黄芪多糖联合5-FU对肝癌HepG2细胞EMT转化的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌Hep G2细胞上皮细胞间质转型(EMT作用的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)、Transwell法分别检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用对Hep G2细胞增殖、侵袭的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用时对Hep G2细胞EMT相关因子表达的影响。结果黄芪多糖与5-FU单独或联合使用均能抑制Hep G2细胞的增殖、迁移;均能上调Hep G2细胞内钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达、下调波形蛋白(vimentin)和趋化因子受体4(CXCR4)表达;总体趋势为785.26μmol/L黄芪多糖+23.90μmol/L 5-FU>392.63μmol/L黄芪多糖+23.90μmol/L 5-FU>392.63μmol/L黄芪多糖>23.90μmol/L5-FU>空白对照。结论黄芪多糖联合5-FU具有协同抑制肝癌细胞生长转移的作用,其机制可能与抑制EMT有关。

MicroRNA在结肠癌EMT转化中的作用与机制研究

目的探讨MicroRNA在结肠癌EMT转化中的作用和机制。方法随机选取2014年1月1日-2015年7月1日我院行手术切除的20例发生淋巴结转移的结肠癌癌块蜡块和未发生转移的大肠癌患者癌块蜡块20例,分析患者结肠癌癌组织中miRNA表达水平进行分析,通过Real-time PCR验证,探讨细胞和分析水平证实的相关分子在结肠癌细胞EMT转化中的作用进而机制。结果未发生转移的结肠癌肿瘤组织中肿瘤组织miR-148a表达水平明显低于发生转移的结肠癌组织中的肿瘤组织miR-148a表达水平,两组之间差异具有统计学意义(t=5.632,P<0.05)。在发生转移的结肠癌组Vimentin阳性率为75%(15/20),未转移的结肠癌组中脱落的癌细胞Vimentin阳性率为30%(6/20),两组之间Vimentin阳性率差异具有统计学意义(χ2=7.563,P<0.05)。从脱落的癌细胞CK表达情况看,为发生转移的结肠癌组中脱落的癌细胞CK表达阳性率为15%(3/20),发生转移的脱落的癌细胞CK表达阳性率60%(12/20),两组之间差异具有统计学意义(χ2=6.324,P<0.05)。结论在结肠癌EMT中miRNA的表达与癌症的进展密切相关,是结肠癌主要的分子标志物。

木犀草素通过调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路对骨肉瘤U2OS细胞EMT转化和细胞生物学行为的影响

目的:探讨木犀草素通过调节磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/核转录因子-kappa B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/nuclear factor-kappaB,PI3K/AKT/NF-κB)信号通路对骨肉瘤U2OS细胞(epithelial-mesenchymal transition,EMT)作用的分子机制。方法:采用不同浓度的木犀草素(10、20、40μmol/L)处理U2OS细胞,MTT法检测木犀草素对U2OS细胞增殖的影响;Transwell实验检测木犀草素对U2OS细胞迁移的作用;qPCR检测木犀草素对Bax、Bcl-2、Caspase-2 mRNA表达的影响;Western blot检测木犀草素对p-PI3K、p-AKT、p-IKK、NF-κB等PI3K/AKT/NF-κB途径相关蛋白表达的影响;免疫荧光检测木犀草素对EMT相关蛋白E-cadherin、vimentin表达的影响。结果:木犀草素可明显抑制U2OS细胞增殖(P<0.05),且具有时间-浓度依赖性;同时,可以显著抑制U2OS细胞的迁移(P<0.05);可以上调U2OS细胞内Bax、Caspase-2 mRNA表达水平(P<0.05),下调Bcl-2 mRNA表达水平(P<0.05);明显降低U2OS细胞内p-PI3K、p-AKT、p-IKK、NF-κB蛋白表达(P<0.05),同时显著抑制E-cadherin、vimentin蛋白表达(P<0.05)。结论:木犀草素可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路活化从而发挥抑制U2OS细胞增殖、迁移和EMT转化作用。

