间接竞争ELISA法测定稻田土壤中除草剂毒莠定的残留量

通过对反应体系中酶标二抗（辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG）和抗体的最佳稀释浓度等条件的筛选和确定,最终建立了一种快速灵敏地测定污染稻田土壤中毒莠定残留量的方法--间接竞争ELISA分析方法.结果表明,酶标二抗和抗体的最佳稀释度均为1：500（体积比）,毒莠定的检出下限达到5 ng·mL^-1,在0.07～0.7μg·mL^-1浓度范围内有良好的线性;土壤浸出液加样的平均回收率为104.11%,变异系数在3.13%～11.13%之间,符合农药残留分析的要求;样品基质对检测结果没有干扰.

ELISA酶联免疫吸附测定法简介

近年来由于工业"三废"处理不当,引起了对农作物、畜禽及水产品的污染;农业与畜牧业生产中大量使用农药、化肥、抗生素、生长素,引起农药、抗生素、生长素残留超标;流通过程中的保存、包装不当造成霉菌、毒素的污染;在食品的生产环节中,不法者为了牟取暴利掺杂、使假、滥用添加物质引起的食品安全问题不断发生.

ELISA法测定小鼠血清中流脑抗体效价

目的采用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)测定流脑疫苗效价,同时为提高效价测定的准确度,选定包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比,为疫苗效价测定提供科学依据。方法分别以不同浓度C群多糖抗原液为包被抗原,以稀释过的免疫小鼠血清为待测抗体,采用ELISA间接测定法测定抗体效价,寻求包被抗原最佳工作浓度;然后包被抗原在其最佳工作浓度下包被酶标板,以不同稀释比的免疫小鼠血清为待测抗体,测定血清中抗体效价,寻求待测血清最佳稀释比;最后在包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比下,测定小鼠血清中流脑抗体的效价。同时检测该方法的特异性、稳定性和重复性。结果 ELISA测定流脑疫苗效价的包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比分别为160μg/mL和1∶4,同时该浓度下测定的免疫小鼠血清中流脑疫苗抗体效价为(1.274±0.003),阳转率为100%。说明该批疫苗产品合格(判定标准:阳转率≥90%)。批内批间变异系数均<7%,表明该测定技术具有良好的稳定性和重复性。结论建立了一种灵敏、特异、简便易行的ELISA法检测流脑疫苗效价,为流脑的预防、控制和诊断提供了一种技术手段。

人Tamm-Horsfall蛋白(THP)自身免疫抗体快速AB-ELISA法的建立

目的 建立人 Tamm- Horsfall蛋白 ( THP)自身免疫抗体的快速 AB- EL ISA测定法。方法 在提取纯化人 Tamm- Horsfall蛋白 ( THP)后 ,制备生物素 - THP,建立了人 THP自身免疫抗体 ( Ig G)快速 AB-ELISA(夹心 )测定法。结果 此法标准曲线范围 1～ 5 0μg/ml,灵敏度 1μg/ml,实验内变异系数 6.5 6% ,实验间变异系数 1 0 .35 % ,同时测定 1 0 0例正常人 THP自身免疫抗体 ( Ig G)为 0～ 33.81 μg/ml。结论 经实验表明该法灵敏 ,重复性较好 。

固相酶联免疫测定法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用

目的探讨固相酶联免疫测定(ELISA)法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用价值。方法选取登革病毒感染早期患者血清171份,非登革病毒感染发热患者血清11份,正常人血清10份,采用ELISA法检测全部192份血清的登革病毒NS1抗原和IgM抗体;采用逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶酶切片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)技术对发病5 d内的125份血清进行扩增和鉴定分型;并采用C6/36细胞微量培养法对发病第1、2天的41份血清进行登革病毒分离培养。结果登革病毒感染患者发病2 d内、3～5 d以及6～10 d血清NS1抗原的检出率分别是92.7%(38/41)、83.3%(70/84)、10.9%(5/46);IgM抗体的检出率分别是2.4%(1/41)、51.2%(43/84)、97.8%(45/46);非登革病毒感染的发热患者及正常人血清中,有1例疟疾患者血清登革病毒IgM抗体呈阳性,NS1抗原无一例阳性。RT-PCR在登革病毒感染患者发病第1、2天和3～5天的检出率分别是85.4%(35/41)、83.3%(70/84);登革病毒感染患者发病第1、2天血清的病毒分离培养阳性率分别是80.0%(16/20)、38.1%(8/21),总分离率58.5%(24/41);RT-PCR-RFLP分型鉴定技术及间接免疫荧光法(IFA)均证实2006年广州流行株为登革Ⅰ型病毒。结论ELISA法检测登革病毒NS1抗原操作技术成熟,且具有敏感性高、特异性好的特点,对登革病毒感染的早期诊断和疫情的早期控制具有重要意义,适合于基层医疗机构常规应用。

