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抗HCV ELISA-2能可靠检出HIV/HCV合并感染患者体内HCV
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《传染病网络动态》 2001年第7期19-19,共1页
关键词 抗HCV elisa-2 HIV HCV 合并症 病毒感染 免疫抑制
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猪圆环病毒2型感染性克隆的构建及拯救病毒的双抗体夹心ELISA鉴定
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作者 贺紫琴 宁李纳 +6 位作者 范杰 凌同 刘甜甜 李欣 陈志雄 黎满香 葛猛 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期95-101,共7页
旨在构建猪圆环病毒2型(PCV2)感染性克隆,并利用双抗体夹心ELISA对拯救病毒进行鉴定。通过PCR从阳性病料中扩增出PCV2两种基因型2b与2d的全基因组DNA,并分别克隆入pMD-19T载体,获得2个重组质粒,命名为p19T-PCV2b与p19T-PCV2d。利用Sac... 旨在构建猪圆环病毒2型(PCV2)感染性克隆,并利用双抗体夹心ELISA对拯救病毒进行鉴定。通过PCR从阳性病料中扩增出PCV2两种基因型2b与2d的全基因组DNA,并分别克隆入pMD-19T载体,获得2个重组质粒,命名为p19T-PCV2b与p19T-PCV2d。利用SacⅡ酶切获得l 767 bp的PCV2全基因组,并在体外分别用T4连接酶连接而环化,将环状基因组转染至PK-15细胞,传至P6代,利用间接免疫荧光试验(IFA)对拯救病毒进行鉴定,结果表明PCV2b与PCV2d感染性克隆可拯救出病毒。利用PCV2单克隆抗体(单抗)作为捕获抗体,用辣根过氧化酶(HRP)标记的PCV2多抗作为检测抗体,建立检测PCV2病毒粒子的双抗体夹心ELISA方法,用于PCV2拯救病毒的鉴定。将该检测方法与IFA和半数组织细胞感染量(TCID_(50))结果进行对比分析,结果显示,ELISA检测值与Image-J所计算的IFA荧光强度及TCID_(50)的相关系数分别达到0.7和0.8以上,说明该方法与IFA及TCID_(50)检测结果均具有较强的一致性,可以用于PCV2拯救病毒的快速鉴定。 展开更多
关键词 PCV2 感染性克隆 ELISA
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2022-2023年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体检测及分析
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作者 陆宣杰 周齐 +3 位作者 刘士哲 陈少鹏 李彦芳 屈勇刚 《现代畜牧兽医》 2024年第7期54-57,共4页
研究旨在了解2022—2023年新疆部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平,以期为该病的科学防控提供参考。试验采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自3个地区11个猪场的296份血清样品进行PCV2抗体检测。结果显示,PCV2抗体平均阳性率为85.... 研究旨在了解2022—2023年新疆部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平,以期为该病的科学防控提供参考。试验采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自3个地区11个猪场的296份血清样品进行PCV2抗体检测。结果显示,PCV2抗体平均阳性率为85.47%(253/296),高于国家规定标准(70%);在调查的11个规模化猪场中,除A场和C场的PCV2抗体水平未达到国家规定标准外,81.82%(9/11)的猪场PCV2抗体水平均达到群体免疫的抗体水平和免疫标准。研究表明,新疆地区猪场PCV2的整体免疫效果较好,但部分猪场的PCV2抗体水平较低,需要对现有免疫程序进行调整和完善,确保各猪群健康。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 ELISA 抗体检测 新疆地区
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INF-γ and IL-2 Profile as Therapeutic Markers in Tuberculosis Patients at the Jamot Hospital of Yaounde-Cameroon
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作者 Alexandra Emmanuelle Membangbi Jacky Njiki-Bikoï +13 位作者 Esther Del-Florence Moni Ndedi Donatien Serge Mbaga Elsa Nguiffo Makue André Chris Mikangue Mbongue Koko-Ta Ladiff Sharonne Martha Mesembe Justin Olivier Essindi Aïcha Ngoutane Arnaud Franck Elang Sabine Aimée Touangnou-Chamda George Ikomey Mondinde Eric Walter Perfura-Yone Marie Joseph Nkodo Mindimi Sara Honorine Riwom Essama 《Journal of Tuberculosis Research》 2024年第2期119-128,共10页
