三种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的比较分析

目的:比较不同的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的性能差异,为基层兽医实验室选择合适的试剂盒提供参考。方法:采集174份已免疫的猪、羊血清样品,选用3个不同厂家的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体检测,比较各试剂盒的抗体阳性率、符合率和便捷性。结果:3种试剂盒的口蹄疫病毒O型抗体检测阳性率均在90%以上,符合率为89.66%;3种试剂盒的口蹄疫病毒A型抗体检测阳性率为56.90%95.98%,差别较大,符合率仅52.87%。结论:3种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的检测结果存在一定差异,且差异具有统计学意义(P<0.05);3种试剂盒均适用于口蹄疫病毒O型抗体的定性测定,不全适用于口蹄疫病毒A型抗体的定性测定。

4种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的评价

为评价国产狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的性能,选择4种国产品牌ELISA抗体检测试剂盒,分别检测463份已用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)测知狂犬病病毒抗体效价的犬血清,用Kappa检验和配对卡方检验评价ELISA试剂盒与FAVN检测结果的一致性和差异性,计算ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、符合率和重复性等,并比较4种试剂盒的使用范围、样品稀释倍数等参数。结果显示:经Kappa检验,4种试剂盒与FAVN一致性均为弱;经配对卡方检验,A、B试剂盒与FAVN检测结果的差异不显著(P>0.05),而C、D试剂盒差异显著(P<0.05)。诊断敏感性,D试剂盒最高,B试剂盒最低;4种试剂盒诊断特异性均较低,为29.5%~57.7%;各试剂盒符合率相当,为71.3%~72.8%。综合敏感性、特异性、重复性等考量因素,得出C试剂盒更能满足免疫后抗体检测需求,A试剂盒也较好,两者可作为候选试剂盒。结果表明,4种国产狂犬病病毒ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、批间稳定性等性能需进一步提高,以满足基层免疫抗体监测需求。

抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及竞争ELISA试剂盒的研制

利用合成的完全抗原(BSA-ENR)免疫小鼠,通过细胞融合技术和间接竞争ELISA筛选出了能分泌恩诺沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制恩诺沙星残留检测的竞争ELISA试剂盒(competitive ELISA ENR-Kit),并测定其性能。结果表明:筛选出的2株杂交瘤细胞,单抗亚类均为IgG1型,其中4G1-B3株的ENR mAb间接ELISA效价为1:1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/mol;竞争ELISA试剂盒的线性检测范围为0.05~101.6μg/L、灵敏度0.05μg/L、半数抑制浓度(IC50)1.1μg/L,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均小于0.01%,鸡肉样、鸡肝样、鱼肉样和牛奶样的平均添加回收率分别为81.5%8、7.6%、84.3%和95%,不同基质添加恩诺沙星标准品做竞争ELISA对ENR-Kit检测结果影响小,试剂盒保存期6个月以上。结果说明该竞争ELISA试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点,适用于ENR残留的快速检测。

不同抗HCV ELISA试剂盒在献血员筛选中敏感性的比较

本研究比较了德国产阿克苏（ＡＫＺＯＮＯＢＬＥ）和国产科华抗ＨＣＶＥＬＩＳＡ诊断试剂盒用于献血员筛选的敏感性。使用ＡＫＺＯ试剂盒于青岛市中心血站１２４２例职业献血员中筛查出４４份阳性血清，再将该４４份阳性血清用国产科华试剂盒检测，结果仅有１８份呈阳性反应，其它２６份均呈阴性反应；１３份经ＡＫＺＯ检测为阴性的血清，科华试剂盒检测全部呈阴性反应。统计学处理两试剂盒敏感性具有极显著差异（Ｐ＜０．０１）。表明国产科华试剂盒敏感性低于ＡＫＺＯ试剂盒，有待于进一步改进和完善。

不同厂家PEDV-IgA抗体ELISA检测试剂盒的对比分析

为比较市面上常用PEDV-IgA抗体ELISA试剂盒检测结果之间的相关性,挑选不同厂家生产的3款试剂盒检测了68份母猪初乳及78份免疫前后的后备母猪血清,并对检测结果进行了相关性分析。结果表明:不同试剂盒检测初乳和血清PEDV-IgA抗体结果差异较大,在进行实验室检测时,应注意合理选择试剂盒,并科学地分析和利用实验室检测结果。

