间接能量测定法指导个体化营养方案对休克型肺炎患者能量代谢的影响

目的探讨间接能量测定法指导个体化营养方案对休克型肺炎患者能量代谢的影响。方法选择2020年1月至2023年1月在连云港市第二人民医院接受治疗的96例休克型肺炎患者,分别采用间接能量测定法(能量代谢监护仪)计算每日静息能量消耗(REE)值,根据随机数字表法分为观察组(48例)与对照组(48例),观察组制定个体化营养方案,对照组采用匀浆膳方案。比较两组患者营养支持治疗前后蛋白质代谢营养指标、上臂肌围、体质量指数、血糖及预后情况。结果观察组治疗2周后总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)水平、上臂肌围、体质量指数[分别为(66.42±12.37)g·L^(-1),(38.44±3.25)g·L^(-1),(28.37±2.89)g·L^(-1),(25.96±2.03)cm,(22.93±1.62)kg·m^(-2)]均高于对照组[分别为(58.57±11.48)g·L^(-1),(34.37±3.89)g·L^(-1),(24.88±3.16)g·L^(-1),(23.87±1.89)cm,(21.64±1.58)kg·m^(-2)](t=3.223,5.563,5.646,5.221,3.950,均P<0.05),而空腹血糖(FPG),餐后2 h血糖(2 h PG)水平[分别为(6.36±1.02)mmol·L^(-1),(8.05±1.64)mmol·L^(-1)]均低于对照组[分别为(7.54±1.09)mmol·L^(-1),(9.87±1.52)mmol·L^(-1)](t=5.476,5.639,均P<0.05)。观察组机械通气时间,ICU住院时间,28 d病死率及发热发生率[分别为(9.09±1.48)d,(15.36±1.78)d,18.75%,8.33%]均低于对照组[分别为(10.37±1.56)d,(17.49±1.67)d,27.08%,22.92%](t=4.124,6.046,χ^(2)=0.944,3.872,均P<0.05)。结论间接能量测定法指导个体化营养方案能有效改善休克型肺炎患者营养状况及预后。

破伤风人免疫球蛋白抗-HBs效价测定(ELISA法)方法验证

目的:对ELISA法测定破伤风人免疫球蛋白抗-HBs效价进行方法学验证。方法:根据《中国药典》(2020年版)“9401生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则”,对破伤风人免疫球蛋白抗-HBs效价测定(ELISA法)方法进行专属性、相对准确度、中间精密度、线性及线性范围的验证,并与放射免疫方法(RIA法)测定结果进行比对。结果:专属性验证中,回收率在88%~110%,实测与理论结果等效,样品、混合样品均与标准回归曲线平行;相对准确度验证中,相对偏倚在-6.9%~5.0%,回归曲线斜率0.9981;中间精密度验证中,几何变异系数<10%;线性验证中,相关系数为0.9970;方法范围为10~120 mIU/mL。ELISA法测得的每1 g蛋白质中抗-HBs结果平均值比RIA法低0.5 IU。结论:经验证,ELISA法可替代RIA法用于破伤风人免疫球蛋白中抗-HBs效价的测定。

间接竞争ELISA法测定稻田土壤中除草剂毒莠定的残留量

通过对反应体系中酶标二抗（辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG）和抗体的最佳稀释浓度等条件的筛选和确定,最终建立了一种快速灵敏地测定污染稻田土壤中毒莠定残留量的方法--间接竞争ELISA分析方法.结果表明,酶标二抗和抗体的最佳稀释度均为1：500（体积比）,毒莠定的检出下限达到5 ng·mL^-1,在0.07～0.7μg·mL^-1浓度范围内有良好的线性;土壤浸出液加样的平均回收率为104.11%,变异系数在3.13%～11.13%之间,符合农药残留分析的要求;样品基质对检测结果没有干扰.

