血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

目的建立血清促红细胞生成素(EPO)的ELISA试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心ELISA方法,并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释,150μL/孔滴加到96孔板,用以包被。以正常人血清和临床血清为标本,用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。结果最佳包被抗体浓度为1∶600,最佳抗原工作浓度为1∶100,酶标抗体工作浓度为1∶5000。标准曲线的回归方程为:y=0.017x+0.3002,r=0.9710,P<0.05。灵敏度为0.46U/L,高、低浓度样品平均回收率分别为106.74%、104.78%。血清标本20、80U/L批内变异分别为3.044%、7.964%,批间变异分别为1.379%、12.915%。结论双抗体夹心ELISA法检测血清EPO,其敏感性、特异性、准确度均良好,为临床快速、准确、方便检测EPO提供了实验依据。

草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒的研制

通过对包被单抗和酶标单抗以及抗原最佳工作浓度的优化,建立草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒检测体系。用分光光度法对检测体系的特异性、稳定性和灵敏度进行测定;用脱脂奶平板法对试剂盒的临床应用进行检测。结果表明,单抗最适稀释液为pH9.4的碳酸盐缓冲液,洗涤液为含φ=0.05%Tween-20的PBS,包被单抗最适体积稀释倍数为1∶800,酶标单抗最适体积稀释倍数为1∶6 000,抗原最佳工作浓度为3×104cfu/mL。试剂盒与肠型点状产气单胞菌有特异性反应,脱脂奶平板法与试剂盒法对草鱼患病检出率基本一致,符合率达90%;试剂盒有很好的储存稳定性,检测灵敏度为7×103cfu/mL。

水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析

初步比较了酶联免疫法(ELISA)中2种氯霉素试剂盒(荷兰EURO-DIAGNOSTICA试剂盒和德国r-Biopharm试剂盒)检测水产品氯霉素残留量的效果,并对测定水产品氯霉素残留量的气相色谱法(GC-ECD)和液相色谱—质谱法(LC-MS/MS)的技术参数进行了比较分析。结果表明,荷兰EURO-DIAGNOSTICA试剂盒和德国r-Biopharm试剂盒的检测范围分别为0.025～2.0μg·L^(-1)和0.05～4.05 μg·L^(-1),其板内相对标准偏差均小于10%,2种试剂盒检测25个鱼或虾样品的假阳性率分别为12%和20%。LC-MS/MS和GC-ECD的最低检测浓度分别为0.1 μg·kg^(-1)和0.27μg·kg^(-1),当氯霉素添加量为2 μg·kg^(-1)时其平均回收率分别为95.2%和70.4%;LC-MS/MS样品前处理较简单,GC-ECD较繁琐。

白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响随机平行对照研究

[目的]观测白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响。[方法]使用随机平行对照方法,将60只SPF级昆明小鼠(雌雄各半,体质量20±2g)按随机数字表法分为4组,空白组(A组)、脾虚模型组(B组)、白色念珠菌感染组(单纯感染组,C组)、白色念珠菌脾虚感染组(脾虚感染组,D组),15只/组。使用饮食失节+劳倦过度复合因素方法复制脾虚模型,实验第1d起,B、D组小鼠单日游泳至耐力极限,禁食饲料,喂饲甘蓝;双日喂饲猪油脂0.5mL/只;A、C组小鼠正常饲养;连续14d。实验前7d,将白色念珠菌株在沙保斜面培养基上转种2次,37℃恒温箱培养24h,选择3个直径≥1mm菌落,无菌生理盐水制成菌悬液,血球计数板计数,调整菌液至2×108CFU/mL。灌胃干预:实验第15d,C、D组灌胃白色念珠菌悬液0.2mL/10g体质量,浓度为2×108CFU/mL,A、B组等量生理盐水。实验第35d,各组小鼠随机取10只称体质量,脊髓离断,取脾脏并称质量,冲脾法制备脾细胞悬液,光镜下计数脾细胞,调浓度至107,取100μL加1640培养液500μL混匀;二氧化碳培养箱培养48h,取上清液。观测脾指数、脾细胞IFN-γ、IL-10(双抗体夹心法,严格按照ELISA试剂盒说明操作)。[结果]实验第35d(染菌3周),脾脏外观形态单纯感染组和脾虚感染组体积增大,尤其是脾虚感染组增大明显,颜色变深,呈深暗红色。脾指数单纯感染组和脾虚感染组明显高于空白组(P<0.05,P<0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P<0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P<0.01)。IFN-γ、IL-10脾虚感染组明显高于空白组(P<0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P<0.05或P<0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P<0.01)。[结论]白色念珠菌肠道感染可升高脾虚小鼠脾指数,促进脾细胞IFN-γ和IL-10表达。

呕吐毒素检测测量系统分析

ELISA试剂盒法和上转发光法是检测呕吐毒素含量的两种常用方法,为确保检测数据的可靠性,本研究针对这两种检测方法进行测量系统分析。试验结果表明,两种测量系统分辨力均满足十分之一法则,但ELISA试剂盒法更为精确;稳定性、偏倚和线性均满足要求;重复性和再现性的实验中,ELISA试剂盒法R&R%为6.56%,P/T%为5.48%,均小于10%,表明该测量系统测量误差在可接受范围内;而上转发光法R&R%和P/T%均大于30%,不能满足要求。建议减少使用上转发光法检测样品中的呕吐毒素含量,试验结果以ELISA试剂盒法的检测结果更为准确、可靠。

快速酶免疫法与粪检法检测华支睾吸虫病的比较分析

目前，华支睾吸虫病的诊断主要依靠快速酶免疫诊断试剂盒和粪检，为对这二种方法进行比较，选３５６名学 生，同时进行血清学抗体和粪便虫卵的检测，抗体阳性率８．７１％（３１／３５６），虫卵阳性率８．１５％（２９／３５６），二者无显 著性差异。其中二法均阳性２６例，阳性符合率８９．６６％，二法均阴性３２２例，阴性符合率９８．４７％，总符合率９７．７５％。 表明快速酶免疫法与粪检法作为诊断华支睾吸虫病的二种不同的检测方法无显著性差异。