伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立

依据伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirusPRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET 28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质粒pET 28a gG1,结果并未获得表达。再用NotⅠ切除gG基因后小半部分片段,构建成原核表达质粒pET 28a gG2,使其在E.coliBL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS PAGE分析,表达特异带为47KDa,斑点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液的上清之中,上清经饱和硫酸铵溶液沉淀,透析,PEG20000浓缩,ELISA分析表明,经初步纯化的表达产物可与抗PRV猪血清发生特异性免疫反应。用该产物致敏空白乳胶建立gG 乳胶凝集试验(gG LAT),检测340份血清,结果表明gG LAT能区分gG基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪,且特异性强、敏感性高。

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第14d)和IHA(第20d);检出持续时间方面,LAT(54d)长于ELISA(44d)和IHA(19d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8)。试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测。

ELISA和LAT检测猪血清弓形虫抗体的比较

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。

抗供体移植物特异性抗体与肾移植排斥的相关性研究

为探讨抗供体特异性抗体与同种异体肾移植间移植物排斥的关系 ,用HLA位点氨基酸残基配对检测法 (ELISA -LAT -M和ELISA -LAT -ID) ,对 166例血清分为AR ,CR和正常对照共 3组进行筛选测定 .按LAT酶联检测试剂盒要求操作 ,抗体特异性的确定根据阳性结果的反应格局综合判断 ,结果显示抗HLAⅡ类IgG抗体阳性率分别为AR 38% ,CR 37% ,正常 2 3% (P <0 0 1) .提示HLAⅡ类抗体与急、慢性排斥反应有明显相关性 .进一步抗体定位并与其错配位点比较 ,抗移植物特异性HLAⅡ类IgG抗体阳性率AR 34 % ( 9例移植物丢失 ) ,CR 64% ( 1例移植物丢失 ) .提示抗移植物特异性HLAⅡ类IgG抗体是影响移植物存活和排斥反应的重要因素 。

用Sephadex G200层析血清对4种弓形虫病免疫诊断方法的评价

弓形虫感染小鼠血清经Sephadex G 200柱层析后,各层析峰(紫外线OD_(280)吸收峰)用染色试验(DT)、乳胶凝集试验(LAT)、间接荧光抗体试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测总抗体、IgM和IgG抗体。结果显示,两类抗体分别存在于第Ⅰ峰和第Ⅱ峰,第Ⅲ峰无抗体活性。ELISA和IFA用于弓形虫病早期诊断(检测IgM)具有高度特异性和敏感性;LAT操作简便、经济快速、但敏感性稍差。IFA可取代DT用于常规个例诊断。