Background: Tuberculosis (TB) is one of the top lethal infectious diseases worldwide. In recent years, interferon-γ (INF-γ) release assays (IGRAs) have been established as routine tests for diagnosing TB infection. ... Background: Tuberculosis (TB) is one of the top lethal infectious diseases worldwide. In recent years, interferon-γ (INF-γ) release assays (IGRAs) have been established as routine tests for diagnosing TB infection. However, produced INF-γ assessment cannot permit to distinguish active ATB from latent TB infection (LTBI), especially in TB epidemic areas. In addition to IFN-γ, interleukin-2 (IL-2), secreted by activated T cells, is involved in immune response against Mycobacterium tuberculosis. This could be involved in the follow up of treatment response. The aim of our study was to determine IFN-γ and IL2 cytokines profiles of patients under antituberculosis treatment. Materials and Methods: A six months’ cross-sectional study was conducted at the Jamot Hospital of Yaoundé, from May to August 2021. Sociodemographic and clinical data as well as 5 mL of blood were collected from each participant. INF-γ and IL-2 were determined using indirect Enzyme linked Immuno-Sorbent Assay (ELISA) according to the manufacturer’s recommendations and spectrum exam in combination with radiography and GeneXpert were used as standard. P-values Results: The results showed that men were more infected 14/61 (31.8%) with a high presence in active and resistant TB groups. The mean age was 41.3 ± 13.1 years with a 95% CI = [38.2 - 44.7], the age group with the highest infection rate was ranged between 31 and 40 years. The IL-2 and INF-γ means were respectively 327.6 ± 160.6 pg/mL and 26.6 ± 13.0 pg/mL in ATB patients, 251.1 ± 30.9 pg/mL and 21.4 ± 9.2 pg/mL in patients with resistant tuberculosis, while it was 149.3 ± 93.3 pg/mL and 17.9 ± 9.4 pg/mL in cured patients, 15.1 ± 8.4 pg/mL and 5.3 ± 2.6 pg/mL in participants presumed healthy (p γ and IL-2rates were observed between the different groups. Conclusion: Monitoring the serum levels of INF-γ and IL-2 would be useful for the follow-up of anti-tuberculosis patients, particularly in the both cytokines association case. 展开更多
关键词 TUBERCULOSIS Antituberculosis Treatment INF-Γ IL-2 ELISA
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狐源兔脑炎微孢子虫极管蛋白2(PTP2)的原核表达及间接ELISA方法的建立
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作者 高妍 贺飞 +1 位作者 王好 刘丽凡 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期108-114,共7页
为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质... 为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒pET32a-PTP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,将菌体超声后对表达的重组蛋白进行可溶性分析,并纯化目的蛋白;然后以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件和临界值的确定建立蓝狐兔脑炎微孢子虫的间接ELISA方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验;最后采用建立的间接ELISA方法对28份经常规PCR方法验证已经感染兔脑炎微孢子虫病的蓝狐血清样品进行检测,并计算符合率。