白藜芦醇联合5-FU对宫颈癌HeLa细胞EMT转化的影响

目的探索白藜芦醇联合5-FU对宫颈癌细胞系HeLa细胞EMT的影响。方法MTT实验检测白藜芦醇、5-FU以及联合使用对HeLa细胞增殖的影响;Transwell小室迁移实验检测各组细胞迁移能力;免疫荧光实验检测各组细胞中Vimentin蛋白表达变化;Westernbloting实验检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin、Twist1、Snail1蛋白表达变化;Elisa实验检测各组细胞上清中MMP-2、MMP-9的表达。结果与单独使用白藜芦醇或5-FU相比,联合使用后HeLa细胞的IC50明显降低,提高了HeLa细胞对5-FU的敏感性。进一步发现与二者单独使用相比,联合使用导致HeLa细胞迁移能力显著下降。在分子水平上,白藜芦醇联合5-FU诱导细胞中E-cadherin蛋白表达更高,Vimentin、N-cadherin、Twist1、Snail1、MMP-2、MMP-9蛋白表达更低。结论与单独使用白藜芦醇或5-FU相比,白藜芦醇联合5-FU对HeLa细胞迁移能力的抑制增强,二者联合增强效应的分子机制在于联合使用对HeLa细胞EMT具有更强的逆转能力。

基于Wnt/β-catenin通路探究迷迭香酸对结直肠癌上皮-间质转化的抑制作用

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)SW480细胞恶性行为的影响及机制。方法通过收集2019年1月至2020年12月在如皋市人民医院接受手术治疗的初诊未经治疗的CRC患者的肿瘤组织以及正常人的结肠组织,用免疫组化和Western blotting方法检测β-catenin的表达,分析与临床分期、预后和免疫浸润的关系。CCK-8检测10、15、20μmol/L的RA对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Transwell和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力变化;Western blotting检测凋亡、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及Wnt/β-catenin通路的相关蛋白表达情况。CRC SW480细胞系悬液皮下接种制作移植瘤小鼠模型,150 mL/kg RA溶液灌胃,观察RA对移植瘤生长的影响,ELISA检测了血清炎症因子变化。结果正常结肠组织中β-catenin的表达很低,而CRC组织中β-catenin的表达明显增高。在CRC患者β-catenin高表达组中,肿瘤大于5 cm的患者数显著高于低表达组,而患者总生存期却显著小于低表达组(P<0.05)。各浓度RA组细胞增殖显著抑制,且呈浓度依赖性降低(P<0.05)。移植瘤小鼠模型中,RA处理组凋亡蛋白Bax和Bad表达较对照组显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少(P<0.05)。同时可见SW480细胞的侵袭和迁移能力显著被抑制(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著增加,Snail、N-cadherin和Vimentin表达显著减少(P<0.05),而且Axin和GSK-3β表达增加,β-catenin表达减少(P<0.05)。结论RA可能通过干预Wnt/β-catenin通路介导的EMT抑制SW480的生物学活性。

miR-125b通过Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞上皮间质转化和转移

目的探讨miR-125b促进胃癌细胞侵袭、转移以及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法应用qRT-PCR检测miR-125b在胃癌组织及其相应的癌旁组织中的表达;胃癌细胞在上调或下调miR-125b时,Western blotting检测DKK3和SERPINA4的蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-125b能否与DKK3、SERPINA4靶向结合,MKN45细胞共转染miR-125b抑制物和靶基因siRNA,用迁移、侵袭实验观察miR-125b能否通过DKK3、SERPINA4调节MKN45细胞的生物学功能,并观察EMT相关转录因子表达;进一步通过慢病毒转染胃癌细胞上调或下调血清反应因子(SRF)表达并经尾静脉注射裸鼠后观察体内实验中肺转移瘤的数目,探讨SRF对胃癌细胞转移的影响。结果qRT-PCR结果显示miR-125b在胃癌组织的表达上调,且与临床分期和淋巴结转移相关。双荧光素酶报告实验显示DKK3和SERPINA4是miR-125b在胃癌细胞中的直接靶点,并激活Wnt/β-catenin信号通路,进而促进EMT相关转录因子Twist1和Slug的转录,诱导EMT的发生,促进胃癌转移。体内体外实验证实转录因子SRF通过正向调节miR-125b的表达促进胃癌细胞的侵袭转移。结论SRF/miR-125b轴促进了胃癌细胞的EMT和转移,这些调节因子有望成为胃癌新的潜在治疗靶点或生物标志物。

