VEGF与EMT相关蛋白E-cadherin在NSCLC中的表达及意义

研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中血管内皮生长因子(VEGF)和E-钙黏附素(E-cad)的表达情况及临床病理意义。应用免疫组织化学法检测VEGF和E-cad在NSCLC中的表达。二者在NSCLC与肺良性病变组织中的差异均有统计学意义(P<0.05);NSCLC中,VEGF表达与淋巴结转移有关,E-cad表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移以及TNM分期有关(P<0.05);VEGF与E-cad之间呈负相关。二者与NSCLC的发生、发展、侵袭转移有关,可作为判断NSCLC预后的指标。

慢性阻塞性肺病及其相关非小细胞肺癌进程与EMT的相关性研究

目的:通过对相关数据库数据分析,探究EMT相关调节因子的异常表达与慢性阻塞性肺疾病及其相关非小细胞肺癌的相关性。方法:对NCBI中GEO数据库中的若干数据集数据进行表达量分析、生存分析和相关性分析。结果:(1)研究分析表明,Snai1等EMT相关调节因子在非小细胞肺癌患者中存在明显的高表达,而E-cadherin(CDH1)等则表现为明显的低表达。(2)对大量的COPD病例样本进行分析,发现部分EMT相关的分子在COPD患者中也表现出明显的表达异常,且与非小细胞肺癌患者中的变化相一致。结论:EMT指标和在COPD患者中的表达相关性分析表明,EMT调节因子的异常表达可能与COPD患者的疾病发展存在一定的相关性。

Shugoshin1参与NSCLC细胞多西紫杉醇耐药的机制探讨

目的:探讨SGO1(Shugoshin1)参与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549对多西紫杉醇耐药的可能机制。方法:成功构建SGO1过表达细胞株A549-SGO1,利用RT-PCR和Westernblot进行鉴定;通过RT-PCR和免疫荧光检测A549-Vector细胞及A549-SGO1细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况;通过RT-PCR和Western-blot检测EMT相关转录因子Twist2的表达情况。结果:与A549-Vector细胞相比,A549-SGO1细胞中上皮相关标志物E-cadherin和ZO-1的表达明显降低,而间质相关标志物Fibronectin和Vimentin表达明显升高,EMT相关转录因子Twist2的表达也明显升高。结论:SGO1可能通过Twist2介导EMT进而参与NSCLC细胞株A549对多西紫杉醇的耐药。

羧肽酶A4促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT进程的机制及其相关意义

目的:探究羧肽酶A4(CPA4)促进非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的机制及其临床意义。方法:通过IHC和WB法检测2012年2月至2015年12月济南市中心医院收治的105例晚期或转移性NSCLC患者的癌组织及其癌旁组织标本,以及NSCLC细胞中CPA4的表达;χ2检验分析CPA4表达与患者临床病理特征之间的关联,Kaplan-Meier法分析CPA4表达与患者OS之间的关系。采用细胞转染的方法分别构建稳定过表达和低表达CPA4的H1299与A549 NSCLC细胞,利用CCK-8法、细胞集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell小室实验检测过表达或敲减CPA4后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。建立裸鼠细胞移植瘤模型和尾静脉-肺转移肿瘤模型,检测过表达CPA4和敲减CPA4表达对在裸鼠体内成瘤和转移的影响,通过WB和IHC法检测移植瘤组织中上皮间质转化(EMT)相关标志物的变化。结果:与癌旁组织和正常肺上皮细胞比较,CPA4在NSCLC组织和细胞中均呈高表达(均P<0.05);CPA4高表达NSCLC患者的OS显著短于低表达患者(P<0.05),CPA4的高表达更多见于分化差、N2~N3淋巴结受累和TNMⅣ期(P<0.05或P<0.01)。过表达CPA4促进H1299细胞而敲减CPA4表达则抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭;过表达CPA4促进裸鼠H1299细胞移植瘤生长和肺的转移;过表达CPA4促进H1299细胞的EMT进程相关分子的变化。结论:NSCLC组织和细胞中CPA4均呈高表达,过表达CPA4可诱导EMT进程促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭且与肿瘤进展和预后有关,CPA4是一个预测NSCLC复发、预后及可用于靶向治疗的潜在标志物。

