGV1c-based enzyme-linked apta-sorbent assay,LYGV1c-ELASA),为提高水产疫病检测及防控效率提供理论支持。【方法】基于生物素标记的LYGV1c(Bio-LYGV1c)开发核酸适体酶联吸附法(LYGV1c-ELASA)检测SGIV-Gx,通过对Bio-LYGV1c特异性、灵敏性、稳定性等实验评估其检测性能。通过珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂)SGIV-Gx感染试验进行活体验证,同时用荧光定量PCR(qPCR)测定衣壳蛋白基因(MCP)的表达,与LYGV1c-ELASA进行比较,验证该酶联吸附法检测的可信度。【结果】LYGV1c-ELASA的方法可特异性地识别SGIV的感染,Bio-LYGV1c识别SGIV感染的最适工作浓度为500 nmol/L,最适孵育时间为20 min,最适结合温度为4~28℃,LYGV1c-ELASA最低检测限为5×103 mL-1。活体验证结果表明,随着注射的SGIV-Gx浓度的升高,LYGV1c-ELASA检测出的石斑鱼体内病毒450 nm处的光密度(OD450)的值升高;qPCR结果表明,SGIV-Gx的MCP的表达量升高,与LYGV1c-ELASA检测结果相一致。【结论】建立的LYGV1c-ELASA技术不仅可用于体外检测,同时也适用于活体检测。LYGV1c-ELASA技术可实现对石斑鱼养殖过程中石斑鱼虹彩病毒病的快速诊断、实时监控。

核酸检测技术在安徽血液中心血液筛检中的应用分析

目的探讨核酸检测(NAT)技术用于血液筛查的意义。方法采用实时荧光定量PCR和转录介导扩增(TMA)两种方法分别对我站298份及6737份无偿献血者标本进行单人份病毒核酸检测(ID-NAT),并将两种核酸检测方法的结果与ELASA检测结果进行对比分析。结果两种方法均存在相当比例的ELASA(+)、NAT(-)结果,德国GFE核酸检测试剂HBV、HCV阳性检出率低于美国诺华的ID-TMA检测试剂。经TMA-NAT检测发现本地区2次ELASA血清学方法进行血液病毒筛查HBV的残余风险为万分之4.8。本次研究没有发现HCV和HIV的血清学漏检。诺华ID-NAT核酸检测试剂存在一定的假阳性。结论核酸检测对于降低输血传播传染病的风险起到了非常重要的作用;诺华TIGRIS核酸检测体系适用于献血者血液病毒的筛查。

复方丹参注射液对于新生儿缺氧缺血性脑病的疗效以及血清Tau蛋白对其评价的临床意义

目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清Tau蛋白水平的变化,以及采用复方丹参注射液治疗HIE的过程中Tau水平监测对于疗效监测的临床价值。方法:选择新生儿HIE 60例,随机分为观察组和对照组,对照组采用常规治疗,观察组在常规治疗的基础上采用复方丹参注射液治疗,于治疗前、治疗第3、7、10、14、21、28天分别进行NBNA评分及血清Tau蛋白水平检测,对比两组之间的治疗效果、不同治疗时期Tau检测结果,并分析不同治疗时期Tau检测结果与NBNA评分的相关性。结果:观察组的患儿在症状缓解、惊厥消失、住院病程等方面的指标均明显优于对照组患儿,获得较为明显的治疗效果。治疗前及治疗第3天两组患儿的Tau检测结果无统计学差异(P>0.05),自治疗第3天起至疗程结束日,观察组的Tau均显著低于对照组(P<0.01);Tau浓度与NBNA评分呈现出显著负相关(P<0.05)。结论:Tau水平测定可作为协助判断HIE患儿的脑损伤程度及评价复方丹参注射液治疗效果的临床指标。

血清脂阿拉伯甘露糖-IgG检测对活动性肺结核的诊断价值

血清脂阿拉伯甘露糖┐ＩｇＧ检测对活动性肺结核的诊断价值１０００９１北京解放军第３０９医院王安生王巍金关甫匡铁吉夏湘萱孙海光关键词结核，肺；脂阿拉伯甘露糖；酶联免疫吸附试验中国图书资料分类号Ｒ５２１结核病血清学诊断技术已成为结核病临床诊断的重要辅助手段...