测定RHDV抗体的间接ELISA方法的建立

通过氯仿和PEG6000处理,SephadexG 200层析纯化RHDV抗原,建立了检测RHDV抗体的间接ELISA试验方法。该方法的抗原最适包被浓度为10μg/ml,血清样品最佳稀释度为1∶400。与血凝抑制试验方法(HI)等相比,该方法具有快速、简单、特异性和重复性好等优点。

胸腺素α1间接ELISA测定方法的建立及其在转基因蓝藻中的应用

利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可用于转基因微藻Tα1表达量的定量检测 ,同时表明Tα1基因能在聚球藻7942中稳定表达。

间接ELISA测定GRF方法的建立

建立了间接 ELISA定量测定生长激素释放因子 ( GRF)的方法。其基本程序为 ,抗原包被、5%牛血清白蛋白和 5%猪血清封闭、一抗反应 (山羊抗人 GRF1～ 2 9抗体 )、二抗反应 (生物素化兔抗山羊 Ig G)、链霉卵白素 -HRP反应、DAB显色。最佳工作条件为 ,一抗 1∶ 1 6 0 0、二抗 1∶ 32 0 0、链霉卵白素 -HRP0 .5mg/L。在上述条件下 ,绘制了标准曲线 ( 2～ 4 0 ng) ,并测定了中国仓鼠肾细胞 ( CHO)表达

间接ELISA法测定猪源大肠杆菌外膜蛋白抗体方法的建立

大肠杆菌是条件性致病菌，是引起仔猪黄痢、白痢和成年猪水肿病的重要病原。大肠杆菌病对规模化猪场哺乳仔猪的危害较严重，给养猪业造成了严重经济损失。

间接ELISA法测定猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的含量

目的建立猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的测定方法,为药代动力学研究提供简单快速的方法。方法采用EGFR包外区包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测抗EGFR单克隆抗体的间接ELISA法,并对其特异性、精密度、准确度、稳定性和稀释效应进行确证。结果在0.46～14.56ng·mL-1浓度范围内,测定方法具有较好的logistic曲线拟合关系,最低检测限为0.46ng·mL-1,组内及组间精密度的RSD分别为6.10%～9.81%,10.17%～11.93%。结论该方法简便、准确、特异性强,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中抗EGFR单克隆抗体的检测。

间接能量测定法对重症肺炎患者能量代谢状态的评估

目的间接能量测定法(IC)在危重症患者的能量代谢状态测量方面上有精确性优势。文中旨在应用IC监测重症肺炎机械通气患者在病程不同时期的代谢特点及自主呼吸试验过程中患者的能量代谢状态,从而揭示重症肺炎机械通气患者的能量消耗特点。方法选取2019年1月至2020年12月南京医科大学第四附属医院ICU就诊的重症肺炎需要机械通气患者,分为休克组(n=30)和非休克组(n=30),采用间接能量测定法评估两组患者的能量摄入与代谢状态、营养评定指标、炎症指标、血气分析指标、预后指标。结果非休克组的呼吸频率改变在机械通气前后差异有统计学意义(P<0.05),且机械通气治疗后非休克组与休克组的差异具有统计学差异(P<0.05)。机械通气治疗后非休克组的能量状态及前白蛋白水平显著优于休克组(P<0.05)。非休克组经机械通气治疗后仅在PaCO 2指标水平上显著低于休克组(P<0.05)。休克组患者经机械通气治疗后PCT的表达水平较治疗前显著降低(P<0.05),而非休克组患者经机械通气治疗后的CRP、PCT的表达水平显著下降,但仅有PCT的表达状态较休克组降低(P<0.05)。非休克组患者经机械通气治疗后在机械通气时间、ICU住院时间、撤离呼吸机时间、28 d死亡率(%)四个预后指标上显著优于休克组(P<0.05),特别是28 d死亡率,休克组有8例患者死亡脱组,而非休克组仅有3例患者死亡脱组。结论IC监测能够实时反映重症患者的能量代谢状态特点,提示机械通气治疗对于重症休克肺炎患者在改善静息能量消耗、血气及血清营养指标、机体免疫状态、炎症反应状态和预后上临床获益。

