基于EnKS和SWAT模型的闽江流域径流数据同化

地表水文过程中观测变量对状态变量的响应存在时间滞后性,为提高径流数据同化的精度,以闽江流域为研究区,基于集合卡尔曼平滑器(EnKS)和SWAT模型,构建径流数据同化方案,并与集合卡尔曼滤波(EnKF)方法进行对比,评价不同同化模型的精度,分析数据同化对不同径流分量的影响。结果表明:EnKS最优时间窗口长度在不同水文周期、流域存在差异;考虑水文模型的时间滞后性可以有效提高模型的同化精度,对比EnKF方法,EnKS方法的纳什效率系数(NSE)在七里街、沙县、竹岐3个站点上分别提升了0.03、0.12、0.03,均方根误差(RMSE)分别减小了7.43%、26.81%、4.25%;数据同化方法对不同径流分量的改进程度存在空间异质性和时间异质性,在高渗透率土壤和陡坡区域EnKS方法能使壤中流获得更显著的改进,丰水期EnKS方法对地表径流的改进较枯水期更明显。

人Enk基因逆转录病毒包装细胞系的建立

目前治疗慢性疼痛、癌痛的常用药物仍是阿片类药。由于其副作用及不良反应较多，限制了它在临床上的应用，因此国内外都在寻求新的有效镇痛方法。脑啡肽是一种内源性阿片肽，通过作用于8和μ阿片受体而发挥镇痛效应。目前关于应用质粒载体及单纯疱疹病毒载体转脑啡肽基因镇痛的动物实验已广泛开展，但用逆病毒载体转导脑啡肽基因，国内外均未见报道。本研究构建了人脑啡肽基因逆转录病毒载体pLNCX2-Enk，并筛选出了高滴度缺陷性逆转录病毒的产毒细胞系，该产病毒细胞系产生的病毒，为疼痛基因治疗的实验研究奠定了基础。

阿片生长因子Met-ENK对多种肿瘤细胞的生长抑制作用研究

目的:研究阿片生长因子Met-ENK(methionine enkephalin,Met-ENK)对多种肿瘤细胞的抑制作用,分析其对不同肿瘤细胞系的抑制作用差异性及特点。方法:采用CCK-8法考察不同浓度Met-ENK对SH-SY5Y细胞的增殖抑制活性;采用细胞计数法计数相同浓度Met-ENK作用下,SHSY5Y细胞随时间的生长曲线;采用CCK-8法检测不同浓度的Met-ENK对8种不同的肿瘤细胞系细胞的抑制作用。结果:不同浓度的Met-ENK对SH-SY5Y细胞具有不同的抑制作用,IC50为5.1×10^(-5)mol/L;Met-ENK作用后SH-SY5Y在48 h生长抑制明显(P<0.01);不同浓度的MetENK对8种不同的肿瘤细胞系细胞均有抑制作用,其中对SMCC-7721抑制作用最为明显。结论:Met-ENK具有广谱抗肿瘤作用,但抑制强度不同,具有时间依赖性,其对8种不同的肿瘤细胞系细胞均有不同强度的抑制作用。

电针足三里穴对大鼠小肠ENK能神经的影响及针效传出途径的研究

电针大鼠双侧足三里穴50min后，小肠壁神经结构(粘膜下神经丛和肌间神经丛)内脑啡肽免疫反应性(ENK-IR)明显降低。这说明电针可激活小肠ENK能神经元，引起ENK的释放，这可能是电针调整胃肠功能的机制之一。而这一作用可被迷走神经切断所拮抗，提示针效传出途径可能是迷走神经．

脊髓后角AchE和ENK酶组织化学及免疫组织化学联合染色法的应用

脊髓胶状质（SG）是一级传入C纤维的投射区。脑啡肽（ENK）和乙酰胆碱酯酶（AchE）在此处分布也十分丰富。与痛觉传递有关的假说及针刺镇痛的机制都涉及到胶状质的ENK能神经元可能对一级传入纤维终未产生突触前抑制作用。

He-Ne激光“穴位”照射脊髓后角SP与ENK免疫组化观察及超微结构研究

He-Ne激光照射(简称光针)大鼠“足三里”穴位后，痛阀明显升高(P<0．001)。用PAP法观察了光针作用后大鼠腰段脊髓后角P物质(SP)和脑啡肽(ENK)免疫样反应产物的强度变化，并进行了定性和定量(相对光密度)分析。实验组与对照组相比，SP-LI产物明显增强(0．005<P<0．01，ENK—LI明显减弱(0．01<P<0．05)SP—LI产物相对光密度值明显增高(P<0．001)，ENK—LI明显降低(P<0．002)。