结果表明:表达的重组蛋白的分子质量为45.8 ku,且表达产物以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,经纯化杂带明显减少,纯化后的重组蛋白质量浓度为1.55 mg/mL。间接ELISA方法的最佳包被抗原质量浓度为8μg/ml,最佳一抗稀释度为1∶100,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳封闭条件为37℃、1 h,最佳一抗孵育时间为120 min,最佳二抗稀释度为1∶5 000,最佳二抗孵育时间为60 min,最佳显色时间为20 min。阴、阳性血清OD_(450)临界值分别为0.268和0.302。建立的间接ELISA方法检测蓝狐犬瘟热病毒、蓝狐伪狂犬病毒、蓝狐细小病毒阳性血清均为阴性,可检测到稀释度为1∶3 200的蓝狐兔脑炎微孢子虫阳性血清,批内重复与批间重复变异系数均小于10%。用建立的间接ELISA方法检测28份蓝狐血清样品的阳性样品数为23份,与常规PCR方法的符合率为82.14%。说明试验成功建立了一种可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,该方法特异性好、敏感性高、重复性好,适合在基层推广。 展开更多
关键词 兔脑炎微孢子虫病 微孢子虫极管蛋白2(PTP2) 原核表达 间接ELISA 检测方法的建立
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Seroprevalence of SARS-COV-2 Exposure among “High-Risk” Populations (Healthcare Workers, People Who Attend Markets, and School Children) in Zanzibar
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作者 Ame Masemo Solomon Mwakasungula +11 位作者 Khamis Kheir Erick Mgina Nahya Khamis Irabi Kassim Bihila Bakar Khamis Salim Sarah Mswata Kibwana Omar Theckla Kazimoto Linzy Elton Honorati Masanja Mayassa Ally 《Advances in Infectious Diseases》 CAS 2024年第1期34-55,共22页
In Zanzibar, from the start of the pandemic in March 2020 to the time of sampling in December 2020, SARS-CoV-2 seroprevalence data was limited. We conducted a seroprevalence study to evaluate the magnitude of SARS-CoV... In Zanzibar, from the start of the pandemic in March 2020 to the time of sampling in December 2020, SARS-CoV-2 seroprevalence data was limited. We conducted a seroprevalence study to evaluate the magnitude of SARS-CoV-2 exposure among healthcare workers, school children, and people who attended general markets in Zanzibar. The objectives of the study were to analyse the total antibodies from selected higher-risk population groups in order to determine magnitude in SARS CoV-2 exposure. Blood samples were collected from eligible and consented participants (adults and children), and their serum was analyzed for total antibodies against SARS-CoV-2 using ELISA. A questionnaire was used to collect participants’ demographic and clinical data. The overall SARS-CoV-2 seroprevalence across all age groups was 33%, and a higher seroprevalence was observed in the 40 - 49 years’ age group relative to other ages as well as in those who attended markets. A runny nose (18.8% of participants) was the most frequently reported SARS-CoV-2 infection-related symptom. Multivariable analysis showed significantly higher odds of infection in people living in urban districts. The findings provide insight into SARS-CoV-2 infection among school children, health workers, and people who attended markets in Zanzibar in the early stages of the pandemic. Exposure in these groups might have been influenced by infection and prevention strategies taken by the government, as well as shopping behavior, school overcrowding, and population density in urban settings. The study had methodological limitations, including cross-sectional design. Further, well-designed, longitudinal studies are recommended to understand exposure and transmission at a population level. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 SEROPREVALENCE ZANZIBAR ELISA COVID-19
