常值区间估计在ELLSA检测中的应用

在对样本的ELLSA检测中，最理想的结果应该是真阴性和真阳性，但在实验操作中，操作人员往往对一些肉眼观察有较明显显色，而酶标仪打印结果为阴性的低值灰区样品结果的判断，较好地解决这一问题，取得了良好的效果，现简介如下。

猪流感抗体间接ELlSA检测方法的建立

猪流感病毒A/Swine/Fujian/668/2001(H3N2)株感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯、纯化的猪流感病毒经NP-40处理并反复冻融,作为猪流感间接ELISA抗原,确立了间接ELISA检测方法。

2013～2016年广西猪伪狂犬病流行病学调查分析

【目的】全面了解广西猪伪狂犬病毒(PRV)的流行特点,为相关部门制定科学的猪伪狂犬病防控措施提供决策参考。【方法】于2013年6月~2016年8月从广西12个地市不同规模猪场采集疑似猪伪狂犬病阳性组织样品473份和血清样品5041份,通过PCR和ELISA分别对组织样品和血清样品进行PRV病原和野毒抗体检测。【结果】广西地区规模猪场的组织样品和血清样品PRV阳性率分别为26.43%和24.50%,且组织样品PRV病原阳性率与血清样品野毒抗体阳性率基本一致,以2015年的PRV阳性率最低、2016年的PRV阳性率最高。在广西地区一年四季均能检测到PRV,且组织样品的PRV病原阳性率和血清样品的野毒抗体阳性率均以第三季度(秋季)最低,分别为19.80%和14.95%。除了梧州市和防城港市的检测样品未检出PRV外,其他10个地市的检测样品均能检出PRV,说明广西规模猪场普遍存在PRV感染,且以南宁、玉林、北海和桂林等地市较严重。【结论】广西规模猪场普遍存在PRV感染,尤其是2016年PRV阳性率明显上升。因此,要求养猪业发达的地市应加大对PRV的防控力度,实时监控PRV的流行趋势,避免混合感染,并做好净化工作。

黄芩甙对HBsAg和HBeAg的体外抑制作用

目的:观察黄芩甙(Baicalin,Bai)对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响,探讨黄芩甙的体外抗HBV作用。方法:通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察黄芩甙对2.2.15细胞的影响,采用ELISA法检测分析黄芩甙对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用。结果:黄芩甙在2.2.15细胞上半数毒性浓度大于15mg/ml,在该浓度下对HBsAg、HBeAg的抑制率分别达100％、88％以上,在黄芩甙浓度为0.94～15mg/ml时,对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制率高于70％,治疗指数分别为65.22和21.74。结论:黄芩甙有显著的体外抑制HBV作用,属低毒有效药物,具有潜在的抗HBV开发前景。

口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及检测应用

用纯化的口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus,FMDV)免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,经筛选获得多株能稳定分泌抗FMDV单抗的杂交瘤细胞株。选择其中一株(2G12)用于下列实验,其细胞培养上清液的效价是1:256,腹水效价是1:1280;以自行制备的兔抗FMDV高免血清IgG为捕获抗体包被酶联免疫吸附试验微量反应板,以单抗2G12为第二抗体,建立了快速检测FMDV抗原的双抗体夹心ELISA,该方法能检出90ng病毒,而且只与FMDV发生特异性反应,与猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和乙脑病毒(JEV)均不发生反应。本研究为检测口蹄疫病毒抗原提供了灵敏和特异的方法。

环境内分泌干扰物对河川沙塘鳢的雌激素效应检测

阐述了从河川沙塘鳢(Odontobutis potam ophila)卵巢中提取卵黄磷脂蛋白,以及制备兔抗卵黄磷脂蛋白抗血清的过程,介绍了用此血清建立的河川沙塘鳢血清卵黄蛋白原间接竞争ELISA检测方法。以卵黄磷脂蛋白为参照,此法的最低检测质量浓度为40μg/L,最佳工作范围为160μg/L^1 280μg/L。使用此法检测雌二醇(E2)、壬基酚(NP)对雄性河川沙塘鳢的卵黄蛋白原诱导效果时,前者的最低有效质量浓度是0.001 mg/kg(E2/鱼质量),后者的最低有效质量浓度是50 mg/kg(NP/鱼质量)。结果表明,200 mg/kg(NP/鱼质量)NP可引起雄性河川沙塘鳢血清卵黄蛋白原显著倍增。在太湖东山水域进行为期1年的生态调查时,发现3、4月份期间,曾有50%和35%样品呈阳性。