8种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比对试验研究

为了评价不同品牌的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的有效性,从而保证实验室的检测结果更加的真实可信。本试验样品血清由北京测易生物科技有限公司提供的第一批124份和第二批240份血清样本,分别根据说明书进行8种不同品牌的非洲猪瘟ELISA抗体试剂盒进行检验。以3种进口品牌试剂盒分别比对,选定最优试剂盒作为参考标准。随后检测5种国产试剂盒的kappa一致性,敏感性、特异性和符合率,将5种品牌试剂盒的检测效果进行比对分析。

玉米赤霉烯酮ELISA定量检测试剂盒研制

目的研制玉米赤霉烯酮ELISA快速定量检测试剂盒,用以检测食品中抗玉米赤霉烯酮（ZEN）.方法在ZEN单克隆抗体基础上,用间接竞争酶联免疫吸附法研究试剂盒的各项指标.结果试剂盒最低检出浓度为1ng/ml,标准曲线的线性范围为1～200ng/ml,回归方程为Y=0.99-0.40X（R^2=0.99）;抗体对ZEN 50%的抑制浓度为16.3ng/ml;对玉米和小麦的平均加标回收率分别是96.5%和95.5%,变异系数分别是13.2%和10.9%;试剂盒4℃保质期超过6个月;对参试真菌毒素的交叉反应率均小于1%;实验室内的变异系数小于15%,实验室间变异系数小于20%;用本法与HPLC法同时检测美国维康公司玉米赤霉烯酮盲样,结果均在允许范围之内,且两种检测方法无差别.结论该试剂盒各项指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、稳定、专一的特点.

3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较

为比较3种抗牛支原体(M.bovis)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测M.bovis血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%。一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性。此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性。因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于M.bovis检测和开展流行病学调查。

氯霉素残留检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定

在建立氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上,研制出CAP残留快速检测试剂盒(CAP-kit),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP-kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.9953,检测范围为1.0μg/L～128.0μg/L,灵敏度为0.85μg/L,半数抑制浓度(IC50)为7.54μg/L,检测限为1.0μg/L;牛奶样、猪肉样的平均添加回收率为88.3%、82.5%,平均批内和批间变异系数均<15%;CAP-kit与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应;试剂盒在4℃可保存6个月。

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化,制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%,特异性为91.2%,敏感性为96.5%;与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8周～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

链霉素残留检测ELISA试剂盒的研制及应用

本研究采用EDC法人工合成链霉素抗原（SM—BSA），免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术获得了分泌抗链霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，建立了快速检测链霉素（SM）残留的酶联免疫方法，并成功研制了试剂盒。然后对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等技术指标进行检测，同时应用该试剂盒对生长猪尿液中的残留情况进行检测。结果表明：除双氢链霉素外，该试剂盒与其它抗生素类药物均无交叉反应；线性检测范围为1～1289g／L，相关系数R^2=0．9251，灵敏度为0．45μg／L，半数抑制浓度（IC50）为7．769g／L，检测限为19g／L；猪尿样的平均添加回收率为84．1％；基质对该试剂盒的检测结果影响不大。该试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合于SM残留的快速检测，具有较高的推广应用价值。

动物组织中磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA试剂盒的研制

在建立竞争ELISA方法的基础上,首次研制出检测磺胺二甲嘧啶的单克隆抗体快速检测试剂盒,并对其检测限、精密度、检测范围以及鸡肌肉组织中的添加回收实验做了详细研究。本试剂盒的检测限为1.0ng/ml,检测范围为1.0～81.0ng/ml,批内变异系数<8.9％,批间变异系数<9.5％,在10、60和200ng/ml水平鸡肌肉组织中添加,回收率为64.5％～85.5%,变异系数为6.0％～18.6%。与同类相关德国产试剂盒相比较,阳性符合率为100％。

多价鼠肝炎病毒抗体ELISA试剂盒的研制及应用

从6株鼠肝炎(MHV)病毒中筛选出A_(59),MHV_1及沪-79(Sh-79)3个毒株制成多价抗原的ELISA试剂盒。检测SPF和清洁级小鼠血清104份,又为0.037,SD为0.024,阳性临界值为0.207。经电镜检查,阻断抑制试验和IFA验证,证明本试剂盒特异性好。应用本试剂盒检测实验鼠群MHV抗体的敏感性单价抗原强。开放鼠MHV抗体阳性率为72％(161/223),Ⅱ级和Ⅲ级鼠为1.7％(2/117)。