URG11基因介导Wnt/β-catenin信号通路调控EMT参与非小细胞肺癌转移的分子机制研究

目的探讨URG11基因介导的Wnt/β-Catenin信号通路调控EMT参与非小细胞肺癌转移的分子机制。方法非小细胞肺癌细胞系A549经shRNA质粒转染48h,敲除URG11后收集细胞行后续实验。实验共分两组,分别为敲除URG11的A549细胞组(实验组)和未敲除URG11的A549细胞组(空白对照组)。采用Western blott测定β-Catenin及其下游基因cyclinD1、c-myc的蛋白表达,同时用RT-qPCR检测β-Catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA表达。并用裸鼠成瘤模型评估URG11基因对NSCLC侵袭性生长的影响。结果①敲除URG11显著抑制Wnt/β-Catenin信号通路在NSCLC细胞中激活。Western blot蛋白质印迹分析显示β-Catenin、cyclin D1和c-myc的蛋白水平在敲除实验组中的表达显著低于对照组(DPI值分别为0.22±0.06 VS 0.77±0.21,0.61±0.09 VS 1.52±0.23,0.42±0.07 VS 0.84±0.14,P<0.05)。RT-qPCR结果显示β-Catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA在对照组中的表达显著高于实验组(分别为3.52倍,2.58倍和2.19倍,P<0.05)。②敲除URG11显著减少异种移植肿瘤体在裸鼠体内侵袭性生长。通过裸鼠异种移植肿瘤模型动态观察了URG11对肿瘤的体内生长作用。与对照组相比,敲除URG11能显著抑制Balb/C裸鼠体内新生肿瘤的重量,第35天实验组VS对照组(0.21±0.04)g VS(0.58±0.08)g,P<0.05,平均抑瘤率为63.79%;同时敲除URG11能显著减少异种移植肿瘤的体积:第21、28、35天的新生瘤体体积,实验组VS对照组(258.33±0.24)mm^(3)VS(512.86±0.18)mm^(3),(414.59±0.17)mm^(3)VS(685.78±0.23)mm^(3),(423.21±0.36)mm^(3)VS(986.73±0.14)mm^(3),P<0.05。结论URG11导致的EMT与NSCLC的发生和进展密切相关。

TGF-β上调Notch3诱导上皮间质转化在促进肺癌骨转移中的作用

目的:研究TGF-β上调Notch3表达诱导EMT在肺癌骨转移中的作用。方法:免疫荧光、蛋白印记和RT-PCR方法检测Notch3在TGF-β诱导下上皮、间质标记物以及上皮间质转化相关转录因子Twist、Snail和ZEB-1的表达变化;利用慢病毒包装Notch3正义表达载体和ZEB-1 siRNA载体分别上调Notch3和抑制ZEB-1的表达后,采用免疫荧光、蛋白印记方法检测抑制EMT转录因子ZEB-1的表达后,对上皮间质标记物的影响;进而通过体外迁移和侵袭试验观察抑制ZEB-1的表达后对Notch3高表达细胞系的迁移和侵袭能力的影响;最后体外ELISA法检测骨转移相关分子p THr P和IL-6的表达,探讨Notch3通过诱导EMT在促进肺癌骨转移中的作用。结果:Notch3 siRNA抑制其表达后能够逆转TGF-β诱导的上皮标记物和间质标记物的表达变化,这一现象是通过影响EMT转录因子ZEB-1实现的。进而利用慢病毒包装系统,构建了Notch3过表达细胞株和ZEB-1 siRNA细胞株,免疫荧光和蛋白印记试验发现,Notch3过表达载体能够抑制上皮标记物的表达,上调间质标记物的表达,促进EMT的发生,而抑制ZEB-1的表达后能够逆转这一现象。最后,体外侵袭试验和ELISA试验发现,Notch3高表达能够增加肺癌细胞的侵袭能力以及p THr P和IL-6的分泌,而抑制ZEB-1的表达后可明显降低其转移能力以及p THr P和IL-6的分泌。结论:Notch3参与了TGF-β诱导肺癌细胞上皮间质转化过程,并在NSCLC骨转移中发挥作用。

过表达KLF4抑制非小细胞肺癌增殖及上皮间质转化的作用机制

目的探究KLF4调控非小细胞肺癌(NSCLC)增殖及上皮间质转化(EMT)发生的作用机制,为NSCLC的临床研究提供理论依据。方法收集临床病理资料进行统计学分析,免疫组织化学检测KLF4在癌旁及癌组织中的表达,细胞水平检测KLF4在癌细胞和正常细胞中的表达差异,过表达KLF4检测对肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT相关标志物的影响。结果 KLF4在癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达,并且与患者的临床分期及远处转移密切相关,细胞水平检测也得到了相同的结果,上调KLF4的表达抑制了细胞的增殖、侵袭及迁移,同时抑制EMT相关的间充质标志物的表达,促进上皮标志物的表达。结论过表达KLF4能够抑制NSCLC增殖及EMT的发生。

