用EMA-1基因重组蛋白对马巴贝斯虫病的血清学调查

在寄生虫病的血清学诊断中 ,常用的虫体抗原有纯化难、制备有限和部分交叉反应等缺点。以重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强、敏感性高、制备简单和易纯化等优点。本试验以EMA-1基因重组蛋白为诊断抗原 ,用 EL ISA方法对延边地区马巴贝斯虫病进行了血清学调查。结果表明 ,该地区马巴贝斯虫病的血清阳性率为 3 4.2 % ( 3 8/ 1 1 1 ) ,而血涂片染色镜检法的阳性率为 1 3 .5% ( 1 5/ 1 1 1 ) ,两者之间差异极显著 ( P <0 .0 1 )。不同牧地和不同年龄被检血清阳性率之间未见显著差异。

马巴贝西虫EMA-1基因的克隆与表达

通过聚合酶链式反应扩增出体外培养的马巴西虫USDA株基因EMA_1 ,将该片段连接到克隆质粒载体pUC1 9的BamHI酶切位点上 ,并对其序列进行测定。结果表明该基因长度为 83 6bp,编码的表面蛋白由 2 72个氨基酸残基组成 ,与佛罗里达 (Florida)株的EMA_1的氨基酸序列有 95 %左右的同源性。再将EMA_1基因片段插入到表达质粒载体pGE MEX_2的BamHI位点上 ,并导入大肠杆菌JM10 9(DE3 )中。经SDSPAGE分析和Westernblot检测的结果表明 ,马巴贝西虫USDA株基因EMA_1 ,在大肠杆菌内获得表达 ,融合蛋白的分子量为 65kDa。将其免疫给小鼠可产生特异性的抗马巴贝西虫抗体 ,且同驽巴贝西虫无交叉反应。