三种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的比较分析

目的:比较不同的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的性能差异,为基层兽医实验室选择合适的试剂盒提供参考。方法:采集174份已免疫的猪、羊血清样品,选用3个不同厂家的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体检测,比较各试剂盒的抗体阳性率、符合率和便捷性。结果:3种试剂盒的口蹄疫病毒O型抗体检测阳性率均在90%以上,符合率为89.66%;3种试剂盒的口蹄疫病毒A型抗体检测阳性率为56.90%95.98%,差别较大,符合率仅52.87%。结论:3种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的检测结果存在一定差异,且差异具有统计学意义(P<0.05);3种试剂盒均适用于口蹄疫病毒O型抗体的定性测定,不全适用于口蹄疫病毒A型抗体的定性测定。

不同厂家PEDV-IgA抗体ELISA检测试剂盒的对比分析

为比较市面上常用PEDV-IgA抗体ELISA试剂盒检测结果之间的相关性,挑选不同厂家生产的3款试剂盒检测了68份母猪初乳及78份免疫前后的后备母猪血清,并对检测结果进行了相关性分析。结果表明:不同试剂盒检测初乳和血清PEDV-IgA抗体结果差异较大,在进行实验室检测时,应注意合理选择试剂盒,并科学地分析和利用实验室检测结果。

猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用

对猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的稳定性及保存条件等进行了摸索,确定该试剂盒具有良好的稳定性,并可在2℃～8℃环境中的保存9个月。同时,测定了本试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率为92.62%;并将该试剂盒应用于免疫动物抗体的动态监测。

三种伪狂犬病病毒gE抗体ELISA检测试剂盒的比较

为比较3种品牌(A、B、C)伪狂犬病病毒(PRV)g E抗体ELISA检测试剂盒的临床使用效果,应用中和试验来标定伪狂犬病非免疫猪场的180份临床血清样品,同时用3种试剂盒进行检测,并对试剂盒的重复性、敏感性、特异性以及与中和试验结果的符合度等指标进行测定与分析。结果显示:3种试剂盒的批内稳定性均较好,变异系数均小于10%;批间重复性差异较大,变异系数最小者为8.09%,最大者高达21.31%;3种试剂盒的诊断特性良好,敏感性为95.56%~97.78%,特异性为94.44%~100%;各试剂盒检测结果与中和试验结果均完全相符(Kappa值为0.91~0.96)。比较结果表明,3种试剂盒均适用于临床样品的PRV g E抗体检测,其中稳定性及敏感性俱佳的试剂盒C更适用于PRV的持续监测、早期发现、引种检疫及净化效果评估,而特异性与准确性最高的试剂盒B更适用于贵重病畜的诊断淘汰。因此,生产实践中应根据诊断目的合理选择最适试剂盒。

国内外克伦特罗ELISA检测试剂盒评价

根据B/Bo-50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加检验、实际样品检验等方面的比较结果对两种克伦特罗ELISA检测试剂盒(A:中国兽医药品监察所研制,B:德国r-Biopharm公司研制)进行评价.结果表明,试剂盒A的50%抑制浓度低于1.0 nG/mL;检测范围在0.10～3.0 ng/mL之间;标准溶液浓度梯度中包括1.0 ng/mL这一限定值;板内变异系数小于13.7%,板间变异系数小于8.8%;样品回收率在70%～110%之间;实际样品检验和试剂盒B检样的阳性符合率为95.5%.试验证明,试剂盒A与试剂盒B的水平相当.

