对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒单克隆抗体的ELISA快速检测

对虾病毒性暴发病对我国对虾养殖业的危害十分严重,其病原为皮下及造血组织坏死杆状病毒(ｈｙｐｏｄｅｒｍａｌａｎｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＨＨＮＢＶ)[1]或称为对虾白斑综合症病毒(ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｓｙｎｄｒｏｍｅｂａ?..

一种检测濑尿虾中镉残留的直接ELISA(英文)

为了快速而简单地检测镉残留,以镉特异性单克隆抗体与酶标抗原为基础,构建了一种直接竞争的酶联免疫吸附测定方法.该方法的检测下限为0.2μg/L,IC50为3.01μg/L,其他金属螯合物的交叉反应均低于1.6 %,检测的变异系数为6.67 %～9.09%.该方法石墨炉原子吸收光谱法的检测结果的相关系数为0.988 .结果表明,所构建的直接竞争的酶联免疫吸附测定方法能快速而又准确地测定濑尿虾中镉残留的含量.

非洲猪瘟病毒CP312R蛋白的真核表达及单克隆抗体制备

为制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CP312R蛋白的单克隆抗体,以真核表达ASFV的CP312R蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,并通过间接免疫荧光法(IFA)对获得的单克隆抗体进行反应性鉴定。结果利用杆状病毒表达系统(baculovirus expression system,BES)构建获得重组转移载体pOET3-CP312R,与杆状病毒基因组flashBAC^(TM)ULTRA共转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒AcMNPV-CP312R,且该病毒以胞内可溶形式表达出重组ASFV CP312R蛋白质。通过蛋白质印迹法鉴定显示重组CP312R蛋白可以与ASFV阳性血清发生特异性反应。此外,筛选获得2株针对重组CP312R蛋白的单克隆抗体(McAb),间接ELISA方法鉴定抗体滴度不低于1∶1024000。IFA试验检测表明,单克隆抗体与非洲猪瘟抗原发生特异性反应。本研究为非洲猪瘟亚单位疫苗研发及血清学检测方法的建立提供物质储备。

抗土霉素单克隆抗体的制备及其在虾中土霉素残留的检测应用(英文)

研究目的：抗土霉素单克隆抗体的制备和特性分析，并用于间接竞争酶联免疫吸附测定法（icELISA）分析虾样品中土霉素的残留。创新要点：本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2．4F。研究方法：重要结论：用细胞杂交技术使土霉素．牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC／c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2—4F、7-3G和11-11A），并制备它们的单克隆抗体。通过ieELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度（IC-50）和交叉反应率，明确其灵敏度和特异性。实验结果发现单克隆抗体2—4F具有最高的灵敏度，对土霉素的IC50为7．01ng／ml，且该单抗特异性强，仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应，而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时，其批内和批间回收率分别为82％～118％和96％～113％，变异系数分别为3．9％～13．9％和5．5％～14．9％。因此，单克隆抗体2．4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。