CD4^+ CD25^+调节性T细胞对乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞分泌IL-4水平和抗-HBs产生的影响

目的:通过分析乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞(PBMC)剔除CD4+ CD25+调节性T细胞(简称Treg细胞)和不剔除Treg细胞后,用乙肝表面抗原(HBsAg)诱导,检测其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平,来探讨Treg细胞与乙肝疫苗弱/无应答现象的关系。方法:选择25例乙肝疫苗无应答者,30例弱应答者,同时选择20例强应答者作为对照,用HBsAg在体外诱导剔除和不剔除Treg细胞的3组人外周血PBMC,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清的IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平。结果:剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导,其培养上清IL-4分泌水平强应答组、弱应答组和无应答组相比无明显差异(P>0.05),其抗-HBs的产生水平也无明显差异(P>0.05);不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导,其培养上清IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平弱/无应答组与强应答组相比差异有显著性(P<0.01),弱/无应答组的IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平显著低于强应答组。结论:不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导,其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平弱/无应答者与强应答者相比显著低下。由于IL-4主要是由Th2细胞分泌,因此我们推测乙肝疫苗弱/无应答现象可能是由于Treg细胞抑制了Th2细胞的极化,从而影响了机体的体液免疫应答。

对影响ELISA实验质量的有关因素分析

ELISA(酶联免疫吸附试验)是目前临床上最常用的免疫学检验方法[1],由于其试剂稳定,易保存,操作简便,结果判断较客观,既适宜于大规模筛查试验,又可用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析,目前已广泛用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子检测等领域.EUSA有敏感性高,特异性强,重复性好的特点,但其同时存在影响因素多的不足,现就实验操作中常见的影响因素进行分析实验,以提高ELASA的实验质量.

两种方法检测绒山羊副结核的效果分析

为探明绒山羊副结核检测方法的准确性,采用ELASA抗体检测法和注射副结核提纯菌素的皮内变态反应法进行了对比研究。结果表明:应用副结核分支杆菌抗体检测试剂盒测定的准确率可达到93%以上;采用测量皮厚差值的变态反应法,对副结核感染初期的羊只筛查效果较好。

乳腺癌患者手术和化疗前后血清HER2 ECD水平的变化

目的探讨乳腺癌患者手术、化疗前后血清HER2 ECD水平变化的临床意义。方法用双抗体夹心ELISA法(酶联免疫吸附法)检测乳腺癌患者及其配对手术、化疗前后血清HER2 ECD水平,进行统计分析。结果乳腺癌患者血清HER2 ECD水平与正常人和良性乳腺病患者有明显差异(P<0.01);手术后59例乳腺癌患者血清HER2 ECD水平89.8%(53/59)下降,10.2%(6/59)升高,而33例良性乳腺病患者69.7%(23/33)下降,30.3%(10/33)升高,两者差异有统计学意义(P<0.05);血清HER2 ECD水平升高组(8/59)对化疗反应率100.0%(8/8),而非升高组(51/59)对化疗反应率74.51%(38/51),两者无差别(P>0.05)。结论动态监测乳腺癌患者血清HER2ECD水平对评价其手术、化疗疗效有一定的临床提示意义。

急性白血病患者糖代谢异常的研究

目的 探讨急性白血病患者糖代谢异常的机制及其对预后的影响。方法 分别于急性白血病患者化疗前后抽取空腹静脉血 ,用生物化学和ELASA法检测空腹血糖、葡萄糖耐量、血清真胰岛素 (RI)、超敏C肽水平等。结果 14例化疗前空腹血糖升高 ,OGTT试验呈糖尿病曲线 ,RI、超敏C肽水平下降 ,其中有 3例在患急性白血病前即确诊为 2型糖尿病 ,余 11例中7例化疗后恢复正常 ;5例化疗前空腹血糖正常 ,OGTT试验呈糖耐量减低 ,RI、超敏C肽水平下降 ,化疗后均恢复正常 ;5例化疗前空腹血糖等均正常 ,于化疗后出现糖耐量减低、RI和超敏C肽水平下降 ;16例化疗前后各指标均正常。结论 急性白血病患者发生糖代谢异常的原因有胰岛浸润或血管淤滞、医源性、原有糖尿病。血糖升高时化疗缓解率低。