三种氯霉素ELISA检测试剂盒评价

本试验选择三种氯霉素检测试剂盒(分别产于美国(A)、英国(B)和德国(G))及不同的前处理方法对牛奶及鸡肝组织中的氯霉素残留进行检测。从B/Bo50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加试验、实际样品检测等方面对三种试剂盒及前处理方法进行对比试验,结果表明试剂盒A、B、G对缓冲液配制的药物标准液的50%抑制浓度均低于1ng/mL;三种试剂盒的检测范围分别为0.1～2.0ng/mL(A),0.14～21.0ng/mL(B),0.05～4.05ng/mL(G);板内变异系数均小于11.3%,板间变异系数均小于17.4%;样品回收率在70%～120%之间。

蓝耳病病毒抗体ELISA检测试剂盒的“两步法”评价

本研究利用"两步法"对蓝耳病试剂盒进行了使用效果评价:第一步,利用18份参考血清对试剂盒进行初筛,淘汰检测准确率低的试剂盒;第二步,利用参考血清和临床样品,分别开展最低检测限、重复性以及诊断敏感性和诊断特异性分析。结果显示,A、B、C、D 4种市售试剂盒的初筛符合率均为100%,诊断敏感性和诊断特异性分别为94.58%和97.14%、94.58%和89.2%、93.1%和90%、96.55%和85%。其中,A和B为通用型试剂盒,能够检测欧洲型和美洲型蓝耳病;C和D均为美洲型检测试剂盒;重复性上,D试剂盒批内与批间变异系数都较小,重复性较好。本研究首次提出了"两步法"试剂盒评价体系并利用这一体系对4种蓝耳病试剂盒进行了评价,不仅为蓝耳病试剂盒的选择提供了依据,也为今后其它动物疫病检测试剂盒的评价提供了参考。

鸭瘟病毒抗体间接ELISA检测试剂盒的研制

将鸭瘟病毒(DPV)CHv株经过鸭胚成纤维细胞增殖、反复冻融、差速离心和蔗糖密度介质离心制备纯化抗原,建立了用于检测鸭血清中抗DPV特异性IgG抗体的间接ELISA方法,并对其进行了标准化研究,确定了最佳工作条件,研制了相应的检测试剂盒并对盒内各组分的保存条件、质量控制以及试剂盒的特异性、重复性进行了研究。结果显示,4.75μg/孔的纯化DPV抗原包被反应板可获得良好的特异性和敏感性,1∶100稀释的待检血清样品反应后D405 nm值换算为抗体效价的标准直线方程为y=1.573+3.552x(r=0.953,n=40)。试剂盒在4℃保存3个月或-20℃保存10个月后各项性能都很好。应用该试剂盒对皮下注射、口服和滴鼻免疫DPV弱毒的20日龄樱桃谷鸭血液中抗DPV特异性IgG抗体效价进行了测定,皮下免疫鸭于第6 d,口服和滴鼻免疫鸭于第9 d可在血清中检测到DPV特异性抗体,且至第60 d时依然可检测到高效价抗体。证实,该试剂盒可用于鸭瘟的血清流行病学调查和鸭场免疫抗体水平的监测。

苏丹红Ⅰ直接竞争ELISA检测试剂盒的研制

直接包被多克隆抗体建立了苏丹红ⅠELISA检测技术,研制苏丹红ⅠELISA检测试剂盒。结果表明,制备的多克隆抗体对苏丹红Ⅰ亲合力强、特异性高,试剂盒标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1.55～100μg/L,50%抑制率(IC50)为13.52μg/L,灵敏度(IC10)为1.95μg/L,平均批内与批间变异系数分别为7.6%与10.6%,与苏丹红Ⅱ、Ⅲ的交叉反应率分别为4.40%和1.70%,与苏丹红Ⅳ及其他违禁食品染色剂交叉反应率低于0.01%;干辣椒、辣椒粉、辣椒油与辣椒酱等4种样品的苏丹红平均添加回收率分别为88.1%、91.4%、78.2%和84.3%,最低检测限分别为1.82、1.71、2.19和2.12μg/kg;与HPLC检测方法具有较高的相符性,4种样品相关系数分别为0.95,0.94,0.86和0.87;该试剂盒在4℃下至少可保存180d,可用于辣椒及其制品中苏丹红Ⅰ的批量快速低成本筛查。