大鼠眼玻璃体内注射神经生长因子的药代动力学研究

目的 研究大鼠眼玻璃体内注射神经生长因子 (NGF)后的药代动力学特性。方法 SD大鼠 40只 ,随机分为 10组 ,每组 4只 8眼 ,任选一组SD大鼠作为正常对照组不注射NGF ,测正常玻璃体内的NGF质量浓度 ;其余各组SD大鼠均玻璃体内注射NGF 2 0 μg ,分别于注药后 5、15、3 0min ,1、2、4、8、12和 2 4h各处死一组大鼠 ,取出玻璃体样本 ,用间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)测出玻璃体内NGF质量浓度。结果 正常大鼠玻璃体内NGF质量浓度为 3 69μg/L±3 75 μg/L。玻璃体内注射NGF后 ,在玻璃体内的消除半衰期 (t1/ 2 )为 0 93h( 5 5 8min) ,药 -时曲线下面积 (AUC0～t)为5 11 49μg/(L·h) 。

生物技术在食品检测方面的应用

综述了DNA探针、PCR、生物芯片、胶体金免疫层析及ELLSA等生物技术的基本原理及其在食品检测方面的应用。

禽流感病毒RT-PCR ELISA诊断方法的建立

针对A型禽流感(AI)保守的M基因设计引物,并分别用地高辛和生物素标记,建立检测A型AIV的RT-PCRELISA方法。试验主要对RT-PCRELISA的各种反应条件进行了优化,确定了2mg/mL的链霉亲和素包被、1:3000抗地高辛的过氧化物酶及孵育时间等最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测方法高l00倍以上,而且特异性强,克服了组织样品中AIV含量少而难以检测的困难,为禽流感的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。

IL-12和IL-6与实验性急性坏死性胰腺炎严重程度的关系

目的:探讨血清白介素12(IL-12)浓度在急性坏死性胰腺炎(ANP)中的变化以及他与胰腺病变严重程度的关系. 方法:SD大鼠92只随机分为3组,胰腺炎组(A组, n=36)和干预组(Ⅰ组,n=32)大鼠都分3次60 g/L左旋精氨酸(L-arginine)ip建立ANP大鼠模型;Ⅰ组在诱导胰腺炎后2,5,8 h分3次ip IL-10各10 000 U.正常对照组(C组,n=24)接受同剂量的生理盐水.于4, 12,24,36 h分批处死大鼠,光镜下观察胰腺组织并进行病理评分,用酶底物法检测血清淀粉酶,用ELISA法检测IL-12和IL-6浓度. 结果:A组胰腺病理评分、血清淀粉酶、IL-12及IL-6 的水平显著高于对照组(24 h,血清淀粉酶:3 264.89±1 627.18 vs 364.61±64.24,P<0.01;IL-12:104.68±23.93 vs 56.72±22.67 pg/L,P<0.01:IL-6:132.95±26.64 vs 81.90±9.93 pg/L,P<0.01),Ⅰ组可使各观察指标较A组明显下降(24 h,病理评分:4.75±1.75 vs 7.89±1.17,P<0.01;血清淀粉酶:1481.13±336.48 vs 3 264.89±1 627.18,P<0.01:IL-12:81.31±17.23 vs 1 04.68±23.93 pg/L,P<0.05;IL-6:96.80±1 8.28 vs 1 32.95±26.64 pg/L,P<0.01);IL-12与病理评分(r=0.603, P<0.001)及血清淀粉酶水平(r=0.323,P<0.05)存在正相关,但是与IL-6无显著相关性(P>0.05). 结论:大剂量L-arginine ip诱导的ANP大鼠中,血清IL-12及IL-6显著上升,应用IL-10可减轻胰腺病变程度,IL-12浓度与胰腺病变正相关.