大熊猫源犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因进行表达,经纯化后的蛋白作为ELISA包被抗原;制备并纯化兔抗大熊猫IgG,采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记作为间接ELISA酶标二抗,通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件,并评估建立方法与商业试剂盒检测样品结果的符合率。【结果】原核表达成功获得约70 ku的VP2蛋白,将其作为间接ELISA包被抗原,抗原最佳包被质量浓度为2.0μg/mL,血清最佳稀释度为1∶400,用该方法进行检测血清样品时OD450≥0.258为阳性,反之为阴性。采用建立的ELISA方法检测大熊猫血清样本阳性率为60.0%,高于商业化检测试剂盒检测的阳性率(52.5%),两者总符合率达到87.5%。【结论】本研究首次建立了基于大熊猫源CPV VP2蛋白为抗原、自制HRP标记兔抗大熊猫IgG为酶标二抗的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏性较高、重复性好,为大熊猫血清中CPV抗体的检测提供了技术支持。

ELISA间接法测定AchRab对重症肌无力的诊断价值

一、临床资料 根据典型病史,腾喜龙试验及部分患者肌电图检查确诊的重症肌无力(MG)患者80例,其中眼肌型34型,全身型46例。男33例,女47例。发病年龄:1～66岁,≤20岁者25例,】20者55例。病程:14天～28年,≤1年者41例,】1年者39例。80例MG患者中作了胸腺CT或MRI检查者49例,其中胸腺正常25例,胸腺增生8例,胸腺瘤16例。病情程度参照Oosterhuis分级:全身型:重度5例,中度18例,轻度23例,眼肌型:重度3例,中度7例,轻度24例。

火焰原子吸收光谱法间接测定碘

在弱酸性介质中 ,I- 与Cu+生成沉淀 ,经硫代硫酸钠溶解后 ,以火焰原子吸收法测定铜 ,从而间接求得碘的含量。本方法的线性范围为 0～ 80 0 μg·mL- 1 ,回收率为 99 9%～ 1 0 0 3 %,相对标准偏差为 0 7%。将方法应用于碘盐、华素片、紫菜中碘的测定 ,结果满意。

间接竞争ELISA法检测牛乳中β-乳球蛋白含量的准确性评价

研究建立了以β-乳球蛋白标准品为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG:HRP为二抗、邻苯二胺为底物的间接竞争酶联免疫检测法(indirect competitive enzyme-linked immu nosorbent,ELISA)。同时以反相高效液相色谱法定量检测相同样品中β-乳球蛋白含量,采用t检验方法来评价间接竞争ELISA的方法定量检测β-乳球蛋白的准确性。t检验方法结果显示:在显著水平α=0.05下,该间接竞争ELISA法检测β-乳球蛋白的测量值较为准确。

间接ELISA法检测羊促乳素抗体方法的建立

【目的】建立促乳素单克隆抗体制备中筛选阳性分泌细胞的间接ELISA检测方法。【方法】用促乳素纯品与Freund佐剂免疫6--8周龄雌性BALB／c小鼠，初次免疫采用抗原与完全Freund佐剂，每2周免疫1次，从第2次开始采用抗原与不完全Freund佐剂，免疫4次后尾静脉采血，收集血清制备阳性对照抗体，以未免疫的BALB／c小鼠血清为阴性对照，筛选间接ELISA法检测促乳素抗体的最佳反应条件，并对单克隆抗体制备中的阳性细胞进行筛选。【结果】间接ELISA法的最佳反应条件：血清稀释倍数为1：200，抗原包被质量浓度为100ng／mL，封闭液为1％牛血清白蛋白，酶标抗体的工作浓度为1：10000，酶标抗体作用时间为37℃90min，底物作用时间37℃30min。用该方法检测融合的杂交瘤细胞，最终获得OD450为0．875和0．460的阳性细胞株。