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猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立
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作者 严杰聪 王帅勇 +11 位作者 王曼茱 王娟 荣新利 邢燕茹 虞凌雪 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期79-84,共6页
Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同... Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经测序鉴定成功获得重组质粒pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达,通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达,同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合,通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法,进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 CAP蛋白 同源重组 表达纯化 ELISA
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猪胚胎移植技术在预防猪圆环病毒2型感染中的应用
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作者 黄群 《黑龙江动物繁殖》 2024年第2期39-42,共4页
试验旨在研究猪胚胎移植技术在预防猪圆环病毒2型感染中的应用,为猪群的健康养殖提供参考。选取健康猪卵巢,挑选细胞质均匀的卵丘-卵母细胞复合体,培养并获取成熟卵母细胞。选择体重大于30 kg、处于正常发情期的成熟健康母猪,将成熟卵... 试验旨在研究猪胚胎移植技术在预防猪圆环病毒2型感染中的应用,为猪群的健康养殖提供参考。选取健康猪卵巢,挑选细胞质均匀的卵丘-卵母细胞复合体,培养并获取成熟卵母细胞。选择体重大于30 kg、处于正常发情期的成熟健康母猪,将成熟卵母细胞移植入母猪体内,并回收其早期胚胎。利用猪圆环病毒2型ELISA抗原检测试剂盒判别健康猪胚胎的防疫效果。结果表明:健康猪胚胎至少能够防疫浓缩3~4倍浓度的猪圆环病毒2型,防疫效果较好。说明猪胚胎移植技术能够在胚胎水平上建立健康种群,有效预防猪圆环病毒2型感染仔猪。 展开更多
关键词 猪胚胎移植技术 猪圆环病毒2 感染 防疫 ELISA抗原检测
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单克隆与多克隆双抗体夹心法测定血清可溶性IL-2受体 被引量:273
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作者 富宁 王莉 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第5期278-281,共4页
建立了灵敏的酶标双抗体夹心法测定血清可溶性IL-2受体(sIL-2R)。主要步骤为以单抗包被,加入待检抗原,再加多克隆兔抗IL-2 R血清作用,最后加酶标羊抗兔示踪并放大其反应。本法简便、重复性好、灵敏度达100u/ml.可适用于临床与基础研究。
关键词 双抗体夹心 ELISA IL-2 受体
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2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平与胰岛素抵抗的相关性 被引量:28
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作者 汪学军 姜志胜 黄佳克 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期535-538,共4页
目的研究2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平和胰岛素抵抗之间的相关性,探讨脂联素在2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗中的作用。方法选择30例2型糖尿病合并肥胖患者、25例2型糖尿病患者及25例非糖尿病对照人员(其中13例为肥胖者),检... 目的研究2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平和胰岛素抵抗之间的相关性,探讨脂联素在2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗中的作用。方法选择30例2型糖尿病合并肥胖患者、25例2型糖尿病患者及25例非糖尿病对照人员(其中13例为肥胖者),检测体质指数、腰/臀比值、空腹血糖、糖化血红蛋白、血清空腹胰岛素、血脂、脂联素水平,计算胰岛素抵抗指数和胰岛素敏感指数。分析血清脂联素与胰岛素抵抗的相关性。结果⑴糖尿病肥胖组的检测体质指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素、腰/臀比值均高于对照肥胖组,脂联素、胰岛素敏感指数低于对照肥胖组(P<0.05)。⑵糖尿病非肥胖组甘油三酯、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素均高于对照非肥胖组,胰岛素敏感指数、脂联素低于对照非肥胖组(P<0.05)。(3)糖尿病肥胖组甘油三酯、胆固醇、体质指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素、腰/臀比值均高于糖尿病非肥胖组,胰岛素敏感指数、脂联素低于糖尿病非肥胖组(P<0.05)。结论脂联素与2型糖尿病肥胖患者的胰岛素抵抗发生有关,脂联素降低易导致胰岛素抵抗,脂联素水平可作为2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗的监测标准。 展开更多