PLCD3调控EMT进程促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:研究磷脂酶PLCD3在结直肠癌组织和细胞中的表达情况和对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及发生机制。方法:采用免疫组化分析PLCD3在结直肠癌组织中的表达,利用Kaplan-Meier Plotter数据库得知预后情况。使用RT-qPCR技术验证了PLCD3在人永生化结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞的表达水平,利用基因工具干预SW620和SW480细胞。采用克隆形成实验、CCK8增殖实验、划痕实验和Transwell实验来探究PLCD3对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用Western blot验证EMT相关蛋白的变化。结果:PLCD3在结直肠癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),PLCD3高表达与预后生存率低密切相关(P<0.001)。敲低PLCD3抑制了SW620细胞增殖、侵袭和迁移,N-cadherin、MMP2、MMP9相对表达量显著降低(均P<0.01),E-cadherin表达水平显著升高(P<0.001)。过表达PLCD3促进了SW480细胞增殖、侵袭和迁移,N-cadherin、MMP2、MMP9相对表达量显著升高(均P<0.001),E-cadherin表达水平显著降低(P<0.0001)。结论:PLCD3在结直肠癌中表达上调,PLCD3可能通过调控EMT进程促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

骨髓间充质干细胞来源外泌体抑制高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT

目的探讨骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCs-Exo)对高糖腹膜透析液(PDF)作用下人腹膜间皮细胞系(HMrSV5)发生上皮-间充质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法采用透射电镜、纳米颗粒追踪分析仪和Western blot对BMSCs-Exo进行鉴定;将HMrSV5细胞进行分组:(1)对照组;(2)不同浓度PDF(1.5%、2.5%、4.25%)组;(3)siNLRP3组;(4)siNC组;(5)BMSCs-Exo组。Western blot检测EMT标志物及NLRP3炎性体通路蛋白的表达,RT-qPCR检测mRNA表达,ELISA检测细胞上清中炎性因子表达量。结果BMSCs-Exo呈双层膜结构的圆形囊泡,直径40~150 nm,外泌体特异标记物CD9、CD81、TSG101和Alix阳性;与对照组相比,PDF组细胞中α-SMA、vimentin、NLRP3、pro-caspase-1及pro-IL-1β表达明显上调,而E-cadherin表达下调(P<0.05);PDF组细胞上清中TGF-β1、IL-1β和IL-18表达量显著提高(P<0.05)。siNLRP3组细胞α-SMA表达下降,而E-cadherin表达明显上调。与4.25%PDF组比较,BMSCs-Exo组细胞E-cadherin表达上调,而vimentin、α-SMA、NLRP3、pro-caspase-1、pro-IL-1β蛋白表达下调(P<0.05);ELISA结果显示,BMSCs-Exo可下调4.25%PDF诱导的细胞上清IL-1β、IL-18、TGF-β1的水平(P<0.05)。结论高糖PDF通过激活NLRP3炎性体信号途径诱导腹膜间皮细胞EMT,BMSCs-Exo可通过抑制该通路改善腹膜间皮细胞EMT。

RUNX1对奶牛乳腺上皮细胞间质转化的调节作用

[目的]探究Runt相关转录因子1(RUNX1)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)发生上皮细胞间质转化(EMT)的作用及机制。[方法]通过CCK-8法检测不同感染复数的热灭活金黄色葡萄球菌处理后对MAC-T细胞活力的影响;通过倒置显微镜观察经金黄色葡萄球菌处理后MAC-T细胞的形态变化。通过实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测金黄色葡萄球菌处理MAC-T细胞后,细胞中EMT标志分子(E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin))、TGF/Smad通路信号分子(TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4)和RUNX1的表达量变化情况;并比较了分别使用RUNX1和TGF-β特异性抑制剂前后细胞EMT标志分子、TGF/Smad通路信号分子和RUNX1的表达水平变化。[结果]不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理72 h后,MAC-T细胞活力较24和48 h组均极显著下降(P<0.01),通过显微镜观察发现此时细胞出现漂浮死亡现象。因此后续观察细胞形态变化时设置时间为12、24、36和48 h。当用感染复数(MOI)为100热灭活金黄色葡萄球菌处理MAC-T细胞48 h后,细胞形态由上皮细胞典型的“鹅卵石”样转变为间质细胞的“长梭状”;实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果发现,与正常细胞相比,EMT标志分子E-cadherin mRNA表达量极显著下调(P<0.01),Vimentin、α-SMA、N-cadherin、TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4和RUNX1 mRNA表达量显著或极显著上调(P<0.01);且Vimentin、α-SMA、P-Smad2和RUNX1蛋白表达量明显上调。经LY2109761抑制剂处理后,与感染组相比,2个抑制剂组MAC-T细胞中Smad2、Smad3、Smad4、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和RUNX1的mRNA表达量均极显著下调(P<0.01),E-cadherin mRNA表达量极显著上调(P<0.01);经抑制剂Ro5-3335处理后,MAC-T细胞形态未出现显著的间质细胞样变化;与感染组相比,2个抑制剂Ro5-3335组细胞中E-cadherin的mRNA表达量极显著上调(P<0.01),N-cadherin、Vimentin、α-SMA(除10μmol/L Ro5-3335抑制剂组α-SMA外)、TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad4的mRNA表达水平均极显著降低(P<0.01)。[结论]热灭活金黄色葡萄球菌处理MAC-T细胞48 h可激活TGF/Smad通路诱导MAC-T细胞发生EMT变化;RUNX1可通过介导TGF/Smad通路调节金黄色葡萄球菌诱导的MAC-T细胞EMT过程。

