目的添加转化生长因子-β1（TGF-β1）以及与内脏内胚层样END-2细胞共培养，定向诱导胚胎干细胞（ESCs）分化，探索联合使用化学诱导法与共培养法对ESCs的心肌细胞定向诱导分化作用。方法将ESCs悬浮培养形成2—3d类胚体（EBs），再向培...目的添加转化生长因子-β1（TGF-β1）以及与内脏内胚层样END-2细胞共培养，定向诱导胚胎干细胞（ESCs）分化，探索联合使用化学诱导法与共培养法对ESCs的心肌细胞定向诱导分化作用。方法将ESCs悬浮培养形成2—3d类胚体（EBs），再向培养液内添加TGF-β1，或（和）将2—3 d EBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养。自然分化为对照组。免疫荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白（α-actin）及肌钙蛋白T（TnT）的表达，透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。结果向培养液添加TGF-β1或将2—3dEBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养，各自有（43±2．08）％（P〈0．01），（69±3．61）％（P〈0．01），（65±3．06）％（P〈0．01）的EBs出现自发节律性收缩，均表达心肌细胞特异性蛋白α-Actin和TnT，观察到心肌样超微结构。自然分化组发生自发节律性收缩的EBs只有（12±1．53）％，尤其是联合使用两种诱导方法，自发性收缩的EBs高达（91±1．52）％（P〈0．01），收缩区域较单一诱导组大，且细胞形态较单一。结论联合使用化学诱导和共培养2种诱导法对ESCs的心肌细胞定向分化有协同作用。展开更多
文摘目的添加转化生长因子-β1（TGF-β1）以及与内脏内胚层样END-2细胞共培养，定向诱导胚胎干细胞（ESCs）分化，探索联合使用化学诱导法与共培养法对ESCs的心肌细胞定向诱导分化作用。方法将ESCs悬浮培养形成2—3d类胚体（EBs），再向培养液内添加TGF-β1，或（和）将2—3 d EBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养。自然分化为对照组。免疫荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白（α-actin）及肌钙蛋白T（TnT）的表达，透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。结果向培养液添加TGF-β1或将2—3dEBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养，各自有（43±2．08）％（P〈0．01），（69±3．61）％（P〈0．01），（65±3．06）％（P〈0．01）的EBs出现自发节律性收缩，均表达心肌细胞特异性蛋白α-Actin和TnT，观察到心肌样超微结构。自然分化组发生自发节律性收缩的EBs只有（12±1．53）％，尤其是联合使用两种诱导方法，自发性收缩的EBs高达（91±1．52）％（P〈0．01），收缩区域较单一诱导组大，且细胞形态较单一。结论联合使用化学诱导和共培养2种诱导法对ESCs的心肌细胞定向分化有协同作用。
