氟化物对体外器官培养人牙胚细胞增殖及相关调控蛋白表达的影响

目的 观察氟对牙胚细胞增殖及相关调控蛋白表达的影响。方法 采用人牙胚体外器官培养模型 ,组织学观察低浓度 (10mg·L- 1 )和高浓度 (2 5mg·L- 1 )氟对细胞增殖的影响 ;免疫组织化学及图像分析技术检测氟对细胞周期蛋白D1 (cyclinD1 )和细胞增殖核抗原 (PCNA)表达的影响。结果 氟处理组细胞增殖受抑 ,cyclinD1 和PCNA的表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 氟化物可能通过抑制cyclinD1 和PCNA的表达引起细胞增殖抑制 。

鼠牙胚的体外培养的实验观察

目的：组织学观察鼠牙胚的体外发育．方法：１７天大鼠（ＳＤ）胚胎的下颌第一磨牙置于微孔滤膜上培养，培养液为ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ，５０μｇ／ｍｌＶｉｔＣ．结果：体外牙胚可进一步发育，间质细胞分化为成牙本质细胞和形成前期牙本质．

甲状旁腺激素对体外培养的大鼠牙胚分化的影响

目的 :观察甲状旁腺激素 (parathyroidhormone ,PTH)对体外培养 17d的胎鼠下颌第一磨牙牙胚分化发育的影响 ,探讨PTH在成牙本质细胞分化和牙本质形成中的作用。方法 :器官培养、组织学观察和透射电镜观察。结果 :体外培养的牙胚可出现成牙本质细胞分化和牙本质形成。PTH可促进成牙本质细胞的分化 ,细胞分化的程度和速度均高于对照组 ;在PTH的作用下 ,细胞的超微结构观察发现细胞分化良好 ,明显处于功能活跃状态。结论 :牙胚培养在观察生长因子对牙齿发育的作用研究是有效的 ,PTH在牙齿发育中具有一定的促进作用。

氟化物作用下体外培养人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达的变化

目的 :观察不同浓度的氟化物对体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达的影响 ,从细胞内信号转导水平探讨发生氟牙症可能的细胞内机制。方法 :Trowell法体外培养人牙胚 ,用 10mg/L和2 5mg/L的氟分别刺激培养的牙胚 ,免疫组化观察结果。结果 :免疫组化结果经图像分析显示 10mg/L组从第8天 ,2 5mg/L组从第 4天开始内釉上皮细胞中Smad4的表达低于对照组。结论 :观察到 ,氟化物能抑制体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达。提示 :氟可能通过抑制Smad4分子来干扰上皮和间充质之间正常的信号转导 ,进而使釉质的分化发育受到影响。这有可能即是氟牙症发生的细胞内机制之一。

半固态培养基法培养鼠磨牙牙胚的实验观察

目的 :观察体外培养的鼠磨牙牙胚发育过程的组织学变化。方法 :用 16d胎龄的昆明小鼠下颌第一磨牙牙胚置于RPMI- 16 40半固态培养基上培养 ,常规组织学观察。结果 :体外培养的牙胚可由帽状期进入钟状期 ,出现成牙本质细胞和成釉细胞的分化及前期牙本质的形成。结论 :半固态培养基法培养牙胚可保持其发育过程。

小鼠牙胚发育无血清体外培养模型的建立

目的 :建立小鼠牙胚发育无血清体外培养模型。方法 :胎龄 17d的Balb/c胎鼠上颌第一磨牙牙胚 ,BGJb无血清半固态培养基中恒温培养 4、6、8～ 16d。终止培养后常规制备石蜡切片 ,HE及vonKossa染色。结果 :初始培养时牙胚处于帽状晚期 ,成釉器分为三层 ,紧邻基底膜的牙乳头细胞排列不规则 ,核多为圆形。体外培养 4～ 6d后 ,牙胚在体外进一步生长。培养 6d后 ,牙尖处成牙本质细胞分化为高柱状 ,并在局部分泌基质。体外培养 8d,牙胚进入钟状晚期 ,有基质带形成。培养 16d后 ,牙冠已基本形成 ,根方出现上皮隔。vonKossa染色结果显示 :培养 10d后 ,牙胚基质带出现阳性着色。结论 :建立了小鼠磨牙发育无血清体外培养模型 ,该模型在体外真实地再现了成牙本质细胞、成釉细胞的分化和基质分泌、矿化等生理过程 。

