排溢法ELISA,一种改进的二步法标记免疫实验技术

目的:建立一种简便的血清HBsAg检测二步法标记免疫试验。方法:在既往G6ELISA的基础上建立血清HB-sAg检测排溢法ELISA,采用系列稀释实验对方的相对显色强度,敏感性,及其对Hooks效应的拮抗能力进行考核,将其用于对一组临床标本的检测,并与经典二步法及一步法ELISA进行比较。结果:在大致相同的实验条件下排溢法,二步法及一步法ELISA三者实验信号的强度大致相当;其敏感性分别为19.2、12.6及14.5pg/ml。当被检标本HBsAg浓度在37.5μg/ml时一步法ELISA开始显现Hooks效应,至2400μg/ml时测值已接近阈值;而排溢法及经典二步法ELISA两者对Hooks效应则表现出相似的拮抗。对231例临床标本进行检测,112例高滴度阳性标本(经稀释实验证实)中出现中重度Hooks效应者一步法ELISA17例,占15.2%,而排溢法及其二步法ELISA则未见Hooks效应的影响。结论:在保证实验结果的前提下,排溢法ELISA在操作程度简化上与一步法相当,但可完全克服Hooks现象的干扰。

应用改进的DAS-ELISA法快速检测马铃薯病毒

试验分别用改进DAS-ELISA法和常规DAS-ELISA法对马铃薯4种主要病毒PVX、PVY、PVS、PLRV进行检测,其检测结果完全一致,且灵敏度也基本相同。改进法比常规法操作简便、节省时间,表明改进DAS-ELISA法是一种直观、实用、快速、准确可靠的检测方法,适合种薯生产中大量样品的多种主要马铃薯病毒的快速检测。

真菌毒素ELISA检测方法新进展

真菌毒素(mycotoxin)对人类及动物危害严重。人们建立了各种毒素检测方法,酶联免疫吸附试验(ELISA)是其中的一种。笔者对ELISA结合胶体金标技术检测霉菌毒素,以及与应用噬菌体展示技术产生的毒素模拟表位肽结合检测毒素的优点进行了综述。

基于独特型-抗独特型初步建立玉米赤霉烯酮无毒ELISA定量检测技术

目的:初步建立以玉米赤霉烯酮(ZEN)抗独特型单抗替代玉米赤霉烯酮标准品,检测ZEN残留的无毒ELISA定量检测技术。方法:以ZEN-BSA为包被原,ZEN单抗(1G4)为反应抗体,分别以不同浓度的ZEN毒素或ZEN抗独特型单抗1D5(Ab2β-1D5)为竞争物,建立竞争抑制曲线。根据抑制率在20%~80%间,在相同抑制率条件下,ZEN与1D5间浓度对应关系,绘制替代标准曲线及对应的浓度转换方程。以ZEN类似毒素代替ZEN作为竞争抗原,检验方法的特异性;板内、板间试验检验方法的精密度。结果:初步建立了ZEN无毒ELISA定量检测技术,1D5与ZEN毒素之间的替代标准曲线方程为:y=1.2846x1.9310(y为ZEN毒素浓度ng/ml,x为抗独特型抗体浓度(μg/ml)。检出限(IC2 0)为1.041 ng/ml,检测范围为1.041~25.99 ng/ml。方法的批内平均变异系数为3.88%,批间平均变异系数为4.96%。方法特异性好,与ZEN类似毒素几乎无交叉反应。结论:利用ZEN单抗和ZEN抗独特型单抗初步建立了ZEN的无毒ELISA定量检测方法。

ELISA法检测血清EB病毒VCA-IgA对喉癌早期筛查的价值

目的 评估血清检测EB病毒VCA-IgA对喉癌早期筛查的价值.方法 ELISA法检测喉癌患者48例、健康成人48例,血清EB病毒VCA-IgA.结果 喉癌患者组VCA-IgA阳性率为68.75%,而健康成人组VCA-IgA阳性率仅为2.08%.29例无颈淋巴结转移者与19例有颈淋巴结转移者之间,VCA-IgA阳性率无统计学差异.26例临床早期患者（Ⅰ期和Ⅱ期）和22例晚期患者（Ⅲ期和Ⅳ期之间）VCA-IgA阳性率亦无统计学差异.结论 ELISA法检测血清VCA-IgA有助于喉癌的早期筛查,但不能作为判断预后的指标.