实验方法与改进

ELISA检测抗荚膜组织胞浆菌抗体方法的建立；高迁移率族蛋白B1单克隆抗体制备与竞争ELISA测定法的建立;液相免疫技术的建立及其有关反应特征的探讨;贝克曼CX4生化仪上使用开放试剂测试肝功能项目的探讨;

转基因抗虫玉米Bt蛋白表达量的研究

应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测转基因抗虫玉米不同生长期不同部位的Bt蛋白表达量。结果显示:Bt毒蛋白在玉米乳熟末期的第15叶中表达量(0.225%)最高,在花粉中表达量(0.011%)最低。叶、茎、髓、花丝、穗轴及粒的Bt蛋白含量及比例随着作物的生长呈上升的趋势。Bt毒蛋白最低检出量为0.5ng/mL。

转基因抗虫水稻中Bt蛋白表达量的研究

[目的]对转基因抗虫水稻中Bt蛋白表达量进行研究。[方法]应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测转基因抗虫水稻生相同生长时期不同部位的Bt蛋自表达量。[结果]转基因水稻灌浆期不同组织中Bt蛋白表达绝对含量的高低顺序为:叶片>未成熟种子及颖壳>根>茎杆;在水稻不同的生长发育(分蘖期、抽穗期和灌浆期)阶段,转基因Bt水稻中Bt蛋白的含量有一些变化;一般在水稻生长后期Bt蛋白的浓度有所下降,但幅度不大,对其抗性不会造成太大影响。[结论]该试验对田间害虫的防治以及转基因水稻的育种都具有重要意义。

转Bt基因玉米叶片中Bt蛋白的表达和分泌研究

以转Bt玉米Mon810及其亲本非转基因玉米为研究对象,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测Mon810玉米叶中Bt蛋白表达量和叶表Bt蛋白分泌量,结果表明叶组织和叶表均可检测到Bt蛋白,组织内Bt蛋白量从苗期到抽丝期随着植株营养生长的加快呈上升趋势,至抽丝期达到顶峰,之后逐渐降低;叶表Bt蛋白分泌量变化无明显规律性。

转基因抗虫水稻中BT蛋白表达量的研究(英文)

对转基因抗虫水稻中Bt蛋白表达量进行研究。[方法]应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测转基因抗虫水稻生同生长期不同部位的Bt蛋自表达量。[结果]转基因水稻灌浆期不同组织中Bt蛋白表达绝对含量的高低顺序为:叶片>未成熟种子及颖壳>根>茎杆;在水稻不同的生长发育(分蘖期、抽穗期和灌浆期)阶段,转基因Bt水稻中Bt蛋白的含量有一些变化;一般在水稻生长后期Bt蛋白的浓度有所下降,但幅度不大,对其抗性不会造成太大影响。[结论]该试验对田间害虫的防治以及转基因水稻的育种都具有重要意义。

类风湿因子与抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿关节炎诊断价值的分析

目的比较检测类风湿关节炎(RA)患者血清中的类风湿因子(RF)与抗环瓜氨酸肽抗体(抗-CCP抗体),探讨RA的早期诊断方法。方法对已确诊的42例RA患者、51例非RA的自身免疫病患者同时测定RF和抗CCP抗体,并对检测结果进行比较。结果42例RA患者中,抗-CCP抗体和RF对RA诊断的灵敏度分别为54.7%,65.3%,特异性分别为96.1%,73.4%。抗-CCP抗体的特异性比RF高,但敏感性比RF低。结论RF对RA具有较好的敏感性,抗-CCP抗体对RA具有高度的特异性,联合检测RF与抗-CCP抗体对RA患者的早期诊断具有非常重要的价值。

