一种简便快速筛选双位点单克隆抗体方法的建立

本文建立了一种无需对单克隆抗体(McAb)进行纯化和酶标记,利用市售酶标记抗体既可筛选双位点McAb的简易方法。其基本原理是,首先将待筛选McAb与酶标抗体制成McAb-酶标抗体复合物,再以此复合物作示踪剂进行夹心ELISA。若夹心孔OD492值高于第一、二阴性对照孔之和者, 提示所筛选McAb可能为双位点抗体。文中还对应用该方法时的注意事项进行了讨论。

检测血清甲胎蛋白的双位点一步法ELISA及其临床应用

应用两种针对不同抗原位点的单克隆抗体(MeAb)建立的双位点一步法ELISA,简称两点一步法,检测抗原物质,不仅操作简便、快速,而且还可以达到改善检测系统灵敏度、精确性及重复性的目的。 1981年Votila首先报道用二点一步法检测人血清甲胎蛋白(AFP)含量,证明了这一方法的优越性。1986年刘杲等报道了抗人AFP McAb的制备、双位点夹心ELISA的建立及在检测血清AFP中的初步应用。1987年周鸣、刘杲报道了检测血清AFP的两点一步法。我们应用两种抗AFP不同抗原位点的McAb,通过选择合适的抗体提纯方法,应用马来酰亚胺法制备辣根过氧化物酶(HRP)-Fab’结合物以及选用灵敏的四甲基联苯胺(TMB)底物等方面的工作,建立了适合于临床检测用的血清AFP两点一步ELISA测定法。

酶联免疫吸附反应的技术进展及应用

以常规的酶联免疫吸附法为基础,不断改进,形成了多种酶联免疫吸附法,如模块化ELISA,双位点一步法,捕获法测IgM抗体,生物素、亲和素系统,斑点酶链免疫吸附试验,硝酸纤维素膜微粒ELISA等方法。酶链免疫吸附法在医药,食品加工业,农牧渔业等领域有着广泛的应用:如乙型肝炎,莱姆病,急性心肌梗死的早期诊断,定量检测内毒素,HIV抗体初筛,SARS病毒的快速检测;检测食品中的毒素,残留农药,微生物及其它成分;检测香蕉有关病毒,小麦黄花叶病毒,棉花黄萎病菌毒素,转Bt基因抗 虫棉,检测水产品中氯霉素的残留量,猪细小病毒(PPV)血清抗体,禽脑脊髓抗体等。