肝细胞生长因子(HGF)诱导肝癌Huh7细胞发生上皮间质转化(EMT)后细胞膜表面糖蛋白糖谱的变化

目的应用凝集素芯片技术寻找肝癌细胞表面转移相关的特征性糖谱。方法应用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导建立肝癌上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)细胞模型。通过凝集素芯片比较诱导前后细胞膜的糖谱改变,采用凝集素印迹和荧光细胞凝集素免疫组化方法验证芯片结果。结果诱导后细胞对凝集素ACL、BPL、JAC、MPL、PHA-E、SBA和SNA的亲和作用减弱,而对凝集素AAL、ConA、DBA、GSLⅡ、ECL、HAL、LCA、LTL、NML、NPL、PHA-L、PTLⅡ和WFL的亲和作用增强。提示诱导后肝癌细胞表面出现了黏蛋白T/Tn抗原、平分型N-乙酰葡萄糖胺、α2,6唾液酸和末端α或β连接的N-乙酰半乳糖胺结构减少;而末端和核心岩藻糖、高甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺β1,6分支和复杂型寡糖分支结构增多。结论肝癌细胞发生EMT过程中细胞膜表面糖链结构改变,提示糖链结构与肝癌的转移密切相关,为有效控制肝癌转移、改善预后提供了新思路。

鞣花酸调控Nrf2和NLRP3通路影响TGF-β所致AML-12细胞EMT的作用

研究了鞣花酸(EA)对TGF-β所致小鼠AML-12正常肝细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其可能机制.通过细胞活力评价、细胞形态观察和细胞内ROS水平检测,评价了EA对TGF-β所致AML-12细胞EMT的作用.通过免疫荧光和免疫印迹检测了细胞内EMT标志蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达;免疫印迹检测了细胞内Nrf2和NLRP3通路相关因子的表达水平.结果显示:EA显著抑制了TGF-β所致AML-12细胞EMT.进一步研究表明,EA可以诱导Nrf2入核并上调其下游抗氧化基因的表达.EA还可以下调NLRP3炎症通路相关蛋白的表达.综上所述,EA对TGF-β诱导的AML-12小鼠肝细胞EMT具有抑制作用,其机制可能与调控Nrf2抗氧化通路与NLRP3炎症通路有关.

葡萄籽提取物原花青素通过LncRNA NBR2/miR-650调节EMT抑制肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨葡萄籽提取物原花青素是否通过长链非编码RNA(LncRNA)NBR2/微小RNA(miR)-650并调节上皮间充质转化(EMT)来影响肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移和侵袭。方法将肝癌细胞Hep3B分为NC组(未处理),低、中、高剂量组(给予25、50、100μg/ml葡萄籽提取物原花青素),si-NC组,si-LncRNA NBR2组,si-NC+高剂量组、si-LncRNA NBR2+高剂量组,anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,anti-miR-650+si-LncRNA NBR2+高剂量组。采用Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、EMT过程E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK)-8、Transwell法和定量RT-PCR(qRT-PCR)分析细胞增殖、迁移、侵袭与LncRNA NBR2、miR-650的表达。双荧光素酶活性检测LncRNA NBR2和miR-650的靶向结合。结果低、中、高剂量组葡萄籽提取物原花青素作用的肝癌细胞Hep3B CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量、增殖能力、迁移数量、侵袭数量、miR-650表达量均低于NC组,LncRNA NBR2表达量高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组葡萄籽提取物原花青素作用的肝癌细胞Hep3B细胞中E-Cadherin蛋白表达量高于NC组,N-Cadherin、Vimentin蛋白表达量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-LncRNA NBR2组的肝癌细胞Hep3B细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量、增殖能力、迁移和侵袭数量均比si-NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。si-LncRNA NBR2+高剂量组肝癌细胞Hep3B细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达量、增殖能力、迁移和侵袭数量均高于si-NC+高剂量组,E-Cadherin蛋白表达量低于si-NC+高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA NBR2靶向调控miR-650的表达。anti-miR-650+si-LncRNA NBR2+高剂量组肝癌细胞Hep3B CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin、Vimentin蛋白、LncRNA NBR2表达量及增殖能力、迁移和侵袭数量均低于anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,E-Cadherin蛋白表达量高于anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄籽提取物原花青素通过上调LncRNANBR2靶向下调miR-650并调节EMT,来抑制肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移和侵袭。

