病猪肺组织中PRRSV抗原免疫组织化学Envision法的原位检测

为探讨肺组织中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原的定位诊断方法,制备了兔抗PRRSV抗体,采用免疫组织化学Envision法对疑似PRRS病猪肺组织中的病毒抗原进行了定位和半定量检测。SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,制得的兔抗PRRSV IgG纯度较高,具有良好的特异性,可用于原位检测病猪肺组织中PRRSV抗原的分布;Envision法的检测结果显示,PRRSV抗原的阳性表达产物主要出现在肺巨噬细胞胞浆内,其次为肺泡上皮细胞和细支气管黏膜上皮细胞;通过对5份经RT-PCR检测确认的PRRS病猪肺组织进行检测,均有较高的阳性细胞表达,平均阳性细胞率为46.5%。证明Envi-sion法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可用于肺组织中PRRSV抗原的快速检测。

Envision法与LSAB法在免疫组化染色中的对比观察

目的 :对目前免疫组织化学染色中应用最为广泛的Envision二步法与LSAB三步法进行比较。方法 :将本科常规肿瘤活检标本固定 ,脱水 ,石蜡包埋 ,切片 ,分别应用CK、Envision法和LSAB法进行相应的 30多种不同单克隆 /多克隆抗体免疫组化染色。结果 :两种方法特异性强 ,阳性定位准确 ,无差异。Envision法敏感度及阳性强度均优于LSAB法 ,操作更为简便 ,更省时 ,背景清晰 ,非特异性染色少 ,缺点是试剂盒在价格上略高于LSAB法。结论 :Envision二步法特别适合于快速临床病理诊断 。

免疫组化Envision法检测肺组织中猪圆环病毒抗原的研究

为了对猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的早期诊断、临床诊断和流行病学调查提供技术支持,本试验制备了兔抗PCV2多克隆抗体,采用免疫组织化学Envision二步法对30例疑似PCV2病猪肺组织的病毒抗原进行定位、半定量检测。结果表明,试验制备的兔抗PCV2抗体具有高纯度和良好的特异性;Envision法可原位检测病猪肺组织PCV2抗原的分布,其抗原的阳性表达主要出现在肺巨噬细胞胞浆内;依据阳性细胞百分率,进行染色结果判断,检出阳性病猪16例,阳性检出率为53.37%。实验证明Envision法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可在兽医病理诊断中推广应用。

Envision法免疫组织化学染色研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor，VEGI)的抗肿瘤活性及其机制。方法：用重组人可溶性VEGI治疗荷S180肉瘤小鼠；第VIII因子相关抗原(FVIII RAg)标记肿瘤血管内皮细胞，用免疫组化Envision法检测瘤内微血管密度。结果：重组人可溶性VEGI显著抑制S180肉瘤生长，肿瘤微血管密度大大减低。结论：VEGI具有较强的抗肿瘤活性，其机制可能是通过抗新生血管形成介导的。

免疫组化Envision法CD34染色在不同病变胃粘膜、组织中价值研究

目的探讨用免疫组化Envision法显示CD34在不同病变胃粘膜组织中的价值研究。方法 取临床病理标本,分慢性胃炎56例、慢性萎缩性胃炎50例、肠化生59例、不典型增生61例;无淋巴结转移胃癌组织55例,有淋巴结转移胃癌组织57例。用免疫组织化学Envision法显示各组CD34表达情况,用高倍显微镜观察微血管形态结构并测量微血管密度。结果显微镜下CD34染色阳性呈棕黄色,背景清晰;常表现为分支状、窦隙状、芽孢状、椭圆形、圆形及不规则形等。不同病变胃粘膜组织CD34表现不一,按微血管密度计算:慢性胃炎组为13.17±10.12;慢性萎缩性胃炎组为11.32±7.20;肠化生组为13.19±8.77;不典型增生组为16.58±10.49;无淋巴转移胃癌组为26.72±10.84;有淋巴转移胃癌组为27.69±10.21。微血管密度(MVD)在慢性胃炎组、萎缩性胃炎组、肠化生组组间无差异(>0.05);萎缩性胃炎组、肠化生组、不典型增生组组间无差异(>0.05);慢性胃炎组与不典型增生组有差异(<0.05);慢性胃炎、萎缩性胃炎、肠化生、不典型增生各组与无淋巴转移胃癌组织、有淋巴转移胃癌组织组组间均有显著差异(<0.05);在胃癌组中,无淋巴转移胃癌组织与有淋巴转移胃癌组织组间无差异(>0.05),其组织学病理程度高中分化组、与低分化组间也无差异(>0.05)。结论免疫组化Envision法显示CD34,方法简便,效果稳定,易分辨,可定量分析,是研究微血管变化的良好方法,对胃癌发生发展过程中微血管定量研究具有重要价值,为胃癌诊治提供了参考依据。