FBXW7调控非小细胞肺癌上皮间质转化的作用机制

目的:研究FBXW7在非小细胞肺癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)过程中发挥的作用。方法:收集100对非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织,利用免疫组化检测FBXW7在癌组织和癌旁组织中的表达。利用Western blot检测FBXW7在细胞系中的表达及FBXW7对EMT部分标志蛋白的影响。利用Transwell实验检测FBXW7对NSCLC细胞迁移能力的影响。免疫共沉淀实验和泛素化的Western blot验证FBXW7与Snail1的关系。结果:FBXW7在NSCLC组织中的表达明显低于对应癌旁组织中的表达。FBXW7在正常肺上皮细胞中的表达也明显高于4种非小细胞肺癌细胞系中的表达。FBXW7过表达显著抑制A549细胞的迁移能力。FBXW7过表达也明显抑制NSCLC细胞的EMT。机制研究发现,FBXW7可以直接结合并泛素化降解Snail1蛋白,并且Snail1部分逆转FBXW7对NSCLC细胞EMT标志蛋白的影响。结论:FBXW7对NSCLC细胞EMT的调控部分依赖于泛素化降解Snail1蛋白。

非小细胞肺癌上皮间质转化的实验研究

目的:探讨上皮间质转化(EMT)在非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭转移中的作用,为NSCLC的治疗和预后预测提供新的实验依据。方法:利用免疫组化检测97例EMT相关标志物上皮性钙粘蛋白(E-cad)、β-连环素(β-cat)和神经性钙粘蛋白(N-cad)、纤连蛋白(Fibronectin FN)、波形蛋白(Vimentin)在NSCLC中的表达情况。分析以上表达情况与肺癌临床病理特征的关系及其相关性。结果:(1)在97例NSCLC中,E-cad、β-cat、N-cad、FN、Vimentin阳性表达率分别是50.5%(49/97)、28.9%(28/97)、8.2%(8/97)、67.0%(65/97)、34.0%(33/97)。(2)E-cad在不同组织学分级及淋巴结有无转移分组中其表达有显著差异(P<0.05),β-cat在不同组织分级阳性表达有显著差异(P<0.05)。Vimentin在淋巴结有无转移分组中表达有显著差异(P<0.05),FN在在不同肿瘤大小、组织学分级及淋巴结有无转移分组中阳性表达有显著差异(P<0.05)。(3)NSCLC中,E-cad与β-cat表达存在正相关(P<0.05)。(4)VIM在NSCLC中与E-cad及β-cat表达呈明显负相关(P<0.05),FN表达与E-cad呈负相关(P<0.05),而与β-cat表达无差异(P>0.05)。(5)N-cad在NSCLC中阳性表达率为8.2%(8/97),在组织学类型及淋巴结有无转移分组中阳性表达有显著差异(P<0.05)。结论:E-cad、β-cat在NSCLC中表达发生了下调,而N-cad、FN、VIM表达升高,说明NSCLC中存在EMT现象。且与肿瘤侵袭转移相关,均可以作为NSCLC恶性程度、转移复发、预后的判断指标。

靶向HDAC6信号抑制非小细胞肺癌A549细胞上皮-间质转化的机制

目的观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC6)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的临床意义及其靶向HDAC6信号对A549细胞发生上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法采用免疫组织化学染色法检测HDAC6和E-钙粘蛋白(E-ca)在NSCLC中的表达并分析其临床病理意义;采用转化生长因子(TGF)-β1诱导A549细胞,并予以HDAC6、Rho相关卷曲螺旋激酶(ROCK)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号抑制剂预处理。CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,transwell实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法检测E-cadherin、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和HDAC6的表达。结果HDAC6在NSCLC组织中高表达,与分化程度和淋巴结转移关系密切,且与E-ca表达呈负相关。TGF-β1能够诱导A549细胞发生EMT,即vimentin、α-SMA表达上调,而E-ca表达下调;予以HDAC6、ROCK和ERK信号抑制剂能够显著抑制该变化。结论HDAC6在NSCLC发生、发展中可能起到重要的调控作用,与肿瘤的EMT关系密切,其作用与ROCK和ERK信号的调控有关。