鸭瘟病毒抗体间接ELISA检测试剂盒的研制

将鸭瘟病毒(DPV)CHv株经过鸭胚成纤维细胞增殖、反复冻融、差速离心和蔗糖密度介质离心制备纯化抗原,建立了用于检测鸭血清中抗DPV特异性IgG抗体的间接ELISA方法,并对其进行了标准化研究,确定了最佳工作条件,研制了相应的检测试剂盒并对盒内各组分的保存条件、质量控制以及试剂盒的特异性、重复性进行了研究。结果显示,4.75μg/孔的纯化DPV抗原包被反应板可获得良好的特异性和敏感性,1∶100稀释的待检血清样品反应后D405 nm值换算为抗体效价的标准直线方程为y=1.573+3.552x(r=0.953,n=40)。试剂盒在4℃保存3个月或-20℃保存10个月后各项性能都很好。应用该试剂盒对皮下注射、口服和滴鼻免疫DPV弱毒的20日龄樱桃谷鸭血液中抗DPV特异性IgG抗体效价进行了测定,皮下免疫鸭于第6 d,口服和滴鼻免疫鸭于第9 d可在血清中检测到DPV特异性抗体,且至第60 d时依然可检测到高效价抗体。证实,该试剂盒可用于鸭瘟的血清流行病学调查和鸭场免疫抗体水平的监测。

用二种ELISA法进行烟草花叶病快速诊断试剂盒的研究

以改良的间接ELISA和DotELISA为基础,研制了烟草花叶病毒(TMV)快速诊断试剂盒,其中抗体最佳工作浓度为1∶5000.通过模拟田间试验条件进行检测,并与电子显微技术相互印证,经过对云南省峨山?江川等县样品的测定,结果表明试剂盒具有敏感?特异?快捷3个特点,准确率分别为100%(间接ELISA)和98.7%(DotELISA).

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用 vero细胞增殖的 IBDV抗原建立了间接 EL ISA,用于定量检测 IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究 ,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒 ,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明 ,研制的试剂盒在 - 2 0℃保存至 6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为86 .7%。间接 EL ISA试剂盒与琼扩试验的符合率为 92 .5 %。该试剂盒可对大量血清样品进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速 ,更适合于大型鸡场 IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。

鸡传染性鼻炎单抗阻断ELISA诊断试剂盒的研究

本研究在单抗阻断ELISA方法的基础上成功地建立了鸡传染性鼻炎阻断ELISA诊断试剂盒，结果证明，本盒具有较子的敏感性、特异性和重复性，在对临床病鸡、人工感染鸡和免疫鸡的检测中，A型检出率可高达75％-90％，C型的检出率也可达到60％。试剂盒在37℃可保存7天以上，4℃可保存10个月，-20℃可保存1年以上。是一种适合推广应用的良好的鸡传染生鼻炎诊断产品。

新霉素阻断ELISA试剂盒的研制与应用

本研究旨在建立新霉素(Neomycin,NEO)免疫学检测试剂盒。以制备的抗NEO单克隆抗体(NEO mAb)为基础,建立阻断ELISA分析方法,组装新霉素阻断ELISA试剂盒,并对试剂盒的性能进行鉴定。结果表明,NEO试剂盒(NEO-kit)标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.990 3;检测范围为1.0～64.0μg.L-1,半数抑制浓度(IC50)为2.59μg.L-1,灵敏度为0.75μg.L-1,检测限为1.0μg.L-1。试剂盒除了和NEO阳性样品反应呈阳性外,与庆大霉素、链霉素、土霉素、沙丁胺醇、环丙沙星、二氟沙星、磺胺嘧啶及磺胺甲噁唑等其他药物均无交叉反应性。奶样、饲料样及肉样的平均添加回收率为89.50%、89.58%和87.92%;平均批内和批间变异系数均小于15%,而且批间变异系数小于批内变异系数;基质对NEO-Kit的检测结果影响比较小;NEO-Kit在4℃可保存6个月以上。试剂盒和HPLC-MS-MS对牛奶中新霉素回收率没有显著差异(P≥0.05)。试剂盒和HPLC-MS-MS对饲料样检测结果也无显著差异(P≥0.05)。本研究成功研制出敏感、特异、准确的NEO检测试剂盒。