ELISA技术检测马铃薯病毒的研究

应用ＤＡＳＥＬＩＳＡ方法对甘肃省种植的６个马铃薯品种老龄薯和幼龄薯及２个品种的茎尖组培苗进行了针对ＰＶＸ、ＰＶＹ及ＰＬＲＶ的病毒检测。结果表明，老龄薯块携带以上３种病毒，并以ＰＬＲＶ为主体的复合侵染为主，幼龄薯块仅带其中一种病毒，且带毒量少；茎尖剥离组培法可使陇薯３号和１６７４５脱毒率达２０％。以幼龄薯为脱毒基础材料可望进一步提高脱毒率。文中还对ＤＡＳＥＬＩＳＡ技术在马铃薯病毒检测中的优势进行了评价。

浅谈禽病ELISA操作技术

在疾病监控方面,酶联免疫吸附试验(ELISA)技术是应用最为广泛的血清学检测技术,禽病ELISA抗体检测试剂已经大量应用到SPF鸡微生物学监测中。ELISA不仅操作技术上有一定的要求,而且影响因素也较多,如不注意有可能导致试验结果不准确。因此,将禽病检测过程中,ELISA操作各环节需注意的问题归纳总结,与各位同仁一起交流学习。

尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病的初步研究

文本报告了旋毛虫感染期幼虫虫体尿素溶解性抗原的提取及其用于ELISA诊断旋毛虫病的效果。ELISA检测24例旋毛虫病人血清IgG和12例病人滤纸干血滴IgG,阳性率均为91.67％(22/24和11/12),21例病人血清IgM,阳性率为95.24％(20/21),对日本血吸虫病人血清作IgG和IgM检测时均有一定的交叉反应,而感染其它几种寄生虫的小鼠血清无交叉反应。 本实验结果表明尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病具有较高的敏感性、特异性和好的重复性,是一种具有实用价值和经济价值的诊断抗原。

ELISA与IHA在血吸虫病不同流行程度地区的现场筛查效果评价

目的评价与比较ELISA法和IHA法在血吸虫病不同流行程度地区的筛查效果。方法选择四个日本血吸虫病流行程度不同的试点村,对5～65岁适检人群进行Kato-Katz法(二送三检)、ELISA法、IHA法等3种方法平行检测。结果ELISA法的敏感度和特异度分别为96.05%、95.74%,IHA分别为89.74%、100%。但两种方法现场“特异度”较低(ELISA:43.21%￣92.17%;IHA:67.56%～91.55%),且其阳性预测值亦较低(ELISA法:3.1%￣18.6%;IHA:2.9%￣15.8%)。两法平行检测比较:两者的测定值具有一定的相关性(r=0.767,P<0.01),但IHA法阳性阈值(1∶10)对应的OD值高于ELISA阳性阈值水平(0.105),在0.124￣0.308左右。在疫情相对较重的地区,ELISA法阳性率高于IHA,其阳性预测值低于IHA;在疫情相对轻的地区,两法阳性率、阳性预测值无显著性差异。结论在血吸虫病疫情未控制地区,IHA法现场筛查效果相对优于ELISA法,但两者均存在假阳性率较高、阳性预测值较低的缺陷。

HIV快速检测技术法与ELISA法在艾滋筛查中应用价值

目的探究艾滋筛查中HIV快速检测技术法(RT)与ELISA法的应用价值。方法开展回顾性分析法,遴选时段2019年6月—2020年6月内1500例HIV体抗筛查者,均接受快速检测技术法、ELISA法检测,以免疫印迹法(WB)结果为对照,分析检测结果,评估诊断价值。结果1500例筛查者,快速法阳性检出率1.47%(22/1500);ELISA法阳性检出率1.20%(18/1500);经免疫印迹法证实,阳性检出率为1.00%(15/1500);快速法敏感度为100.00%、特异度为99.53%、阳性预测值为68.18%、阴性预测值为100.00%;ELISA法敏感度为100.00%、特异度为99.80%、阳性预测值为83.33%、阴性预测值为100.00%。结论在HIV抗体检测中快速检测技术法、ELISA法均具有显著应用价值,两种检测方式敏感度、特异度无明显差异,故快速检测法均可用于艾滋筛查、诊断、检测咨询中。