miR-939对非小细胞肺癌侵袭能力及上皮细胞-间充质转化过程的影响

目的:探索mi R-939对非小细胞肺癌的侵袭能力及上皮细胞-间充质转化过程(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法:实时聚合酶链反应(q RT-PCR)检测mi R-939在非小细胞肺癌组织中的表达。Transwell侵袭实验分析mi R-939对细胞侵袭能力的影响。通过Western blot检测EMT相关标志物的表达水平。结果:与癌旁组织相比,mi R-939在NSCLC组织中的表达水平明显升高,且与TNM分期和淋巴结转移密切相关;同时,与正常肺上皮细胞相比,mi R-939在NSCLC细胞系中的表达也显著升高。下调mi R-939表达后,细胞侵袭能力明显降低(P<0.05)。另外,mi R-939下调后可使EMT相关标志物E-cadherin升高,Vimentin降低。结论:mi R-939可能作为不良因子,促进非小细胞肺癌侵袭转移,从而影响肿瘤发展。

LncRNA SNHG1对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭的影响研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)SNHG1对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移和侵袭的影响。方法利用GEO数据库数据集资料分析SNHG1在肺癌组织与正常组织的表达,同时分析SNHG1表达量与肺癌患者总生存期的关系;过表达及干扰NSCLC细胞中SNHG1的表达,qRT-PCR检测SNHG1的表达效率,细胞划痕实验、transwell迁移及侵袭实验分别检测SNHG1对NSCLC细胞迁移和侵袭的影响。通过蛋白质印迹法检测上皮细胞标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质细胞标志蛋白N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin),评价上皮间质转化(EMT)发生情况。结果GEO数据资料分析表明,SNHG1在肺癌组织中明显高表达,且与患者的总生存期呈负相关;过表达SNHG1后NSCLC细胞的迁移及侵袭能力明显增加,上皮标志蛋白降低,间质标志蛋白增加;而干扰SNHG1则得到相反的结果。结论LncRNA SNHG1可通过EMT促进NSCLC细胞迁移和侵袭,提示LncRNA SNHG1有望成为NSCLC治疗的新靶点。

CEMIP调控Src/AKT/STAT3信号通路对非小细胞肺癌上皮间质转化及细胞侵袭、迁移的影响

目的:探讨细胞迁移诱导透明质酸结合蛋白(CEMIP)对非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转化(EMT)及细胞迁移、侵袭的影响及其可能的分子机制。方法:采用免疫荧光染色法检测NSCLC患者病理标本中CEMIP的表达。以高表达CEMIP的NSCLC细胞A549、H1299为研究对象,采用慢病毒转染细胞,干扰CEMIP的表达,建立干扰CEMIP表达的NSCLC细胞模型,构建成功后,将细胞分为干扰CEMIP组(shCEMIP组)和阴性对照组(shNC组);采用实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blotting检测各组细胞中CEMIP及EMT标志物、信号通路蛋白的表达水平变化;划痕实验、Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。结果:6对肺腺癌组织中CEMIP表达量均高于其配对癌旁正常肺泡组织,约为1.56倍(P<0.05)。同样地,肺癌细胞A549和H1299的CEMIP mRNA及蛋白表达水平均显著高于肺正常细胞BEAS-2B(均P<0.05)。慢病毒干扰A549和H1299细胞的CEMIP后,shCEMIP组CEMIP mRNA及蛋白水平较shNC组均降低(均P<0.05);Transwell和划痕结果显示,与shNC组比较,shCEMIP组细胞的迁移、侵袭细胞数均明显减少(均P<0.05);细胞愈合率明显降低(P<0.05)。Western blotting结果显示,干扰CEMIP后可上调细胞的上皮标志物E-cadherin蛋白的表达(P<0.05),同时下调间质标记物N-cadherin、Vimentin、Twist1、Snail1蛋白的表达(P<0.05);转移相关信号通路蛋白Src、p-AKT、STAT3表达水平在干扰CEMIP后均出现明显下降(均P<0.05)。结论:CEMIP在NSCLC细胞中高表达,下调CEMIP的表达或可通过抑制Src/AKT/STAT3通路逆转EMT过程,从而降低细胞的迁移、侵袭能力。