M-Enk在猫背根节切除后脊髓Ⅱ板层的表达

目的探讨猫脊髓背根神经节切除后,甲硫胺酸脑啡肽(M-Enk)在脊髓后角Ⅱ板层内的表达变化及M-Enk异类终末。方法10只成年雄性猫,在腹腔内注射麻醉下行腰1到骶2(L1～S2)单侧脊髓背根节切除术,建立猫背根节全切模型,术后分为急性组5只,存活2周,慢性组5只,存活2个月,观察到期后,动物心内灌注固定处死,取L6节段脊髓,采用免疫组化染色方法检测手术侧和对侧脊髓Ⅱ板层内M-Enk的表达,电镜下观察M-Enk异类终末。结果光镜下M-Enk阳性染色主要分布于脊髓Ⅱ板层的外侧份,成颗粒状和线条状,急性组手术侧与对侧非手术侧阳性染色无明显差异,慢性组两侧阳性染色均减弱,手术侧约强于对照侧。电镜下,在慢性组手术侧Ⅱ板层脊髓中,观察到简单终末,发现了M-Enk阳性非典型复合终末(ACT),它们较小,外观上呈圆形或椭圆形,多与两个突触后成分形成联系,突触活性带形较平直或向外凸,突触内含均匀清亮小泡或致密核心小泡。结论M-Enk在猫脊髓背根节切除后主要在脊髓Ⅱ板层外侧表达,M-Enk阳性ACT可能是脊髓背根节全切后的一种代偿终末。

理筋手法干预对颈后肌慢性损伤家兔β-EP、ENK、5-HT动态变化的影响

目的:通过动态观察理筋手法对颈后肌慢性损伤家兔的中枢及外周疼痛调节因子β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)、脑啡肽(Enkephalin,ENK)与5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)表达的影响,探讨在家兔颈部慢性损伤形成的早中晚不同阶段,理筋手法的干预作用及其调节方式。方法:按照随机数字表将63只日本大耳白兔分为正常对照组、模型组、干预组,每组各21只。采用颈椎前屈位固定法建立家兔颈后肌慢性损伤模型,模型组、干预组家兔均采取此法造模,模型组在每天造模结束后不予任何处理。干预组在每天造模结束后给予理筋手法干预,直至60 d观察结束。正常对照组家兔不进行造模干预。每组分别在观察期的第20天(早期)、40天(中期)、60天(晚期)各处死7只家兔。通过HE染色光镜下观察颈后肌肌组织形态学变化,采用ELISA法检测各组家兔中枢(脊髓、下丘脑)β-EP与ENK和外周(颈后肌组织、血浆)中β-EP与5-HT的在各观察点处的含量。结果:HE染色光镜下,模型组及各干预组可见不同程度的肌纤维损害;ELISA检测:理筋手法干预后与模型组第20天、40天相比,干预组脊髓与下丘脑中β-EP、ENK含量有不同程度升高(P<0.05);干预组外周颈后肌组织与血浆β-EP含量升高(P<0.05),5-HT含量降低(P<0.05)。结论:通过早中晚三期的动态观察发现。理筋手法中早期干预能通过调节中枢ENK、β-EP及外周β-EP、5-HT的含量,减轻无菌性炎症对局部组织的炎症刺激,减缓机体对疼痛刺激感受,缓解慢性静力性损伤导致的疼痛。