miR-320a-5p靶向Twist抑制肝细胞癌上皮间质转化

目的探讨miR-320a-5p调控肝细胞癌(HCC)侵袭与转移的生物学功能及其作用机制。方法采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测HCC肿瘤组织、相邻正常组织及肝癌细胞系中miR-320a-5p与癌基因Twist的表达。Pearson相关性分析miR-320a-5p与Twist表达的相关性,双荧光素酶实验证明二者靶向关系。通过CCK8增殖实验、细胞集落形成实验、Transwell、划痕实验分别检测miR-320a-5p对HCC细胞的增殖、活力、侵袭和迁移能力的影响;Western印迹检测Twist蛋白及上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达。结果miR-320a-5p在HCC组织和细胞中表达下调。而过表达miR-320a-5p可抑制HCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力及EMT趋势。miR-320a-5p可靶向抑制Twist表达。Twist在HCC肿瘤组织和细胞系中高表达,同时miR-320a-5p可逆转Twist对HCC发展的促进作用。结论miR-320a-5p可通过抑制Twist表达调控HCC细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT趋势,从而抑制HCC的发展及转移。

缺氧诱导因子和Notch信号通路在上皮间质转化(EMT)疾病间的作用机制

缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible fact,HIF)为缺氧、炎症、代谢适应和肿瘤进展之间的重要交汇点,同时也参与纤维化的进展过程。Notch信号通路是一个在进化过程中高度保守的信号通路,广泛参与细胞的增殖、分化及凋亡过程,在恶性肿瘤的侵袭与转移等过程中发挥着重要作用。缺氧诱导的上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)需要功能性的Notch信号转导驱动EMT的过程。近年研究表明,细胞缺氧反应并不是单独的反应,而是与信号机制相交,例如Notch信号传导,这是在控制干细胞维持和分化的大多数细胞类型中操作的关键调节信号传导机制。本文讨论了关于Notch信号通路与细胞缺氧反应之间的交集以及Notch信号和缺氧在EMT相关疾病中的作用机制。

小RNA在器官纤维化上皮-间质转化(EMT)中的作用

小RNA是一类长度约22-28个核苷酸的非编码小分子RNA，近年来发现其在转录后水平和翻译水平的基因调控过程中发挥重要作用。上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程，它在生理和病理过程中发挥了重要作用。近年来发现小RNA在各种器官纤维化的EMT过程中也起了重要作用。本文就小RNA在器官纤维化EMT过程中的作用作一综述，以期为器官纤维化疾病的治疗提供新的思路。

上皮-间质转化(EMT)在上皮性卵巢癌的作用

上皮-间质转化(EMT)将良性肿瘤转化为具有侵袭性和转移性肿瘤的潜在作用而受到广泛关注,它是一个复杂及可逆的过程,在此过程中细胞表型、功能及大量分子表达发生变化。EMT是正常胚胎发育所必需的生理过程。然而,在病理情况下,这种转变可能是变态的,且有文献报道,EMT在上皮性肿瘤的发生、侵袭及转移过程起关键作用。它涉及多个信号通路和复杂的分子机制,本文对EMT多个信号通路及相关转录因子(ZEB1、KLF4)与上皮性卵巢癌的发生、发展进行综述,为上皮性卵巢癌早期诊断提供新的研究思路。