ELISA检测血清抗烟曲菌IgE和IgG在变应性曲菌病的诊断意义

用ELISA双抗体技术,测定11例变应性曲菌病患者血清中的抗烟曲菌的IgE和IgG其OD值为烟曲菌发试阳性的支气管哮喘患者的2倍以上。实验结果提示以本法检测血清抗烟曲菌的IgE和IgG特异抗体,对本病的早期诊断、随访观察以及与烟曲菌所致的哮喘的区别诊断有一定临床应用价值。

间接ELISA法检测蚕豆花粉过敏原最优条件的建立

油菜花粉过敏原粗提液为抗原包被酶标板,文章通过对间接ELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件。结果血清稀释度为1∶10,anti-human Ig E/HRP稀释度为1∶1000。采用已建立的间接ELISA反应条件,对10份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定间接ELISA的判定标准,D450值大于等于0.158为阳性。

Nodal检测双单抗夹心ELISA法建立及应用

现已证实,Nodal参与了肿瘤恶性生物学过程,但对其高敏感检测法尚未建立。采用基因工程表达人源Nodal作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过经典PEG诱导的细胞融合技术筛选出针对Nodal的特异性单克隆抗体7株。夹心ELISA确证7株抗体组成了15种可配对的抗体对。经筛选后选取抗体对AF12-DG5建立标准化夹心ELISA法,结合生物素-亲和素检测系统,DG5抗体标记生物素,采用链亲和素与辣根过氧化物酶标记的生物素(HRP-Biotin)按质量比4∶1预先混合孵育的ABC混合物进行检测,以提高ELISA法的灵敏度。棋盘滴定确定抗体工作最佳浓度为:捕获抗体(AF12)2μg/ml,检测抗体(生物素化DG5)2μg/ml。此条件下的夹心ELISA法线性范围为0~3 000pg/ml,检测限为68pg/ml,平均回收率为99.6%,精密度准确度良好。以正常人血清作为阴性对照,使用该夹心ELISA法测定结直肠癌、鼻咽癌和胆囊癌患者血清,发现三种肿瘤患者血清与正常人血清中的Nodal浓度均存在明显的统计学差异,可作为临床使用参考。

全自动酶标免疫分析仪的技术原理与故障案例分析

分析全自动酶标免疫分析仪的技术原理及典型故障案例,以提升全自动酶标免疫分析仪的使用效果。通过微粒子酶免疫分析(MEIA)技术完成酶免试验,以主定标、标准定标、定性定标及定标液修正为全自动酶标免疫分析仪的定标方式,提升酶免试验分析精度。通过分析全自动酶标免疫分析仪使用中遇到的洗板机、开机初始化报警、启动软盘、加样臂和滤光器等典型故障案例,提出故障解决应对措施,为全自动酶标免疫分析仪后期维修与管理提供参考。

ELISA与GICA在丙肝病毒抗体检测中的比较

目的探讨胶体金法(GICA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对丙型肝炎病毒(HCV)抗体的检测效果。方法选择解放军第二〇二医院2010年10月-2012年10月门诊收治的患者2210例丙型肝炎病毒患者作为研究对象,所有患者均分别采用胶体金法(GICA)和酶联免疫吸附试验法(ELISA),对比两种检方法的有效性。结果酶联免疫吸附检测法中丙型肝炎病毒抗体的阳性率为3.98%(88/2210),胶体金法中丙型肝炎病毒抗体的阳性率为4.03%(89/2210),两组检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胶体金法与酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体的效果均明显,在操作方式来说,胶体金法的操作更加简单、观察结果直观、时间短,在医院急诊以及临床的应用中比ELISA具有更好的优势,可以作为一种筛查丙型肝炎病毒的检测方法。