硫化锌法原子吸收间接测定谷氨酸络合反应的机理研究

通过编程计算谷氨酸和锌离子的各种存在形式随pH值变化的拟合分布图,研究了在硫化锌法原子吸收间接测定谷氨酸时的pH对原子吸收响应的影响及络合反应的机理。指出在最佳条件pH9.0测定条件下,谷氨酸的pH响应峰是由于谷氨酸和锌离子的两种不同存在形态的变化所引起的。谷氨酸是以负一价离子状态与Zn(OH)_2形成了可溶性络合离子[OO—C—CH—(NH_3^+)—CH_2—CH_2—COO]Zn(OH)_2。理论计算与实验数据能很好地吻合,确定了硫化锌法原子吸收间接测定谷氨酸时的络合物反应机理及络合物的组成结构。

原子吸收硫化锌法间接测定精氨酸络合反应的机理研究

通过编程计算精氨酸和锌离子在不同pH条件下的各种存在形式,通过分析拟合分布图,研究了在硫化锌法原子吸收间接测定精氨酸时的pH对原子吸收响应的影响及络合反应的机理。经对不同形态的精氨酸与金属锌离子的共存区域的各种组合探讨,指出在pH9.0左右最佳测定条件下的pH响应峰是由于精氨酸和锌离子的两种不同存在形式的变化所引起的左右峰边缘,精氨酸是以正一价荷电形态的精氨酸基Arg++-与Zn(OH)2形成了可溶性络合离子[HNCH(NH+3)NH(CH2)3CH(NH+3)COO]2Zn(OH)2。结果表明,理论分析计算的结果与实验数据得到了基本吻合,确定了硫化锌法原子吸收间接测定精氨酸时的络合物反应机理及络合物的组成结构。

硫化锌法原子吸收间接测定谷氨酸锌络合物稳定常数

在利用硫化锌法火焰原子吸收间接测定谷氨酸或谷氨酸钠,并对测定机理、络合物组成探讨的基础上,进一步对在最佳测定酸度条件下,所形成的络合物谷氨酸锌的稳定常数,进行了测定和求解获得了成功,在pH 9 0时的碱式谷氨酸锌的稳定常数在3 3×10 2 0 ～1 4×10 2 1 ,平均值为β稳=1 0 3×10 2 1 ,其logβ稳=2 1 0 13。谷氨酸锌的稳定常数在3 3×10 1 0 ～1 4×10 1 1 ,平均值为β稳=1 0 3×10 1 1 ,其logβ稳=11 0 13。

间接原子吸收法测定葡萄籽提取物中的原花青素

提出了间接测定葡萄籽提取物中原花青素的原子吸收光谱法.它是基于原花青素能与醋酸铜发生络合反应,生成难溶于水的棕黄色沉淀,经离心分离后,用原子吸收法测定上清液中过量的铜离子,可间接测定原花青素的含量.方法线性范围为3.0～30.0 mg/L;RSD为1.1%～1.2 %;回收率为98.9%～102.0%.

间接原子吸收法测定头孢菌素的方法研究

报道了头孢菌素类药物的间接原子吸收分析方法 :在碱性介质中加热 ,使头孢菌素类发生水解 ,其水解产物与酒石酸铜定量反应生成沉淀 ,利用原子吸收法测定沉淀中铜的量来间接确定头孢唑啉、头孢氨苄、头孢拉定的量 ;头孢氨苄和头孢拉定的线性范围为 3 6 .5～ 1 83 μg/m L,3 5～ 1 75μg/m L,头孢唑啉为 1 9～ 95 μg/m L,RSD<2 %,回收率为 99%～ 1 0 2 %。本法快速、灵敏、准确 ,已成功地用于药物中头孢菌素类的测定。