不同肽段抗体对IL-17抑制率的比较

目的:设计IL-17疫苗,将其免疫新西兰兔,生产并纯化出针对IL-17的抗体,通过检测抗体的结合率以及对IL-17功能的抑制率,筛选出一种对IL-17功能有高抑制率的疫苗。方法:筛选设计4条IL-17肽段(0001、0002、0003、0004),用设计的4个IL-17的肽段偶联后获得的疫苗免疫新西兰兔,产生针对不同肽段的抗体,用免疫亲和层析的方法,分离纯化抗IL-17抗体;用ELISA检测抗体与IL-17的结合,并对抗体进行中和活性鉴定。结果:IL-17疫苗(0002)免疫新西兰兔产生的抗体能IL-l7特异地结合,并且能够有效地阻断人IL-17刺激HT1080细胞产生IL-6。结论:所制备的IL-17疫苗(0002)所产生的抗体具有高度的特异性、稳定性及中和活性,为针对IL-17为靶点的药物的开发奠定了基础。

CMIA对HBsAg弱反应性血清标本的检测性能研究

目的评价化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)弱反应性血清标本的检测性能。方法统计CMIA和酶联免疫吸附测定法(ELISA)对门诊就诊患者血清的HBsAg检测阳性率,初步了解两种方法的检测敏感性。分别收集临床常规检验中部分经CMIA/ELISA检测结果为HBsAg弱反应性的血清标本,采用ELISA/CMIA进行平行检测,评估CMIA与ELISA对弱反应性标本的检测结果差异。同时,对所有HBsAg弱反应性标本通过中和确认试验对检测结果进行确认,明确CMIA检出的弱反应性结果的可靠性。选择HBsAg弱反应性的临床血清标本,根据EP-15A2文件,评价CMIA检测HBsAg弱反应性血清标本的精密度。结果对总共55737份临床就诊患者标本的检测显示,CMIA对HBsAg的阳性检出率显著高于ELISA(21.00%vs18.41%,P=0.032)。对183例CMIA检测为HBsAg弱反应性的血清标本进行ELISA检测的结果显示,ELISA检出阳性标本88例(48.09%)。以特异性抗体中和确认试验为金标准对183例血清标本的检测结果进行统计,结果显示CMIA检测阳性预测值91.80%;ELISA检测敏感性52.38%,阳性预测值100%。对50例ELISA检测为HBsAg弱反应性的标本,CMIA检测结果为47例为有反应性,其中3例两种方法检测结果不一致的标本经中和确认试验明确均为阴性。对于所有CMIA检测HBsAg结果为有反应性的标本进行分段分析的结果显示,CMIA检测值≥0.16IU/mL的标本,中和确认试验100%为阳性。精密度检测结果显示,CMIA检测弱反应性血清标本的重复性变异系数和中间精密度变异系数分别为5.06%和5.56%。结论对于HBsAg弱反应性血清标本,CMIA不仅具有更高的敏感性,同时也具有很好的可靠性和精密度。

洛阳地区猪戊型肝炎的血清流行病学调查

为调查洛阳地区猪戊型肝炎病毒的感染情况,采集该地区规模化猪场和散养户猪血清样品226份,通过双抗夹心酶联免疫测定法(ELISA)对血清中戊型肝炎病毒抗体进行检测。结果显示,洛阳地区猪戊型肝炎病毒抗体阳性率高达63.7%(144/226)。4个地区中最高的是伊川,阳性率为68.1%,最低的是新安县,阳性率为51.7%;散养猪(57.2%)的戊型肝炎病毒感染率低于养殖场饲养猪(75.3%);母猪的血清抗体阳性率(67.0%)与架子猪(61.4%)差异不明显。研究结果表明,洛阳地区猪感染戊型肝炎病毒非常普遍,且感染率较高。