氟对体外培养人牙胚细胞增殖的影响

目的 通过观察氟(F^-)对牙胚细胞增殖及相关调控蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发生机制。方法 采用人牙胚体外器官培养模型,组织学观察低浓度(10mg/L)和高浓度(25mg/L)F^-对细胞增殖的影响,免疫组化及图像分析技术检测F对细胞周期蛋白(Cyclin)D1和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果 F^-处理组细胞增殖受抑,Cyclin D1和PCNA的表达显著降低(P<0.01)。结论 F^-可能通过抑制Cyclin D1和PCNA的表达引起细胞增殖的抑制,导致牙胚发育异常。

人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论

发育后期牙胚的体外培养

目的:观察大鼠发育后期牙胚在体外器官培养条件下的生长情况。方法:分离出生后7～8d的大鼠磨牙完整牙胚,进行体外器官培养,组织学观察牙胚发育情况。结果:体外培养的前12d,牙胚维持了原本的形态和结构,但没有进一步发育,随后牙胚发生萎缩。结论:发育后期的牙胚可在体外进行短期培养,但不能继续发育。

cbfa1反义核酸对体外培养小鼠牙胚发育的影响

目的采用反义核酸技术,用特异的、与cbfa1mRNA互补的AS-ODN,抑制cbfa1在体外培养牙胚的翻译,观察它对牙齿发育及矿化的影响,探讨其在牙齿发育中的作用。方法设计合成cbfa1反义核酸,应用所建立的牙胚体外培养体系,用光镜和电镜观察小鼠牙胚被cbfa1反义核酸阻断表达后发育的情况。结果在缺乏cbfa1情况下,与对照组相比,实验组牙胚在体外虽然可以继续生长发育至钟状晚期,但形成的基质较薄,且基质中胶原纤维排列稀疏,粗细不等,方向杂乱。此外,成釉细胞与成牙本质细胞的发育均显幼稚。结论cbfa1可能不仅仅参与了牙齿的矿化,还在成牙本质细胞和成釉细胞的分化中起重要的作用。

L型钙离子通道在体外鼠牙胚发育中的表达

目的观察L型钙离子通道在体外培养的牙胚发育过程中表达的时空特异性。方法取20只18 d胎龄的ICR孕鼠下颌第一磨牙牙胚,用Trowell培养系统进行培养。分别培养4 d、7 d,用小鼠抗Cav1.1单克隆抗体、兔抗Cav 1.2、Cav 1.3、Cav 1.4多克隆抗体进行免疫组织化学染色,光镜下观察在小鼠牙胚发育的不同阶段L型钙离子通道各种亚型的表达情况。结果 Cav 1.2和Cav 1.3在E 18 d、培养4 d、培养7 d时在不同的部位都有表达,但表达的强弱不同。未见有Cav 1.1和Cav 1.4的表达。结论 L型钙离子通道在牙胚发育过程中的表达具有时空特异性。

体外器官培养人牙胚的实验观察

目的 建立人牙胚发育的体外器官培养模型。方法 将3.5个月胎龄人胚胎的乳牙牙胚置于微孔滤膜上利用BGJb培养基培养,常规组织学观察。结果 人乳牙牙胚在体外培养期间继续发育,牙齿形成细胞(成釉细胞和成牙本质细胞)分化程度进—步提高。结论 这种培养条件可以保持人牙胚的体外发育。

氟对体外器官培养的人牙胚凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响

目的 通过研究氟对凋亡抑制基因Bc1-2表达的影响,探讨氟在牙釉质发育中的作用机制。方法 采用体外牙胚器官培养方法及免疫组化技术,研究低浓度(10μg·L^(-1))和高浓度(25μg·L^(-1))氟对分泌前期的造釉器Bc1-2蛋白表达的影响。结果 氟处理组Bc1-2蛋白的表达明显减弱,氟对分泌前期的造釉器Bc1-2蛋白的表达具有显著抑制作用。结论 氟可能通过影响抗凋亡基因的表达而诱导凋亡的发生,导致牙齿发育异常。