孕酮ELISA试剂盒在牛奶乳汁检测中的初步应用

本实验利用自建的奶牛乳汁孕酮竞争ELISA法（酶标抗原法）研发了奶牛乳汁孕酮ELISA试剂盒。通过对试剂盒的特异性、灵敏性、重复性、稳定性和回收率等主要性能进行优化试验。结果表明：试剂盒可以在4℃条件下保存9个月,与睾酮、雌三醇、雌二醇无特异性反应,灵敏度为0.14 ng/mL,批内差异为4.11%,批间差异为6.26%,回收率为93.80%~107.60%,变异系数为5.65%。应用该试剂盒检测乳汁孕酮诊断奶牛妊娠与未妊娠的准确率分别为93.3%和95.8%。因此,该试剂盒性能良好,妊娠诊断效果理想,为今后在奶牛生产中的广泛应用奠定基础。

氟罗沙星残留检测间接竞争ELISA试剂盒的研制

【目的】利用蛋白质连接技术合成氟罗沙星(FLE)人工抗原,制备FLE高亲和力抗体,通过建立、优化FLE的icELISA检测方法研制出快速、灵敏的FLE残留检测间接竞争ELISA试剂盒。【方法】用DCC法偶联FLE和载体蛋白BSA合成免疫原FLE-BSA,用混合酸酐法偶联FLE和载体蛋白OVA合成包被原FIE-OVA,通过紫外扫描法(UV Scan)和聚丙烯凝胶电泳法(SDS-PAGE)鉴定人工合成抗原。选择经初步鉴定成功合成的FLE-BSA免疫SPF级6—7周龄Balb/c雌性小鼠5只,采用多点免疫法,对小鼠背部皮下4-6点注射免疫,免疫剂量为30μg/只,初免,用FLE-BSA PBS溶液与等体积FCA混合乳化后免疫;20 d后用FLE-BSA PBS溶液与等体积FIA混合乳化后免疫,免疫间隔3周,4次免疫后,利用间接ELISA和间接竞争ELISA测定其多抗血清效价和敏感性,选出效价高、敏感性好的小鼠多克隆血清,建立、优化FLE的icELISA检测方法,确定其包被浓度、包被时间、封闭液选择、封闭时间、抗体工作浓度、二抗稀释度、底物显色时间等条件,制备出FLE快速检测试剂盒,同时测定该试剂盒的灵敏度、精密度、准确度以及特异性等指标,并与高效液相色谱法做相关性比较,同时对市场上购买4个批次的氟罗沙星药品含量进行了实际测定,以确证试剂盒在实际应用中的质量。【结果】通过上述蛋白质连接技术所制备的免疫原经紫外扫描法和聚丙烯凝胶电泳法鉴定,结果显示BSA与FLE偶联后,FLE-BSA波峰整体出现右移且凝胶上BSA的泳动速度大于FLE-BSA,初步证明人工合成抗原偶联成功。通过间接ELISA和间接竞争ELISA方法测定5号小鼠多抗血清得到其效价大于2.5×104,抑制价为162.18 ng·mL-1。通过优化FLE icELISA检测方法,其工作条件:包被浓度:5μg·mL-1;抗体工作浓度:1﹕6400;二抗稀释度:1﹕1000;底物显色时间:10 min。所制备的试剂盒灵敏度为16.22 ng·mL-1,标准曲线回归方程为y=-0.3627x+1.3517(R2=0.9956),与同系药物及其它药物均无明显交叉反应,阳性猪肝样的回收率在67.5%—87.9%,平均78.7%,变异系数在9.34%—10.7%,平均10.0%;阳性猪肉样的回收率在74.0%—88.2%,平均81.42%,变异系数在8.3%—10.4%,平均9.48%;平均变异系数均小于15%;在500、250、150、75、30 ng·mL-15个标准浓度B/B0的批内变异系数在3.39%—6.68%,批间变异系数在4.69%—9.67%。批内和批间平均变异系数分别为5.07%和7.44%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0.9988),通过实际测定其结果基本符合2010年版《中国药典》中所规定的含量要求(90%—110%),进一步说明二者具有良好的相关性以及FLE-Kit的准确性。【结论】首次利用两种方法分别合成FLE免疫原和包被原,利用所制备的抗FLE血清建立并优化FLE残留icELISA检测方法,制备出FLE快速检测试剂盒。该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为氟罗沙星免疫学快速检测方法的建立奠定了坚实的基础。