miR-132靶向作用SOX4/E-cadherin信号通路逆转PC-9细胞株吉非替尼耐药性的实验研究

目的 探讨miR-132靶向SOX4/E-cadherin信号通路对PC-9吉非替尼耐药细胞株增殖、迁移和凋亡的影响。方法 采用吉非替尼长期浓度梯度递增法体外建立PC-9/GR耐药细胞株,MTT法验证其耐药性。将miR-132模拟物(mimics)或空质粒转染至PC-9/GR细胞作为miR-132组和NC组,另设未处理PC-9/GR作为空白对照组。采用MTT法、Annexin V/PI双染法、划痕实验检测吉非替尼对各组细胞增殖、凋亡和迁移的影响。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-132和SOX4的表达水平。采用双荧光素酶报告实验验证SOX4与miR-132的靶向关系。将miR-132组PC-9/GR细胞分别转染过表达SOX4质粒和空质粒为miR-132+SOX4组和miR-132-NC组,采用Westernblotting检测E-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平。结果 体外成功建立PC-9/GR耐药细胞株,不同浓度吉非替尼对PC-9/GR细胞增殖抑制率低于PC-9细胞。PC-9和PC-9/GR的IC50分别为157.7nmol/L和917.9nmol/L。PC-9/GR的耐药指数(RI)为5.82。PC-9/GR细胞miR-132表达水平明显低于PC-9细胞(P<0.05),转染miR-132mimics后,miR-132组miR-132表达水平明显高于PC-9/GR组和NC组(P<0.05)。不同浓度吉非替尼对miR-132组的增殖抑制率高于PC-9/GR组和NC组(P<0.05)。miR-132组IC50为357.6nmol/L。357.6nmol/L吉非替尼作用于miR-132组24h后,细胞早期凋亡率和细胞愈合率分别为(23.14±2.23)%、(13.44±1.81)%,与PC-9/GR组和NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验验证SOX4可能是miR-132的下游靶基因。miR-132组PC-9/GR细胞SOX4mRNA表达水平低于PC-9/GR组和NC组(P<0.05)。miR-132+SOX4组SOX4和Vimentin蛋白表达水平高于miR-132组和miR-132-NC组(P<0.05);而E-cadherin则相反(P<0.05)。结论 上调miR-132可抑制SOX4水平进而诱导EMT发生,从而逆转PC-9/GR细胞株对吉非替尼的耐药。

CD44＋／CD24-联合E-cadherin、Vimentin在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的检测CD44＋／CD24-与E-cadherin、Vimentin在非小细胞肺癌组织中的表达及与临床预后的关系。方法采用免疫组化法检测500例非小细胞肺癌组织CD44＋／CD24-及E-cadherin、Vi-mentin表达相关性，并分析与非小细胞肺癌的临床病理特征和预后的关系。结果非小细胞肺癌组织，Vimentin表达与组织分化程度、TNM分期相关（P〈0．05）；CD44＋／CD24-表达与淋巴结转移、肿瘤分化程度相关（P〈0．05）；CD44＋／CD24-与上皮间质转化（EMT）具有相关性（P〈0．05）；三者表达与年龄、性别、吸烟、临床病理类型无明显相关性；患者生存时间CD44＋／CD24-高表达短于低表达者（P〈0．05）；结论恶性肿瘤EMT现象“募集”了肿瘤干细胞，可导致恶性肿瘤细胞向分化差趋势发生发展；CIM4＋／CD24-与EMT在非小细胞肺癌发生、发展中起着重要作用并与患者预后相关，为突破恶性肿瘤治疗提供了潜在防治靶点。

非小细胞肺癌上皮间质转化的意义及机制

上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)能够促进非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的侵袭转移,且与NSCLC耐药情况密切相关,值得重点关注。EMT与NSCLC的预后有一定的相关性,EMT参与了NSCLC侵袭转移和耐药性的发生,同时也为治疗NSCLC提供新途径。通过调节其相关分子标志物逆转EMT,减缓或抑制NSCLC侵袭转移和耐药情况,可以有效防治NSCLC。中医、西医通过干预EMT途径治疗NSCLC各有所长,中西医结合可更好地发挥药物的抗肿瘤效应。