过量氟对体外培养小鼠磨牙牙胚发育的影响

目的:建立小鼠牙胚发育的体外培养模型 ,初步研究过量氟对小鼠牙胚发育的影响。方法 :取胎龄 18dBAL B/ c小鼠牙胚 ,在 96孔培养板 BGJb半固体培养基标准环境下培养 5 d和 10 d,HE染色 ,观察牙胚发育形态 ,并初步研究 5 .0× 10 - 6 g/ L 氟对体外牙胚发育的影响。结果:牙胚在体外继续发育 ,牙尖形成明显 ,内釉上皮细胞和成牙本质细胞极化 ,分泌基质。氟干预组牙胚发育与对照组相似 ,但部分区域成牙本质细胞极化不明显 ,基质分泌明显少于对照组。 结论 :小鼠牙胚在 BGJb半固体培养基生长良好 ,为研究氟对牙胚损伤提供良好模型。

乙酰基亚硝基脲对体外培养小鼠牙胚的作用研究

目的 :观察化学致畸、致癌物乙酰基亚硝基脲 (ethylnitrosourea ,ENU)对体外培养牙胚发育、分化的影响。方法 :通过体外牙胚器官培养模型观察培养液中不同浓度的ENU对 1 7天胎龄的小鼠下颌第一磨牙牙胚形态发育的影响。结果 :牙胚培养 6天后 ,在含 1 0 %小牛血清的BGJb培养液中 ,牙胚的内釉上皮细胞分化为成釉细胞并分泌牙釉质基质 ,而其下方的牙乳头细胞分化为成牙本质细胞并分泌前期牙本质。当BGJb培养液中含 0 0 2 5 %ENU时 ,牙胚成釉器的星网层发生液化、囊性变。当BGJb培养液中含 0 0 5 %ENU时 ,牙胚发育受到抑制 ,其完整性被破坏 ,部分细胞溶解坏死。结论 :一定量的ENU可使发育中的牙胚发生囊肿样变 。

小鼠牙胚发育在下颌弓培养模型中的动态观察

目的 :建立研究牙胚发生、早期发育的研究模型。方法 :取 11dpc胎鼠下颌弓 ,用Trowell培养系统进行培养。培养 1、3、5、7、9、11d后进行常规HE染色 ,观察牙胚的发生发育过程。结果 :下颌弓生长良好 ,可动态地观察到牙胚发生以及发育至帽状期的过程。结论

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的鼠牙乳头组织的影响

目的观察牛血浆纤维粘连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）对牙乳头组织及细胞的作用。方法对大鼠牙乳头和牙胚组织进行器官培养，实验组将微孔滤膜用８０ｍｇ／ＬＦＮ液浸润２ｈ，然后将牙乳头组织置薄膜上培养３、６天，同时设对照组，牙胚培养３、６、９天，常规组织学染色。结果牙胚在体外可有成牙本质细胞分化和前期牙本质的形成。实验组于牙乳头组织和滤膜交界处出现极化细胞，而对照组则未出现上述现象。结论ＦＮ参与了成牙本质细胞的极化过程。

cbfa1反义核酸对体外培养小鼠牙胚发育与矿化的影响

目的:采用反义核酸技术,用特异的与cbfa1mRNA互补的AS ODN抑制cbfa1在体外培养牙胚的翻译,利用电镜及ALP、OC等指标观察其对牙齿发育及矿化的影响,探讨其在牙齿发育中的作用。方法:设计合成cbfa1反义核酸,应用所建立的牙胚体外培养系统,用电镜观察小鼠牙胚被cbfa1反义核酸阻断表达后发育的情况,并且检测ALP、OC表达量的变化。结果:在缺乏cbfa1的情况下,与对照组相比,形成的基质较薄,且基质中胶原纤维排列稀疏,粗细不等,方向杂乱,ALP、OC表达量均有明显变化。结论:cbfa1可能是通过调控ALP和OC等靶基因的表达参与了牙齿发育矿化过程。