介绍一种改良的免疫组化EnVision法操作流程

目前，免疫组化检测法的应用日益广泛，可以用来辅助诊断、指导治疗、评估预后等。免疫组化检测方法多种多样，如ABC、SP、SAP、EnVision法等。本文采用改良的EnVision法，检测500项免疫组化标记，结果较为稳定，现将方法介绍如下。

微波Envision免疫组化技术的研究与应用

本文应用微波Ｅｎｖｉｓｉｏｎ两步法，选用２４种单克隆和多克隆抗体，对相应的良、恶性肿瘤进行免疫组化标记，并与标准Ｅｎｖｉｓｉｏｎ法、微波ＡＢＣ、ＬＳＡＢ和ＳＰ法进行对照。结果显示：微波Ｅｎｖｉｓｉｏｎ法敏感性最高，其次为ＬＳＡＢ和ＳＰ法。因此认为，微波Ｅｎｖｉｓｉｏｎ技术是一种更快速、高敏感、低背景、操作简便的新方法，具有广泛推广使用的价值。

Survivin、Endoglin蛋白表达与乳腺癌血管生成

目的:探讨乳腺癌中Survivin,Endoglin蛋白表达与乳腺癌血管生成的相关性。方法:通过免疫组化En-Vision法,检测Survivin,Endoglin在100例乳腺癌组织、30例乳腺增生组织、56例正常乳腺组织中的表达。结果:Survivin在正常乳腺组织、乳腺增生组织及乳腺癌组织中的阳性率分别为3.6%、6.7%、76.0%,后者的阳性率明显高于前两者(P<0.005);Survivin表达在有淋巴结转移的乳腺癌中明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Survivin蛋白的表达在乳腺癌高、中、低分化组织中依次上调,低分化、中分化乳腺癌组织中阳性率较高分化显著升高,差异有显著性(P<0.01);Endoglin在正常乳腺组织、乳腺增生组织及乳腺癌组织中的阳性率分别为0、3.33%、53.0%,后者的阳性率明显高于前两者(P<0.05);Endoglin在有淋巴结转移的乳腺癌中表达明显升高(P<0.05);Survivin、Endoglin表达阳性组中MVD均显著高于表达阴性组(P<0.05);Survivin表达与Endoglin表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:Sur-vivin与Endoglin在乳腺癌组织中表达上调,二者在乳腺癌的发生发展及肿瘤血管生成过程中发挥协同作用。

中肺合剂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织血管生成的影响

目的:观察中肺合剂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织血管生成的影响。方法:取C57BL/6小鼠50只,接种Lewis肺癌瘤株后,随机分阴性对照组(0.9%生理盐水),中肺合剂低、中、高剂量组(12.7、25.4、50.8g.kg-1),阳性对照组(CTX组,30mg.kg-1),每组10只。观察12天停药。无菌条件下取肿瘤组织,采用EnVision法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)和CD34蛋白的表达情况,并计数微血管密度(MVD)。结果:中肺合剂能降低肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD),VEGF表达和MVD之间呈正相关(P<0.01)。其中以中、高给药剂量组抑制作用显著,与生理盐水组相比有显著差异(P<0.01)。低剂量组与生理盐水组相比无显著差异(P>0.05)。结论:中肺合剂能抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤组织新生血管的形成,降低Lewis肺癌小鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD),以中、高剂量组最明显。