microRNA-205在人非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的检测人非小细胞肺癌（non small cell lung cancer,NSCLC）组织中microRNA-205表达的变化及分析肺腺癌有淋巴结转移患者组织中microRNA-205与EMT相关标志基因表达的相关性。方法收集2011年12月～2013年10月笔者医院收治的NSCLC患者75例,每例患者另取癌旁组织作为对照,荧光定量PCR法检测肿瘤组织microRNA-205的表达及有淋巴结转移患者肺癌组织中EMT相关基因Slug、Snail、vimentin mRNA的表达情况。结果NSCLC癌组织microRNA-205的表达在〈3cm肿瘤患者（19.56±10.81 vs 29.36±10.37）、有淋巴结转移（15.46±7.03 vs 37.98±10.35）或临床分期为Ⅰ～Ⅱ（19.09±9.23 vs 30.21±8.96）患者组织中相对低表达,在肿瘤大小、淋巴结转移或临床分期之间差异具有统计学意义（P〈0.05）,且29例淋巴结转移肺腺癌患者癌组织microRNA-205与EMT重要转录因子Slug和Snail的表达呈显著负相关（Pearson r=-0.417, P=0.024;Pearson r=-0.388, P=0.038）。结论NSCLC癌组织microRNA-205的表达与淋巴结转移密切相关,可能通过调控Slug和Snail分子参与肺腺癌的侵袭转移过程,将为寻找治疗肺癌转移的策略提供新靶点。

探讨嵌合内含子对非小细胞肺癌细胞系PC-9上皮间质转化的影响

目的:探讨嵌合内含子(chimeric intron)对人非小细胞肺癌PC-9细胞株上皮间质转化(EMT)的影响和作用。方法:以psiCHECK-2质粒为基本框架,插入嵌合内含子构建出psiCHECK-2-Intron双荧光素酶报告基因重组质粒载体,再将psiCHECK-2-Intron和psiCHECK-2分别转染至PC-9细胞中,通过双荧光素酶活性快速检测该重组质粒载体在真核细胞中的表达情况,然后分别应用细胞划痕实验和Matrigel侵袭实验观察PC-9细胞迁移和侵袭能力的变化,再通过qRT-PCR以及Western-Blotting检测EMT相关分子标志物:N-钙黏蛋白(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)以及转录因子Snail表达水平的改变。结果:与对照组相比,Intron组PC-9细胞的侵袭能力明显降低(P<0.001),N-cadherin、β-catenin和Snail等相关分子标志物的表达量明显下调(P<0.001)。结论:嵌合内含子能够抑制非小细胞肺癌PC-9细胞株的EMT转化,其作用机制可能与N-cadherin、β-catenin和Snail表达量下调有关。

核不均一核糖核蛋白R基因沉默抑制非小细胞肺癌细胞恶性转化

核不均一核糖核蛋白R(hnRNPR)是一种与mRNA生物学功能密切相关的RNA结合蛋白质,与多种肿瘤细胞的恶性转化相关。然而,在非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用机制尚不清楚。本研究通过检索公共数据库发现,hnRNPR蛋白主要在肺癌细胞核中表达,hnRNPR mRNA在非小细胞肺癌组织中高表达,并且与肺腺癌患者的生存率呈负相关;hnRNPR的表达与非小细胞肺癌患者的性别、T分期显著相关(P<0.05)。构建hnRNPR基因沉默的非小细胞肺癌稳定细胞株,检测细胞功能变化,结果显示,hnRNPR基因沉默抑制了细胞增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化(EMT),并将细胞周期阻滞在G1期(P<0.01)。生物信息学分析显示,非小细胞肺癌中hnRNPR基因与9310个基因的表达正相关(皮尔逊相关系数>0,P<0.05),与10680个基因的表达负相关(皮尔逊相关系数<0,P<0.05)。综上所述,hnRNPR在非小细胞肺癌中高表达,可能作为剪接体的组分,通过调节相关基因的表达,促进了NSCLC细胞的恶性转化。

HOXC8通过调控PDX1的表达促进非小细胞肺癌的生长与EMT过程

目的:探索HOXC8与PDX1在非小细胞肺癌(non-small lung cancer,NSCLC)细胞生长及上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用机制。方法:通过转录组测序、荧光定量PCR及染色质免疫沉淀等方法筛选并鉴定HOXC8调控的靶基因;通过Western blot、CCK-8、克隆集落生成及生物信息学等手段分析靶基因PDX1在非小细胞肺癌中的作用。结果:实验证明HOXC8可结合到PDX1基因的启动子上,并作为转录因子激活PDX1的表达。PDX1的表达促进NSCLC细胞的生长与EMT过程,而沉默PDX1能显著地抑制NSCLC细胞的生长与EMT过程,并诱导细胞的凋亡。通过分析已知的肿瘤数据库,我们发现在NSCLC中PDX1的表达显著高于正常组织,且PDX1的高表达与肺癌患者的预后不良呈显著的相关性。结论:本研究发现HOXC8-PDX1轴在非小细胞肺癌中起着重要的调节作用,可有望成为非小细胞肺癌治疗的新靶点。