关键词 血清脂联素的测定 酶联免疫吸附法 2型糖尿病 脂联素 胰岛素抵抗
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大骨节病病区病户主食中T-2毒素检出报告 被引量:52
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作者 杨建伯 孙殿军 王志武 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 1995年第3期146-149,共4页
用ELISA法检查大骨节病病区病户面粉15份,其中10份T-2毒素为阳性,全距为2.0~1549.4ng/g,均数468.7ng/g;病区村、镇市售面粉8份,其中7份阳性.全距为2.5~885.3ug/g,均数244... 用ELISA法检查大骨节病病区病户面粉15份,其中10份T-2毒素为阳性,全距为2.0~1549.4ng/g,均数468.7ng/g;病区村、镇市售面粉8份,其中7份阳性.全距为2.5~885.3ug/g,均数244.0ng/g;基本控制病区样品4份,阳性1份,含量35.6ng/g。;非病区面粉15份,阳性10份,全距2.0~248.7ug/g,均数84.2ng/g.在前述各地采集的大米、小米、黄米等粒状食粮均没有或仅有痕迹量的T-2毒素检出。对T-2毒素致大骨节病的病因学意义作了扼要讨论。 展开更多
关键词 大骨节病 面粉 T2毒素 地方病
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间接竞争ELISA法检测谷物中T-2毒素 被引量:3
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作者 唐世云 武玉香 +2 位作者 曲光刚 付石军 沈志强 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期118-121,共4页
T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表,在单端孢霉烯族毒素中毒性最强,是主要的食品污染源之一,用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA)对谷物中的T-2毒素进行了测定。从样品的处理、T-2毒素的添加回收及ELISA的实验检测等方面进行试验... T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表,在单端孢霉烯族毒素中毒性最强,是主要的食品污染源之一,用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA)对谷物中的T-2毒素进行了测定。从样品的处理、T-2毒素的添加回收及ELISA的实验检测等方面进行试验,最终结果用分析软件分析相关数据得到相关系数为0.998,IC5。为1.3μg/kg,标准品浓度为0-16.2μg/kg,灵敏度为0.2μg/kg,添加回收率均大于90%。该法测定T-2毒素方法简便,特异性高,灵敏度高,重复性好,适合用于检测谷物中的T-2毒素。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫分析 T-2毒素 谷物
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猪圆环病毒2型感染血清学调查 被引量:7
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作者 高利波 高洪 +2 位作者 赵汝 严玉霖 杨培昌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期207-209,共3页
为掌握云南省猪圆环病毒2型的感染状况,2006—2010年间从云南省部分规模化猪场采集未经PCV2疫苗免疫猪的血样共2974份,采用ELISA方法进行抗体阳性率检测。结果表明,检测的5年间PCV2抗体总阳性率为42.04%,且基本上呈逐年上升趋势。与商... 为掌握云南省猪圆环病毒2型的感染状况,2006—2010年间从云南省部分规模化猪场采集未经PCV2疫苗免疫猪的血样共2974份,采用ELISA方法进行抗体阳性率检测。结果表明,检测的5年间PCV2抗体总阳性率为42.04%,且基本上呈逐年上升趋势。与商品猪相比,种猪的PCV2抗体阳性率相对最高,证实在云南规模化猪群中存在较为严重的PCV2感染和流行。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 血清学 ELISA
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大鼠胃溃疡自愈期间三叶因子2的变化 被引量:7
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作者 张静 吴靖芳 +3 位作者 任君旭 王志勇 王浩宇 张耕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期1358-1361,共4页