PLDD联合射频热凝术治疗腰椎间盘突出症的疗效及对血清6-keto-PGE1α、PLA2、M-ENK水平的影响

目的探讨经皮激光椎间盘减压术(PLDD)联合射频热凝术治疗腰椎间盘突出症患者的效果。方法选取收治的90例腰椎间盘突出症患者进行前瞻性研究,收集时间2016年3月至2017年5月,采用随机数字表法分为联合组45例(PLDD联合射频热凝术治疗)、对照组45例(仅给予射频热凝术治疗)。对比两组患者治疗前1周后、治疗1个月后、治疗3个月视觉模拟评分(VAS);治疗后的临床效果、治疗前后血清6-酮前列腺素E1α(6-keto-PGE1α)、磷脂酶A2(PLA2)、M型脑钠肽(M-ENK)水平。结果治疗前,两组患者的VAS评分差异无统计学意义(P>0.05);在治疗1周后、治疗1个月后、治疗3个月后两组患者的VAS评分较本组治疗前均显著降低(P<0.05),同时联合组的VAS评分均低于同一时间点对照组(P<0.05);联合组治疗后的临床疗效评价优于对照组患者(P<0.05);治疗前,两组患者的血清6-keto-PGE1α、PLA2、M-ENK水平差异无具有统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者的血清6-keto-PGE1α、PLA2水平较本组治疗前均显著的降低(P<0.05),M-ENK较本组治疗前显著升高(P<0.05);治疗后,联合组的血清6-keto-PGE1α、PLA2水平均低于同一时间点对照组(P<0.05),M-ENK高于对照组(P<0.05)。结论 PLDD联合射频热凝术治疗腰椎间盘突出症较单用射频热凝术具有更显著的临床效果,可显著降低血清6-keto-PGE1α、PLA2水平,提高M-ENK水平。

加减归肾丸结合针刺对女性免疫性不孕患者IL-6、β-EP及ENK的影响

目的观察加减归肾丸结合针刺对女性免疫性不孕患者IL-6、β-EP和ENK的调节,以及患者妊娠率的情况。方法采用随机对照试验,将36例患者分为加减归肾丸结合针刺组和加减归肾丸组,每组各18例。加减归肾丸组采用归肾丸加减治疗,加减归肾丸结合针刺组在加减归肾丸治疗的基础上加用针刺治疗,取穴次、关元俞、肝俞、肾俞、三阴交、太冲。结果加减归肾丸结合针刺组妊娠率为38.87%,加减归肾丸组妊娠率为16.67%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。加减归肾丸结合针刺组治疗前IL-6[(429.12+123.20)pg/m L]、β-EP[(18.93+8.33)pg/m L]和ENK[(23.92+8.41)pg/m L]与治疗后IL-6[(359.13+81.71)pg/m L]、β-EP[(13.84+4.96)pg/m L]和ENK[(17.62+2.97)pg/m L]比较差异有统计学意义(P<0.05)。加减归肾丸结合针刺组治疗后IL-6[(359.13+81.71)pg/m L],与加减归肾丸组IL-6[(429.93+84.96)pg/m L]比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论加减归肾丸结合针刺治疗可通过对免疫性不孕女性神经—内分泌—免疫网络的调节,从而改善机体免疫环境,增加其妊娠机率。

海洛因依赖大鼠中脑腹侧被盖区和伏隔核内L-ENK和生长抑素表达的变化

目的:探讨海洛因依赖大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)和伏隔核(NAc)内亮氨酸脑啡肽(L-ENK)和生长抑素(SS)表达的变化及其可能的机制。方法:成年雄性SD大鼠55只,随机分为正常对照组、盐水对照组及海洛因依赖组。皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型,分别于模型建立的第10、17、24、31、38 d取脑组织,应用免疫组织化学SABC法、图像分析法检测VTA和NAc内L-ENK和SS的表达。结果:海洛因依赖组大鼠VTA和NAc中L-ENK和SS阳性细胞免疫反应明显减弱,与正常及盐水对照组比较有显著性差异(P<0.05);图像分析显示海洛因依赖组L-ENK和SS阳性细胞的平均灰度值增高(P<0.05)。结论:在海洛因依赖期间,大鼠VTA和NAc内L-ENK和SS免疫阳性物质的表达均明显减少,提示海洛因依赖对神经元的神经内分泌功能造成了损伤。

大鼠脊髓后角浅层NT、ENK、5-HT 与 SP、CGRP终末分布关系的双重免疫染色研究

应用DAB—TMB PAP免疫双重染色法研究了大鼠脊髓后角浅层内LENK、MENK、5—HT、NT免疫反应终末与SP、CGRP免疫反应终末之间的分布关系。SD大鼠以0.2％戊二醛—4％多聚甲醛液灌注固定,取脊髓腰段,按免疫细胞化学标本制备处理,震动切片30um,行免疫染色。用于双重染色的两套抗体均系来自同种族的多克隆抗体,先行第一套抗体系统反应,第一抗体为RA5-HT 1:12000,RALENK,RAMENK、RANT均为1:8000,GAR1:50,PAP1:100,DAB呈色,漂洗后即行第二套抗体系统染色反应。