大鼠宫腔粘连(IUA)模型中的上皮间质转化(EMT)现象

目的探索宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)中的上皮间质转化(epithelial-mensenchymal transition,EMT)现象。方法 24只雌性大鼠通过机械损伤或假手术方式建立大鼠宫腔粘连(IUA-L)和对照模型(IUA-R、Sham-L、Sham-R),术后7天及28天分别取材,通过HE染色和Masson染色计算腺体数量及纤维化率,通过免疫组化CD31计算微血管密度(microvascular density,MVD),通过免疫组化E-cadherin和N-cadherin观察EMT现象,通过转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)计算炎症反应以及其与E-cadherin、N-cadherin的相关性。结果造模7天和28天后,IUA-L组腺体数量低于IUA-R组( P<0.05 );IUA-L组纤维化率高于IUA-R组和Sham-L组( P<0.001 );IUA-L组的MVD值低于IUA-R组和Sham-L组( P<0.001 );E-cadherin的7天/28天平均光密度(mean optical density,MOD)在IUA-L组(0.008 5±0.002 6)/( 0.002 8 ±0.000 5)低于IUA-R组( 0.048 9 ±0.004 8)/(0.033 2±0.003 1)和Sham-L组(0.039 2±0.003 9)/(0.035 4±0.004 7)( P<0.001 );N-cadherin的7天/28天MOD在IUA-L组(0.0546± 0.0061 )/(0.1000± 0.012 3 )高于IUA-R组(0.008 0±0.002 5)/(0.012 6±0.004 4)和Sham-L组(0.010 0± 0.003 6 )/(0.005 2±0.001 2)( P<0.01 );TGF-β1 7天/28天MOD在IUA-L组高于IUA-R组和Sham-L组( P<0.01 )。IUA-L组中,TGF-β1与N-cadherin不相关( P=0.694 ),与E-cadherin相关( r=0.288,P<0.05 )。结论大鼠发生IUA可能导致腺体数量和MVD下降,纤维化率上升,同时大鼠IUA模型中存在EMT现象。提示大鼠IUA的发生可能与EMT现象相关。

敲低lncRNA CACNA1C-AS2促进上皮间质转化增强人食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2)通过调节上皮间质转化(EMT)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CACNA1C-AS2在癌旁组织和食管癌组织的表达;实时定量PCR检测食管癌细胞中CACNA1C-AS2 mRNA表达水平;在食管癌细胞中敲低和高表达CACNA1C-AS2后,采用噻唑蓝(MTT)法和细胞集落形成实验检测细胞的活力,TranswellTM小室法检测细胞的侵袭能力和纵向迁移能力,划痕愈合实验检测细胞的横向迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot法检测神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和锌指转录因子snail 2(slug)蛋白表达。结果 CACNA1C-AS2在食管癌组织和细胞系中均低表达;敲低EC-9706细胞和Eca-109细胞中CACNA1C-AS2后,食管癌细胞的侵袭、迁移能力和细胞活力显著增强,细胞凋亡减少;N-cadherin、vimentin和slug表达上调。过表达CACNA1C-AS2则结果相反。结论 CACNA1C-AS2通过促进EMT增强食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

敲低错配修复基因MSH6抑制结直肠癌细胞上皮间充质转化及其增殖

目的:探究错配修复基因MSH6对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及可能发生的机制。方法:根据美国国家生物信息技术中心(NCBI)中MSH6的基因序列构建靶向敲低MSH6的序列shMSH6-1、shMSH6-2和shMSH6-3,采用细胞转染技术敲低结直肠癌细胞中MSH6的表达,通过实时荧光定量PCR检测敲低效率并进行慢病毒包装,应用Western blot在细胞系中筛选MSH6高表达细胞系进行后续实验,应用CCK8检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,伤口愈合和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot方法检测上皮间充质相关蛋白的表达变化。结果:MSH6在结直肠癌细胞系中表达上调,其中RKO、SW620、LOVO细胞系上调明显,敲低MSH6明显限制了结直肠肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,同时导致E-cadherin蛋白水平增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达下降。结论:MSH6在结直肠癌中表达上调,敲低MSH6可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞发生凋亡并能够逆转EMT的发生。

p38MAPK及EMT在食管腺癌中的研究进展

p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径参与恶性肿瘤的快速增殖、迁移及凋亡过程。研究证实食管腺癌(EAC)的发生、发展与MAPK信号转导通路密切相关〔1〕。上皮间质转化(EMT)在肿瘤侵袭和转移过程中扮演重要角色,可以作为监测肿瘤形成和发展的生物标志物,在食管癌的浸润和转移中发挥重要作用,与患者的预后密切相关。本文对p38MAPK信号通路及EMT在EAC中的研究进展进行综述。