日本血吸虫病常用诊断方法现场查病效果的评估

目的评估几种常用血吸虫病诊断方法现场查病的效果。方法2005年11月,选取江西省鄱阳湖沿岸3个血吸虫病流行村的6～65岁居民为调查对象,用改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法,3张涂片)和尼龙绢集卵孵化法进行病原学检测的同时,分别用胶体染料试纸条法(DDIA)、快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA)及2种间接红细胞凝集试验(IHA-A和IHA-B)进行血清学检测,以评价该几种检测方法的效果。结果3村共检测居民1864人,平均粪检阳性率为9.7%。改良加藤法在血吸虫病中度、重度流行区的漏检率相对稳定,为20.0%～27.8%;尼龙绢集卵孵化法的漏检率在每克粪便虫卵数(EPG)>100时相对稳定(约25%)。DDIA、F-ELISA、IHA-A和IHA-B的平均阳性率分别为47.8%、50.0%、66.3%和40.1%。以病原学检测结果为金标准,DDIA、F-ELISA、IHA-A和IHA-B的敏感性分别为75.3%、65.8%、85.6%和76.0%;特异性为55.1%、51.7%、35.7%和63.6%。与其他几种免疫血清学诊断方法相比,IHA-B试剂的特异性、Youden指数、阳性似然比及粪检符合率最高。DDIA法与IHA-B法的符合率最高(77.3%),而F-ELISA和IHA-A的符合率最低(61.5%)。结论在血吸虫病中、重度流行区,改良加藤法虫卵检出率和稳定性均优于尼龙绢集卵孵化法;IHA-A的敏感性最高,IHA-B的4个指标最高,具有较高的现场使用价值,但需进一步提高其敏感性。

转基因作物及产品检测技术研究进展

随着转基因技术的迅猛发展,转基因作物及其产品的安全性问题受到广泛关注,世界各国纷纷加大了对转基因生物及其产品的管理力度。转基因检测是转基因安全管理的技术保障,本文就国内外转基因作物及产品的检测技术进行了综述,重点介绍了目前使用较广泛的PCR、ELISA等转基因检测技术的原理和特点,提出了今后转基因检测技术的发展趋势和研究方向。

猪圆环病毒感染诊断方法研究进展

猪圆环病毒分为1型和2型。目前还没有证据表明猪圆环病毒1型可以导致猪发病,但其在PK-15细胞中的广泛污染和在猪群中的高感染率已经引起了人们的高度关注,而猪圆环病毒2型的危害在于能够使感染猪只的免疫功能受到损害,这种可导致机体免疫抑制的病毒,由于经常以亚临床感染的形式出现,常易被忽视。为了更好地控制猪圆环病毒的感染,迫切需要寻找一种适合的快速准确的诊断方法。但目前在临床诊断和实验室的诊断过程中,单一的诊断方法往往受到多种因素的影响,这就需要根据目前各种检测猪圆环病毒的方法及其优缺点进行分析,应用多种方法相结合,优化检测手段,为寻找一种适合的快速准确的诊断方法、制定合理的免疫程序和发展新型的诊断方法提供参考。

酶联免疫吸附反应的技术进展及应用

以常规的酶联免疫吸附法为基础,不断改进,形成了多种酶联免疫吸附法,如模块化ELISA,双位点一步法,捕获法测IgM抗体,生物素、亲和素系统,斑点酶链免疫吸附试验,硝酸纤维素膜微粒ELISA等方法。酶链免疫吸附法在医药,食品加工业,农牧渔业等领域有着广泛的应用:如乙型肝炎,莱姆病,急性心肌梗死的早期诊断,定量检测内毒素,HIV抗体初筛,SARS病毒的快速检测;检测食品中的毒素,残留农药,微生物及其它成分;检测香蕉有关病毒,小麦黄花叶病毒,棉花黄萎病菌毒素,转Bt基因抗 虫棉,检测水产品中氯霉素的残留量,猪细小病毒(PPV)血清抗体,禽脑脊髓抗体等。

猪圆环病毒Ⅱ型在育肥猪机体内的残留时间检测

为弄清猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)对其正常生长及繁殖性能的影响,采用ELISA及PCR检测方法,对1例感染PCV病毒的长白猪进行PCV2的抗体水平检测及其在猪机体的残留时间研究。结果表明:ELISA检测,2月龄、4月龄、6月龄和8月龄的血清抗体值分别为0.445、0.522、0.396和0.225,PCV2抗体水平呈先增高后降低的趋势;PCR检测诊断,不同时期的检测结果均为阳性,但病情逐渐恢复到正常状态,生产性能有所下降。该猪感染PCV2后患病猪病情即使逐渐好转,但PCV2仍在机体内长期存留,使猪群长期不断地向外界排毒,给周围的环境造成严重危害。