发汗前后厚朴对IBS-C大鼠肠道菌群分布及5-HT、SP水平的影响

目的:研究发汗前后厚朴对便秘型肠易激综合征(IBS-C)大鼠的作用机制。方法:采用冰水灌胃法建立IBS-C大鼠模型。将大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组(1 mg·kg^(-1))、未发汗厚朴组(以下简称“厚朴组”,10 g·kg^(-1))及发汗厚朴组(10 g·kg^(-1))。观察大鼠体质量、粪便含水量、粪便数量变化;采用16S rRNA测序检测大鼠粪便肠道菌群的结构变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠结肠组织中5-羟色胺(5-HT)及P物质(SP)水平。结果:与模型组比较,给药后莫沙必利组、厚朴组、发汗厚朴组的粪便含水量和粪便数量明显升高(P<0.05)。16S rRNA测序结果显示,菌群门水平丰度前4种分别为厚壁菌门、拟杆菌门、螺旋体门、变形菌门,与空白组比较,模型组厚壁菌门相对丰度明显降低(P<0.05),螺旋体门相对丰度明显增加(P<0.05);与模型组比较,厚朴组及发汗厚朴组的厚壁菌门、螺旋体门比例趋近于空白组,且发汗厚朴组螺旋体门相对丰度低于厚朴组;在科水平上,菌群丰度前4种分别为乳酸菌科、S24_7、瘤胃球菌科、拟杆菌科,与空白组比较,模型组的乳酸菌科相对丰度明显降低(P<0.05),模型大鼠给药后厚朴组和发汗厚朴组的乳酸菌科相对丰度明显提高(P<0.05),且两组大鼠菌群结构趋近于空白组;在属水平上,菌群丰度前4种分别为乳酸菌属、Unspecified_S24_7、拟杆菌属、密螺旋体属,与空白组比较,模型组的乳酸菌属相对丰度明显降低(P<0.05),密螺旋体属的相对丰度则明显增加(P<0.05);与模型组比较,厚朴组与发汗厚朴组乳酸菌属和密螺旋体属菌群结构比例趋近于空白组,说明发汗前后厚朴均可恢复IBS-C大鼠肠道菌群结构。药理实验结果显示,与模型组比较,莫沙必利组的5-HT含量明显降低(P<0.05),厚朴组与发汗厚朴组的5-HT和SP含量均显著升高(P<0.01),且发汗厚朴组高于厚朴组。结论:发汗前后厚朴均可通过改善肠道菌群结构、调节5-HT和SP含量治疗IBS-C。

马勃孢子粉醇提物对小鼠全层皮肤缺损性创面的治疗作用考察

目的:比较马勃孢子粉和子实体的不同溶剂提取物对成纤维细胞和小鼠全层皮肤缺损性创面的药效差异,筛选马勃治疗创面的最佳用药部位。方法:将马勃孢子粉和子实体的水提物、醇提物对体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞(MSF)进行干预,通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法比较细胞增殖、划痕实验比较细胞迁移、流式细胞技术探究细胞周期、酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白生成量,同时建立小鼠背部全层皮肤缺损性创面模型,考察马勃孢子粉不同溶剂提取物的治疗效果,并采用紫外-可见分光光度法测定其不同溶剂提取物中指标成分的含量。结果:马勃水提物具有一定细胞增殖抑制作用,醇提物具有促进MSF增殖、迁移、分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的作用,且孢子粉功效显著优于子实体。在质量浓度为10 mg·L^(-1)时,马勃孢子粉醇提物处理的细胞增殖率最高可达(159.22±15.95)%,并促进MSF从G_(0)/G_(1)期的静止状态进入S期和G_(2)/M期的增殖状态,增殖指数增大,增高成纤维细胞迁移率及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的生成量。马勃孢子粉醇提物能有效促进创面愈合、促进创面组织上皮化完整、减少炎性细胞浸润、生成新生胶原纤维。成分含量测定结果显示,与子实体醇提物比较,孢子粉醇提物中多酚及黄酮类成分含量更高。结论:马勃孢子粉醇提物是马勃促进创面愈合的主要活性部位,具有较好的开发前景,其药效成分可能为多酚和黄酮类。

抗土霉素单克隆抗体的制备及其在虾中土霉素残留的检测应用(英文)

研究目的：抗土霉素单克隆抗体的制备和特性分析，并用于间接竞争酶联免疫吸附测定法（icELISA）分析虾样品中土霉素的残留。创新要点：本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2．4F。研究方法：重要结论：用细胞杂交技术使土霉素．牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC／c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2—4F、7-3G和11-11A），并制备它们的单克隆抗体。通过ieELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度（IC-50）和交叉反应率，明确其灵敏度和特异性。实验结果发现单克隆抗体2—4F具有最高的灵敏度，对土霉素的IC50为7．01ng／ml，且该单抗特异性强，仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应，而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时，其批内和批间回收率分别为82％～118％和96％～113％，变异系数分别为3．9％～13．9％和5．5％～14．9％。因此，单克隆抗体2．4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。