检测E.coliO157特异性IgY的间接ELISA方法的建立

本实验以E.coliO157免疫产蛋鸡 ,经四次免疫获得高免特异性卵黄抗体IgY ,并以108～109CFU/ml灭活E.coliO157为包被抗原 ,建立了抗E.coliO157卵黄抗体的间接ELISA检测方法。酶标兔抗鸡最佳工作浓度为1:320。并研究了卵黄抗体不同处理方法、包被温度和时间对ELISA检测的影响。该方法简便可靠 。

两种方法检测奶牛结核的比较

采用变态反应与ELISA同时对奶牛结核病进行检测 ,并以剖检进行验证。结果表明 :变态反应和ELISA对奶牛结核的检出率分别为 2 .0 %和 0 .33% ,变态反应阳性并不能全包括ELISA阳性。变态反应与剖检的符合率为 3.1 4 % ;而ELISA与剖检的符合率为 75 %。

Dot-ELISA用于雏鸭病毒性肝炎的诊断

本实验采用过碘酸钠法用辣根过氧化物酶标记纯化的I型鸭肝炎病毒单克隆抗体,建立了检测DHV(鸭病毒性肝炎)的Dot-ELISA方法。该方法简便易行,特异性好,与鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、鸡传染性法氏囊病毒、鸡新城疫病毒等无交叉反应,重复性高,对病毒尿囊液的最低检出范围为116,而对肝脏病料的最低检出范围为1160。该方法可用于临床发病鸭的检测。

输血前检查HBsAg弱阳性结果分析

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的，其传播途径是经血液、母婴、性传播和输血感染。关注输血安全，避免医疗纠纷、院内感染和医务人员职业暴露，并了解患者人院前传染性疾病感染情况，输血前检查就显得尤为重要，现针对输血前检查中HBSAg弱阳性结果进行分析，报道如下。

乙肝两对半定量检测结果分析

乙型病毒性肝炎（乙肝）是严重影响我国人民身体健康的传染病[1],我国是乙肝多发区,病毒携带者占总人口的10%左右,而乙肝的诊治主要依赖乙肝两对半测定,ELISA是目前比较常用的乙肝两对半检测方法,其方法简便成本低,但其影响因素多,且只能作定性检测 TRFIA是近十年发展起。

二氟沙星人工抗原的合成与鉴定

通过化学方法合成了二氟沙星人工免疫原和包被原 ;采用碳二亚胺法将半抗原二氟沙星与载体蛋白 BSA连接制备人工免疫原 ;并采用氯甲酸异丁酯法将二氟沙星与载体蛋白 OVA连接制备人工包被原 ,经Fe Cl3显色反应、紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功 ,这对抗二氟沙星单克隆抗体的制备具有重要意义。

协同凝集试验检测轮状病毒抗原的研究

作者收集346份粪便标本,进行协同凝集试验(CoA)检测轮状病毒(RV)抗原的研究,结果表明建立的 RV-CoA 有较好的特异性、敏感性和重复性,粪便标本用氯仿抽提、10%SPA 稳定液吸收、再与1%白蛋白0.1%吐温20混匀后进行 RV-CoA 检测,能有效控制非特异性凝集。RV-CoA 的阳性率与电镜法和 PAGE 法相比,无显著差异,但明显高于 ELISA 法。在 RV 流行季节,应用 RV-CoA 进行婴幼儿 RV 腹泻的快速诊断,可在40min 内出结果,阳性率为68.91%。RV-CoA 简便、快速、经济,适用于基层医院开展实验诊断和现场流行病学调查。

端粒酶活性两种检测方法的相关性研究

〔目的〕用TRSP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法测定端粒酶活性并对其特异性、敏感性及相关性进行研究。方法 :以人肺腺癌A5 49细胞为实验材料 ,用RNA酶、加热、倍比稀释的等因素处理A5 49细胞 ,TRAP -银染法对其特异性、敏感性进行检测 ;用 2mmol/LCINN加入A5 49细胞培养体系 ,用两种方法检测诱导分化剂CINN对肿瘤细胞前后端粒酶活性的改变 ,及对其相关性进行分析。结果 :端粒酶活性在A5 49细胞中有很强的特异性 ,且可以检出约 10 2 个肿瘤细胞的端粒酶活性 ;CINN可抑制端粒酶活性并对时间有依赖性 ;TRAP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法作等级相关分析 ,呈正相关 (rs=1.0 0 0 ,P <0 .0 1)。结论 :两种方法测定端粒酶活性有很高的特异性及敏感性且呈正相关。

盐酸克伦特罗及肉品卫生

阐述了盐酸克伦特罗在机体内的分解代谢 ,残留和对人畜的危害。比较分析了残留的检测技术 ,重点阐述了ELISA方法的原理、应用及发展前景 ,为保证肉品卫生作好监控。