猫骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布和定位投射

应用免疫组织化学和HRP与免疫组织化学双重标记的方法,对骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布及其与副交感节前神经元和向臂旁外侧核及Barrington核投射的二级传入神经元的关系进行了研究。L-ENK样神经元分布于整个“内脏面”上,尤以中间带外侧核和后连合核为密集。在中间带外侧核内,L-ENK样神经元的分布与向盆神经注入HRP后逆行标记的副交感节前神经元的分布位置重叠,能明显地划分为背侧带和外侧带。在Onuf核及其与骶髓副交感核之间的联系细胞桥上首次发现有L-ENK样神经元存在。将HRP注入盆神经结合L-ENK免疫组织化学反应,在骶髓副交感核外侧带和背侧带均发现大量HRP/L-ENK双标细胞。几乎全部HRP标记细胞均为HRP/L-ENK双标细胞,个别双标细胞出现于中间带外侧核的中间带(interband)内。将HRP注入臂旁外侧核或Barrington核结合L-ENK样免疫组织化学反应,在“内脏面”的中间带外侧核、中介核和后连合核处都发现HRP/L-ENK样双标细胞。上述结果证明猫骶髓“内脏面”、Onuf核及联系细胞桥上均有L-ENK样神经元分布,其中“内脏面”向臂旁外侧核或Barrington核投射的二级神经元有一部分含有L-ENK样活性物质,骶髓副交感核的外侧带、背侧带和中间带均有L-ENK样副交感节前神经元。

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核浅层内GABA样、L-ENK样、GlyT2样阳性末梢与Sindibis病毒转染表达GFP神经元之间的联系

应用GFP基因重组病毒标记技术和免疫荧光组织化学技术 ,在荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜下观察了大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核 (Vc)浅层内GABA样、L ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢与Sindibis病毒转染表达GFP神经元之间的联系。结果显示 :①将GFP基因重组Sindibis病毒注入一侧Vc浅层后 ,仅在同侧Vc注射部位附近的Ⅰ～Ⅲ层内观察到 4～ 8个逆标的GFP神经元 ,这些神经元的胞体为小型 (直径≤ 15 μm)圆形、梭形或不规则形 ;②Vc浅层内均可见大量的GABA样、L ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢 ,以Ⅰ和Ⅱ层分布最为密集 ;③GABA样、L ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢分别聚集于GFP标记神经元的胞体或树突周围 ,并与之形成密切接触。以上结果表明 :Vc浅层内GFP神经元可能与GABA能、L ENK能、Gly能阳性纤维和末梢形成突触联系并接受这些抑制性神经末梢的调控。

电针对退变腰椎间盘兔模型M-ENK、β-内啡肽、Netrin-1表达的影响及相关性研究

目的:观察电针对退变腰椎间盘模型兔脊髓背角中甲硫脑啡肽(M-ENK)、β-内啡肽及背根神经节中Netrin-1含量及相关性的影响,探讨电针改善盘源性腰痛的可能作用机制。方法:随机选取4只新西兰大白兔作为正常组,并随机选取12只实验兔予以轴向椎体加压诱导退变腰椎间盘模型,造模成功后随机分为模型组、电针组和假电针组,每组各4只,另随机选取4只不予轴向椎体加压处理作为假模型组。电针组取L_(4)、L_(5)双侧夹脊穴,连接电针仪治疗,疏密波,频率2/15 Hz,强度1~2 mA,20 min/次,1次/d,一疗程6次,共治疗4个疗程;假电针组针刺L_(4)、L_(5)夹脊穴夹持电针但不通电,其余操作同电针组。治疗结束后,Western blot法检测各组实验兔L_(2)脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽以及背根神经节中Netrin-1蛋白表达,直线相关分析法分析M-ENK、β-内啡肽的表达与Netrin-1之间的相关性。结果:与正常组比较,模型组退变腰椎间盘相应背根神经节中Netrin-1蛋白表达明显下降;脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组Netrin-1、M-ENK及β-内啡肽蛋白表达明显增加(P<0.05);与电针组比较,假电针组Netrin-1、M-ENK及β-内啡肽蛋白明显减少(P<0.05)。直线相关分析法Netrin-1蛋白含量与M-ENK、β-内啡肽之间均存在正相关性(R^(2)=0.66、R^(2)=0.51)。结论:电针可上调背根神经节中Netrin-1的表达,改善盘源性疼痛,其作用可能与上调脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽的表达有关。