饲料中喹乙醇ELISA检测试剂盒的研制及性能分析

本研究旨在研制快速检测饲料中喹乙醇的ELISA试剂盒(OLA-Kit)。作者用喹乙醇单克隆抗体(OLAmAb)建立间接竞争ELISA方法,组装OLA-Kit,并对试剂盒的性能进行评估。结果表明:OLA-Kit的标准曲线呈典型的反S型,相关系数R2=0.976 7,线性范围为1～243μg·L-1,半数抑制浓度(IC50)为(14.29±3.75)μg·L-1,检测限为0.79μg·L-1,定量限为4.0μg·L-1,临界值(猪饲料)为83.37μg·g-1,基质对该试剂盒的检测结果影响不大;猪、鸡、鱼饲料的不同浓度添加回收率均大于74.40%,平均批内和批间变异系数均小于15%;试剂盒与喹胺醇的交叉反应率(CR%)为17.93%,与MQCA、QCA及其他喹喔啉类药物几乎无反应性,可在2～8℃保存6个月以上;OLA-Kit与HPLC法测定猪饲料中喹乙醇添加回收率没有显著差异(P≥0.05)。本研究成功研制出敏感、特异、准确的喹乙醇ELISA检测试剂盒,可用于饲料中该药物的快速检测和批量筛查。

猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒的制备及准确性评价

目的:以金标准试剂盒为参照,对新研制的猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒进行准确性评价,以期为我国实验灵长类动物产业提供优质廉价的检测试剂。方法:利用3个批次共表达猴B病毒gD和g B蛋白的细胞上清分别制备ELISA检测试剂盒,与金标准试剂盒(VRL的ELISA试剂盒)同时对667只食蟹猴血清进行检测,考察新研制剂盒的准确性;然后,挑选强阳性、弱阳性、阴性样品,用另外2个批次ELISA试剂盒检测,考察不同批次试剂盒检测结果的稳定性。结果:金标准试剂盒对667只食蟹猴血清抗体检测结果为阳性280份、阴性387份,而新研制的ELISA试剂盒结果为阳性282份、阴性385份;与金标准相比,阳性样品的符合率为98.93%(277/280),阴性样品的符合率为98.97%(383/387),总体符合率为98.95%(660/667)。对100份强阳性样品、70份弱阳性样品、108份阴性样品及7份差异样品的重复检测表明,除1份弱阳性(金标准为阴性)检测为阴性外,其余样品与前期一致。结论:与金标准相比,新研制的试剂盒具有较高的准确性,可用于猴B病毒抗体的检测。

PPA-ELISA检测试剂盒在猪瘟抗体临床监测中的应用

近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，转变为隐性感染和亚临床感染，临床表现也更加复杂，既有区域性流行，又有零星散发，既有高死亡率的急性症状，又有持续感染的温和性症状，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，病理剖检也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来很大困难。尽管血清学抗体检测方法很难有效区分疫苗毒与野毒产生的抗体，但由于其具有使用方便、一次检测量大和血清容易保存等优点而被广泛应用，在猪瘟流行状态监测和流行病学调查等方面有着重要作用，也是免疫猪群抗体水平监测的主要方法，对疫苗免疫效果评价及免疫程序的制定均具有重要意义词。本研究应用猪瘟病毒PPA—ELISA抗体检测试剂盒对436份免疫猪血清样品进行检测，旨在了解猪瘟的疫苗免疫效果，合理指导猪瘟的防疫，为猪瘟的综合防控提供参考。