冠脉搭桥术对患者体内IL-6、IL-10的影响

目的 :探讨细胞因子 IL - 6、IL - 1 0在冠状动脉搭桥术患者血中的变化规律。方法 :应用 ELASA方法对 1 5例冠状动脉搭桥术患者静脉血中细胞因子 IL - 6、IL - 1 0进行测定。结果 :患者冠脉搭桥术前、术中及术后血中细胞因子 IL - 6和 IL - 1 0的水平存在统计学意义 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :冠状动脉搭桥手术过程中存在炎症反应 ,细胞因子的释放在此过程中起作用。

三种免疫学方法检测结核病可行性分析

目的 :探讨三种免疫学方法联合检测肺结核病的诊断价值。方法 :采用金标法 (TB DOT)、PPDIgGELISA法(TB Ab)和一步免疫层析法 (TB CHECK)三种免疫学检测方法 ,对 3 4例菌阳肺结核、46例菌阴肺结核、3 0例非结核肺部疾病及 2 1例复强反应阴性健康人进行检测 ,并对其结果进行分析。结果 :单项检测的敏感性和特异性分别为TB DOT 88 2 %、99 2 % ;TB Ab 79 4%、98 1% ;TB CHECK 85 3 %、94 1%。单项检测菌阳和菌阴肺结核的阳性率分别为TB DOT 88 2 %、5 8 3 % ;TB Ab 79 4%、47 8% ;TB CHECK 85 3 %、45 6%。联合方法检测菌阳、菌阴肺结核阳性率二联分别为 91 2 %、65 9% ;三联分别为 94 1%、69 6% ,比单项检测明显提高 ,但特异性稍有降低。菌阳和菌阴肺结核联合检测 ,二联法同时阳性的阳性率分别为 85 3 %和 5 6 5 %。联合检测同时阳性比单独法检测低或相当 ,但特异性提高了 ,可达 98% ,若以健康对照组 ,可达 10 0 %。结论 :采用这三种联合检测方法 ,由于提高了特异性 ,且操作方法简便 ,经济实用 ,因此 。

血浆OPN和TAT水平检测在非小细胞肺癌中的临床意义

目的探讨骨桥蛋白(OPN)、凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)在非小细胞肺癌(NSCLC)血浆中水平的临床意义。方法采用ELASA法检测46例NSCLC、22例肺部良性病变患者及20例健康体检者血浆TAT、OPN水平。比较各组数据之间关系。结果 OPN在NSCLC血浆水平明显高于肺部良性病变患者及健康体检者(t=7.376,P=0.017);TAT在NSCLC血浆水平明显高于肺部良性病变患者及健康体检者(t=15.885,P=0.000)。而肺部良性病变患者及健康体检者对比,差异无统计学意义;OPN、TAT血浆水平与肺癌分期、远处转移呈正相关(r=0.502,P<0.05);与年龄、性别相关性无统计学意义。结论 TAT、OPN可作为分期及转移的指标,且二者可能在NSCLC发生发展方面具有协同作用。

支气管哮喘患者血清IL-10的测定及临床意义

目的研究白细胞介素-10(IL-10)在支气管哮喘患者血清的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELASA)检测33例正常对照组和57例哮喘患者血清IL-10表达水平并进行分析比较。结果哮喘患者血清IL-10水平低于对照组水平,差异有统计学意义(P<0.05);IL-10的表达与哮喘的临床分期有关,急性发作期IL-10水平低于慢性持续期,差异有统计学意义(P<0.05),慢性持续期低于临床缓解期,差异有统计学意义(P<0.05);与年龄、性别、地理位置无关(P<0.05)。结论 IL-10表达与哮喘的发生发展有一定的关系,动态测定哮喘患者血清IL-10具有重要的临床意义。