目的研究大鼠实验性胃溃疡自愈期间三叶因子2(trefoil factor family 2,TFF2)在血清、胃液和胃黏膜组织中的变化及意义。方法 SD大鼠按随机数字表法分为溃疡组(n=42)、盐水组(n=42)、正常组(n=6),胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡... 目的研究大鼠实验性胃溃疡自愈期间三叶因子2(trefoil factor family 2,TFF2)在血清、胃液和胃黏膜组织中的变化及意义。方法 SD大鼠按随机数字表法分为溃疡组(n=42)、盐水组(n=42)、正常组(n=6),胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法检测各组大鼠胃黏膜组织TFF2的表达变化;ELISA法检测各实验组大鼠血清及胃液TFF2变化趋势。结果胃黏膜、血液及胃液检测结果显示在溃疡术后早期(1、2、4、6 d)TFF2增多较为明显。胃黏膜TFF2原位表达以溃疡术后6 d阳性细胞最多(24.50±5.68)(P<0.01),表达强度较强,可见以壁细胞、颈黏液细胞为主的阳性表达;血清TFF2以溃疡2 d含量最高(338.62±58.72)pmol/L(P<0.01);胃液TFF2含量以溃疡术后1 d最高(5 021.65±291.69)pmol/L。胃黏膜、血液、胃液TFF2表达量自溃疡术后10 d有所下降,但均高于相应盐水组及正常组(P<0.05,P<0.01)。结论 在胃溃疡自愈早期,TFF2在胃黏膜、血液和胃液表达水平均较高,其通过不同的表达途径参与了胃溃疡修复过程。 展开更多
关键词 胃溃疡 三叶因子2 免疫组织化学 酶联免疫吸附实验 大鼠
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腺激肽释放酶2酶联免疫定量分析法的建立及其方法学研究 被引量:2
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作者 谢克俭 姜爱英 +2 位作者 蔡强军 陈映鹤 谢辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期416-418,共3页
目的:建立高灵敏度和特异性的腺激肽释放酶2(hk2)酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法:以hk2单克隆抗体(hk2mAb)为包被抗体,hk2多克隆抗体(hk2pAb)和辣根过氧化酶(HRP)标记抗IgG为检测抗体,建立检测hk2双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、精密... 目的:建立高灵敏度和特异性的腺激肽释放酶2(hk2)酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法:以hk2单克隆抗体(hk2mAb)为包被抗体,hk2多克隆抗体(hk2pAb)和辣根过氧化酶(HRP)标记抗IgG为检测抗体,建立检测hk2双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、精密度、准确度和稳定性等方法学进行评价。结果:hk2mAb、hk2pAb和HRP标记IgG的最佳稀释工作浓度分别为1∶100、1∶2 000和1∶8 000。该法线性范围为50~800 ng/L、线性良好(R2=0.99)、灵敏度为28 ng/L、批内和批间CV分别为5.78%和7.56%、平均回收率为99.4%。结论:双抗体夹心ELISA法检测人血清hk2,其敏感性高、特异性强、准确度好,可满足人血清和组织细胞培养液中hk2水平的检测。 展开更多
关键词 腺激肽释放酶2 酶联免疫分析 定量测定 方法学
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应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法 被引量:18
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作者 琚春梅 陈焕春 +2 位作者 刘正飞 曹胜波 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期689-693,共5页
根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定。重组质粒经... 根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定。重组质粒经Bal 和Sal 双酶切,回收ORF2基因,将其插入pGEX-KG的Sma 和Sal 位点间,构建原核表达质粒pGEXORF2,阳性重组质粒转化E.coliBL21(DE3),进行原核表达。用此表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床676份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为62.7%(424/676),仔猪阳性率为38.9%(74/190),肥猪阳性率为63.2%(84/133),母猪阳性率为74.6%(249/334),公猪阳性率为89.5%(17/19)。 展开更多
关键词 阳性率 重组质粒 诊断方法 ELISA 表达 蛋白 基因 ORF2 圆环病毒 PCV2
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乳腺癌患者血清与肿瘤组织中Her-2/neu表达的相关性研究 被引量:4
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作者 袁芃 徐兵河 齐军 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2004年第5期449-451,共3页
目的 :建立一种检测血清Her 2 /neu的快速、简单的方法 ,并从临床的角度探讨了血清Her 2 /neu与组织Her 2 /neu表达及其他因素的相关性。方法 :收集初治乳腺癌 5 3例 ,采用ELISA方法检测血清Her 2 /neu水平 ,并采用免疫组化方法对术后... 目的 :建立一种检测血清Her 2 /neu的快速、简单的方法 ,并从临床的角度探讨了血清Her 2 /neu与组织Her 2 /neu表达及其他因素的相关性。方法 :收集初治乳腺癌 5 3例 ,采用ELISA方法检测血清Her 2 /neu水平 ,并采用免疫组化方法对术后标本进行组织Her 2 /neu表达的检测 ;同时设立了 10例正常人、31例乳腺良性病变为对照。结果 :早期乳腺癌中 ,10 / 5 3(19% )血清Her 2 /neu水平高于正常 ,组织Her 2 /neu表达阳性者中 32 %血清Her 2 /neu阳性 ,而组织表达阴性者中仅7%血清阳性 ,二者有相关性 (P <0 0 5 )。血清Her 2 /neu水平与肿瘤大小有相关性 (P <0 5 ) ,与淋巴结、受体状况无关。结论 :血清Her 2 /neu与组织Her 2 /neu有一致性 ,前者可作为后者的补充。 展开更多