两种HBVM诊断试验ELISA检测试剂盒的性能评价与比较

目的建立乙型肝炎标志物酶联定性诊断试剂盒的方法学性能评价方案和实验方法。方法利用受试者工作曲线（ROC）科学、合理的确定新创和理利两种酶联免疫定性检测试剂盒检测结果判定的截断点（阚值），同时将此实验结果与厂商提供的结果判定标准相比较，观察该两种试剂盒在不同截断点下的诊断效度、信度和诊断价值的差异。结果两种酶联免疫试剂测定HBV-M在ROC截断点下新创试剂检测HBs＆Ag，HBsAb，HBeAg诊断试验的效度、信度和诊断价值均明显优于理利试剂，而检测HBcAb则不如理利试剂，检测HBeAb两者却相似。在厂商截断点下，新创试剂检测HBV—M的效度、信度和诊断价值明显比理利试剂强。无论以A还是COI为结果判定的指标，只要阴性内对照A结果稳定，各试剂检测HBV—M的LLD的结果是基本一致的；新创试剂的LLD要比理利试剂的低；ROC曲线截断点确定的LLD比厂商提供截断点所确定的LLD要低。新创试剂检测HBv—M除阴性结果外，稳定性均比理利试剂好。两种一步夹心法酶联免疫试剂检测HBsAg，HBsAb和HBeAg的高值标本均存在钩状效应（带现象），理利试剂的钩状效应比新创试剂更明显。但两种试剂的一步免疫抑制竞争法检测HBeAb和HBcAb均无明显的钩状效应。结论酶联免疫定性检测HBV—M诊断试验的效度、信度和诊断价值的评价与比较是其试剂盒检测性能评价与产品质量比较的重要方面。诊断试验的ROC曲线是HBV—M酶联试剂截断点分析、检测性能评价、产品质量比较的重要工具，值得厂商借鉴和临床推广应用。

ELISA检测试剂盒在出入境检验检疫中的应用与质控

介绍了ELISA检测试剂盒在检验检疫中的应用情况、面临的问题及当前的监管现状,并探讨了ELISA检测试剂盒的质控评价方法。

实验大鼠仙台病毒ELISA检测试剂盒的研制及其初步应用

报导实验大鼠仙台病毒血清抗体IgG ELISA检测试剂盒的研制过程及其初步应用。在ELISA反应条件及试剂盒的实用性方面进行了研究,首次进行了试剂盒的阴性对照血清的标化;并且同其它血清学方法进行了比较。结果表明,试剂盒的敏感性高、特异性强、重复性良好,操作简便,适用于常规检测。通过对京津地区六个单位的实验大鼠仙台病毒抗体检测发现,在普通大鼠中,阳性率高达81％:在清洁大鼠中,未发现仙台病毒的感染。

口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒与其改进型试剂盒的比对试验

为了评估田东县动物疫病预防控制中心兽医实验室检验质量,了解同一检测项目不同检测试剂盒检验结果的差异情况,实验室于2020年11月25日进行了口蹄疫O型抗体检测试剂盒比对试验。目的在于检验口蹄疫O型抗体不同检测试剂盒对检验结果的影响及敏感度,以及时发现存在问题,解决问题,不断提高实验室检测能力水平。

EP硝基呋喃类代谢物ELISA检测试剂盒:检测更快速、更准确

硝基呋喃类药物（Nitrofurans）是一类广谱抗生素,曾被许多国家用作杀菌剂、驱虫剂及动物生长促进剂。但随着相关学科的发展,硝基呋喃类药物被发现在动物体内极不稳定,几个小时后便会迅速代谢分解,而大部分代谢产物会与动物组织中的蛋白质迅速结合,并稳定存在几个星期,对动物及人体造成了极大的危害。

两种PCV2抗体ELISA检测试剂盒检测效果比较

为研究比较国内市售两种PCV2抗体ELISA检测试剂盒(ZJ-ELISA、HB-ELISA)的检测效果,以期为猪群PCV2抗体监测选择试剂盒提供参考。首先通过间接免疫荧光方法(IFA)测定44份猪血清的PCV2抗体滴度,并以此为标准,判定猪血清中PCV2抗体的阴阳性,然后利用两种PCV2抗体ELISA检测试剂盒分别测定上述血清的OD值,并判定PCV2抗体阴阳性。通过计算各种试剂盒检测结果与IFA检测结果的符合率以及配对卡方检验及Kappa检验,判定最优检测试剂盒。结果表明,国内市售两种PCV2抗体检测试剂盒与IFA检测结果的总符合率均为86.36%(38/44),配对卡方检验及Kappa检验表明国产试剂盒与IFA检测结果差异不显著。