体复康对运动性疲劳大鼠脑组织L-ENK、DYNA_(1-13)动态变化的影响

采用ABC免疫组织化学法结合图象分析 ,观察中药复方“体复康”对运动性疲劳大鼠不同脑区L ENK、DYNA1 - 1 3的动态变化。结果 :高强度长期 (共 7周 )运动的大鼠 ,安静状态下尾壳核L ENK下降 ;而在此基础上末次急性运动的大鼠 ,L ENK被迅速激活而升高。中药复方“体复康”具有调节L ENK的作用 ,表现在对急性运动中的下调 ,在对慢性运动应激中的上调。运动能激活下丘脑DYNA1 - 1 3,以运动结束后 3 0min最为明显 ;该方药在此强度下对疲劳大鼠恢复过程中的下丘脑DYNA1 - 1 3有一定的下调作用 ,但作用不甚明显。

针刀松解法对第3腰椎横突综合征模型大鼠耐痛阈及脊髓与下丘脑ENK、β-EP的影响

目的观察大鼠痛阈及下丘脑与脊髓脑啡肽(enkephalin,ENK)、β内啡肽(β-enkorphin,β-EP)的含量变化,探讨针刀松解法治疗第3腰椎横突综合征的中枢镇痛机制。方法SD大鼠,随机分为4组:正常组、模型组、电针组、针刀组,后3组首先建立第3腰椎横突综合征的动物模型,后2组造模后分别给予电针和针刀松解干预治疗。分别在9个时间点测量各组大鼠痛阈,存活28d后取大鼠下丘脑和脊髓腰段,以酶联免疫方法检测大鼠下丘脑与脊髓腰段中ENK、β-EP的含量。结果模型组大鼠痛阈降低,脊髓与下丘脑中ENK、β-EP的含量比正常组明显升高(P<0.01);针刀松解法和电针治疗组大鼠痛阈提高,脊髓与下丘脑中ENK、β-EP的含量比模型组明显降低(P<0.01),接近正常组水平,其中针刀组的含量较电针组更接近正常组(P<0.05)。结论针刀松解法与电针能提高第3腰椎横突综合征模型大鼠痛阈,并可良性调节中枢神经系统内ENK、β-EP的合成和释放,使其接近正常水平,针刀松解法的镇痛效果略优于电针治疗。

醒脑健神胶囊对实验性脑出血大鼠脑内脑啡肽（ENK）影响的实验研究

用免疫组织化学ＡＢＣ方法观察中药醒脑健神胶囊对实验性脑出血大鼠脑内脑啡肽（ＥＮＫ）的影响。结果发现，脑出血后１天、３天和７天脑内ＥＮＫ样阳性纤维及终末的密度高于正常对照组，治疗组ＥＮＫ样阳性纤维及终末的密度在脑出血后第亚天和第７天比脑出血组低，但在第３天比脑出血组高。根据前人的研究和本实验结果，我们推测ＥＮＫ可能参与了脑出血的病理生理过程。醒脑健神胶囊可调节脑内ＥＮＫ的含量，减轻脑组织的损伤，使脑出血后某些神经症状得以改善。

光谱法研究Leu-ENK与ct-DNA的相互作用

亮氨酸脑啡五肽是动物体内一种具有很强生物活性的阿片肽,在生物体内有极其重要的作用。利用紫外光谱和荧光光谱法研究了亮氨酸脑啡五肽(Leu-ENK)与小牛胸腺DNA(ct-DNA)的相互作用。研究表明,Leu-ENK-ct-DNA体系随着Leu-ENK浓度增大,体系的紫外光谱呈增色效应;随着ct-DNA浓度的增加,体系Leu-ENK的荧光逐渐猝灭;这两种方法的实验结果都表明两者的作用模式主要为嵌入结合,根据Stern-Volmer方程可知Leu-ENK-ct-DNA体系的作用属于静态猝灭。计算得到两者作用的结合常数达到2.54×104L/mol,结合位点数为1.014。

集合数据同化方法的发展与应用概述

集合数据同化方法具有简洁概念化的公式和应用起来相对容易等优点,因此,它们获得了普及性的应用;近10年来集合数据同化方法已经得到了快速的发展。综述了包括集合卡尔曼滤波(EnKF,Ensemble Kalman Filter)、集合卡尔曼平滑(EnKS,Ensemble Kalman Smoother)、集合方均根滤波(EnSRF,Ensemble Square-Root Filter)和减秩卡尔曼滤波(SEEK,Singular Evolutive Extended Kalman Filter)等集合数据同化方法的研究进展状况。通过与其它数据同化方法的对比,总结出了这些方法的特点,探讨了我国在集合数据同化方法研究中存在的问题并展望了该方法的研究和应用前景。