输卵管妊娠与沙眼衣原体和解脲支原体感染的相关研究

目的探讨输卵管妊娠与沙眼衣原体和解脲支原体感染的关系。方法分别采用聚合酶链反应(PCR)技术、ELISA法,将60例妇科经剖腹探查或腹腔镜手术证实并行患侧输卵管切除的患者作为观察组,40例同期行绝育术及妇科良性疾病而行子宫、附件或输卵管切除术者作为对照组,测定宫颈分泌物和手术标本中的沙眼衣原体DNA、解脲支原体DNA以及两组患者血清中抗沙眼衣原体抗体和解脲支原体抗体。结果宫颈分泌物检测出沙眼衣原体DNA,输卵管妊娠组21例(35%),对照组4例(10%);血清沙眼衣原体抗体阳性,输卵管妊娠组18例(30%),对照组2例(5%);手术标本检测出沙眼衣原体DNA 15例(25%),对照组1例(2.5%)。两组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论沙眼衣原体、解脲支原体与输卵管妊娠的发生有着密切关系。沙眼衣原体、解脲支原体感染所致宫颈炎、盆腔炎与输卵管妊娠有密切联系。

间接竞争ELISA方法用于脱落酸的检测

该文研制了植物激素脱落酸(ABA)间接竞争酶联免疫试剂盒,该试剂盒可对ABA进行快速检测。文中成功制备了脱落酸和牛血清蛋白的交联物(ABA-BSA),并对交联物的浓度、抗体稀释度、酶标二抗稀释度对实验的影响进行了考察。结果表明,该试剂盒具有高灵敏性,最低检出浓度为1.38ng/mL,在10ng/mL～1000ng/mL之间,吸光度与浓度的对数呈良好的线性关系。样品添加回收率在95.98%～102.25%之间,平均回收率为100.18%,变异系数(CV)在1.27%～4.68%之间,平均变异系数为3.18%。

水稻条纹叶枯病高效检测技术研究

在烧杯中培育稻苗,进行灰飞虱（Laodelphax striatellus Fallén）大批量饲养有利于观察灰飞虱的生活习性。采用烧杯法饲养携带RSV病毒的灰飞虱,在水稻3叶期时放虫接毒,应用ELISA技术快速检测灰飞虱的传毒率。结果表明,烧杯法饲养灰飞虱方便灵活,且可以比较细致地观察灰飞虱的生活习性;田间调查鉴定结果为高抗RSV的34份水稻材料中,通过ELISA方法检测出有4份感RSV,分别是Y11、Y20、Y28和Y6-3,其带毒率分别为4.55%、15.38%、3.57%和3.23%。

浅谈高氧肺损伤大鼠晚期糖基化终末产物受体的表达及意义

目的:探讨高氧致新生大鼠肺组织损伤过程中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达情况。方法:16只3日龄新生大鼠依据是否发生高浓度氧暴露随机分为二组:空气组(空气环境下暴露7天)、高氧组(95%氧暴露7天);实验结束后留取肺组织标本和静脉血标本,光镜观察并盲法评分比较肺组织辐射状肺泡计数(radical alveolar counts,RAC);RT-PCR法检测肺组织匀浆RAGEmRNA表达;免疫组化法检测肺组织RAGE表达情况;ELASA法检测血清及肺泡灌洗液(BALF)TNF,sRAGE水平。结果:高氧组肺组织损RAC降低(t=14.87,P=0.000);肺组织RAGE mRNA增加(t=9.7109,P=0.000),RAGE蛋白表达增加;BALF TNF-α(t=9.807,P=0.000)增高,sRAGE水平下降(t=3.7484,P=0.000)。结论:RAG通路在新生大鼠高氧引致肺组织损伤中具有重要作用。

奶牛支原体病的诊断

2011年,宁夏某牛场奶牛出现以发烧、呼吸困难、严重乳房炎、关节炎为主要特征的病例,病程近3个月。根据临床症状及病理剖检和治疗情况,怀疑为支原体感染。采用支原体分离培养、血清学检查(ELISA)、核酸检测(PCR)及16SRNA序列比对对病原体进行检测。结果表明,该病的病原为牛支原体和无乳支原体混合感染。