关键词 HER-2/NEU 血清 表达 乳腺癌 阳性 患者 相关性研究 肿瘤组织 免疫组化方法 初治
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猪圆环病毒2型间接ELISA方法的建立 被引量:2
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作者 车勇良 庄向生 +5 位作者 石运通 王隆柏 魏宏 陈如敬 吴学敏 周伦江 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第7期290-294,共5页
为了猪圆环病毒2型(PCV2)抗体,该研究建立了快速、敏感的ELISA诊断方法。研究应用原核表达的PCV2-Cap蛋白作为包被抗原,通过抗原最适包被浓度和兔抗猪IgG最佳稀释浓度的确定,待检血清稀释度的选择,阴阳性临界值的确定,然后进行特异性测... 为了猪圆环病毒2型(PCV2)抗体,该研究建立了快速、敏感的ELISA诊断方法。研究应用原核表达的PCV2-Cap蛋白作为包被抗原,通过抗原最适包被浓度和兔抗猪IgG最佳稀释浓度的确定,待检血清稀释度的选择,阴阳性临界值的确定,然后进行特异性测定、重复性测定和符合率比较等,建立检测PCV2抗体的间接ELISA方法。结果显示,建立的间接ELISA方法只能检测出PCV2阳性血清;3次重复性试验的差异不显著;与韩国JBT公司的PCV2试剂盒的符合率达到了92.5%;对采集福建省内多个猪场204份血清样品进行检测,其阳性率达到了76.5%。实验表明,建立的检测PCV2抗体的间接ELISA方法具有特异性强、重复性和稳定性好的特点,可用于PCV2抗体的血清学诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 酶联免疫吸附实验 抗体 CAP蛋白
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胶质瘤患者血浆及肿瘤组织IGFBP-2表达及临床意义 被引量:3
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作者 徐丽 崔云 +1 位作者 江涛 李桂林 《首都医科大学学报》 CAS 2008年第2期201-204,共4页
目的探讨胶质瘤患者血浆及肿瘤组织IGFBP-2表达及临床意义。方法应用ELISA法检测92例胶质瘤患者(38例Ⅱ级、24例Ⅲ级和30例Ⅳ级)及18例健康者(对照组)血浆IGFBP-2表达情况;应用单克隆抗体和免疫组化技术,检测上述受试者组织IGFBP-2表达... 目的探讨胶质瘤患者血浆及肿瘤组织IGFBP-2表达及临床意义。方法应用ELISA法检测92例胶质瘤患者(38例Ⅱ级、24例Ⅲ级和30例Ⅳ级)及18例健康者(对照组)血浆IGFBP-2表达情况;应用单克隆抗体和免疫组化技术,检测上述受试者组织IGFBP-2表达情况。结果血浆IGFBP-2表达Ⅲ级明显高于Ⅱ级(P<0.001)和正常人(P<0.001),Ⅳ级明显高于Ⅱ级(P<0.001)和正常人(P=0.001),Ⅲ级与Ⅳ级(P=0.562)、Ⅱ级与正常人(P=0.821)之间差异无统计学意义。肿瘤组织中IGFBP-2表达Ⅳ级明显高于Ⅲ级(P=0.006)和Ⅱ级(P<0.001),Ⅲ级明显高于Ⅱ级(P=0.022)。肿瘤组织IGFBP-2阳性表达的患者血浆IGFBP-2水平明显高于组织IGFBP-2阴性表达的患者(P=0.017)和正常人(P=0.003),而后两者血浆IGFBP-2水平差异无统计学意义(P=0.262)。结论胶质瘤患者血浆和肿瘤组织IGFBP-2表达可作为胶质瘤患者预后判断的标志物。 展开更多
关键词 胶质瘤 IGFBP-2 免疫组化 ELISA
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猪链球菌2型烯醇化酶的分子克隆与免疫学特性 被引量:5
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作者 孙雯 潘秀珍 +2 位作者 王长军 郑峰 唐家琪 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期15-19,共5页
对新近测定的猪链球菌2型(S.Suis 2)05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,设计合成引物,PCR法扩增出约1.3 kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32... 对新近测定的猪链球菌2型(S.Suis 2)05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,设计合成引物,PCR法扩增出约1.3 kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32a。将重组表达质粒pET32a::eno转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE初步检测到分子量约为75kD的蛋白带。通过His-Tag亲和层析纯化,获得融合蛋白His-ENO。Western-blot表明该表达产物具有免疫原性。基于ELISA进行的细胞定位实验证实了Enolase可以部分存在S.suis 2 05ZYH33细菌的表面。这提示了Enolase作为一种新发现的抗原对于引发猪链球菌相关疾病可能发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 猪链球菌2 烯醇化酶 ELISA
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