EGFR在女性非小细胞肺癌中的表达及临床意义

背景与目的:近年来女性肺癌发病率的明显增加引起人们的关注。本研究主要是以女性非小细胞肺癌为研究对象,探讨表皮生长因子受体(epidermal growth fator receptor,EGFR)在女性非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)中的表达及其与女性NSCLC发生、发展及预后的关系,指导女性非小细胞肺癌的靶向治疗。方法:回顾性分析62例女性非小细胞肺癌手术病例临床病理资料及随访资料,用免疫组化的方法检测EGFR在女性非小细胞肺癌组织中的表达,对比分析10例非恶性肺组织中EGFR的表达,用Cox模型进行生存分析。结果:EG-FR在62例女性NSCLC中的表达率70.97%,在非恶性肺组织中均呈阴性表达,两者比较差异有显著性(P<0.05);EGFR在女性腺癌的表达高于鳞癌(P<0.05),尤其在细支气管肺泡癌中的表达更高(P<0.05);EGFR表达与女性NSCLC的TNM分期及淋巴结转移呈显著正相关(P<0.05);EGFR高表达的女性患者生存期短、预后差(P<0.05);Cox比例风险模型分析表明,患者术后生存时间与病理类型、淋巴结是否转移显著相关(P<0.05),腺癌、有淋巴结转移是患者独立的不良预后因素。结论:女性NSCLC中EGFR的表达与患者病理类型、TNM分期及淋巴结转移有密切的关系,EGFR在女性NSCLC中高表达,可作为判断女性NSCLC病情进展及预后的重要指标,还对NSCLC女性患者的靶向治疗的选择有一定的指导意义。

中肺合剂对小鼠Lewis肺癌肿瘤组织Survivin Caspase-3表达的影响

目的:观察中肺合剂对小鼠Lewis肺癌肿瘤组织survivin、caspase-3基因表达的影响。方法:取C57BL/6小鼠50只,接种Lewis肺癌瘤株后,随机分阴性对照组(0.9%生理盐水),中肺合剂低、中、高剂量组(12.7g·kg-1、25.4g·kg-1、50.8g·kg-1),阳性对照组(环磷酰胺组,30mg·kg-1),每组10只。观察12天停药。无菌条件下取肿瘤组织,采用EnVision免疫组化方法测定中肺合剂对小鼠Lewis肺癌组织survivin、caspase-3蛋白表达的影响。结果:中肺合剂低、中、高给药组能不同程度下调Lewis肺癌小鼠肿瘤组织survivin蛋白的表达并上调caspase-3蛋白的表达,且均以中剂量组最显著,与生理盐水组相比统计学上有非常显著差异(P<0.01)。结论:中肺合剂可通过下调survivin表达和上调caspase-3表达,从而促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤组织生长。

益气复生方对胃癌组织中STAT3及HIF-1表达的影响

目的观察益气复生方对胃癌组织中STAT3及HIF-1表达的影响。方法取2015年1月~2016年7月医院进行实验的BALB/c小鼠60只,建立BALB/c小鼠胃癌抑制瘤模型,根据处理方法不同分为对照1组、对照2组和观察组,每组20只。对照1组不进行任何处理,对照2组给予5-氟尿嘧啶注射液,观察组给予益气复生方。14 d后处死小鼠,采用免疫组织化学Envision法检测3组小鼠胃癌组织中STAT3的表达水平,免疫组织化学SP法检测3组小鼠胃癌组织中HIF-1的表达水平;对肿瘤组织进行HE染色,分析益气复生方对胃癌组织中STAT3及HIF-1表达水平的影响。结果观察组小鼠胃癌组织中STAT3及HIF-1的表达水平显著低于对照2组和对照1组(P<0.05);对照2组小鼠胃癌组织中STAT3及HIF-1的表达水平显著低于对照1组(P<0.05)。观察组小鼠STAT3及HIF-1的表达阳性率显著高于对照2组和对照1组(P<0.05);对照2组小鼠STAT3及HIF-1的表达阳性率显著高于对照1组(P<0.05)。免疫组化结果显示,3组小鼠均存在STAT3的阳性表达,表达量从低到高依次为观察组、对照2组、对照1组;观察组与对照2组HIF-1表达的差异无统计学意义(P>0.05),对照1组HIF-1表达相对较高。观察组肠黏膜绒毛轻度破坏,排列相对整齐,治疗后有所恢复;对照1组和对照2组肠黏膜绒毛完整性被破坏,部分绒毛坏死脱落、稀疏,排列紊乱。结论益气复生方可降低胃癌组织中STAT3的表达水平,抑制HIF-1的表达。

Envision免疫组化技术在诊断猪繁殖与呼吸综合征中的应用

为探讨免疫组织化学Envision法在诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)中应用的可行性,采用免疫组织化学Envision二步法对30例疑似PRRS病猪肺组织的病毒抗原进行定位、半定量检测。结果表明,Envision法可原位检测病猪肺组织PRRSV抗原的分布;其抗原的阳性表达主要出现在肺巨噬细胞胞浆内,其次为肺泡上皮细胞和细支气管黏膜上皮细胞。依据阳性细胞百分率,进行染色结果判断,检出阳性病猪23例,阳性检出率为76.7%。试验证明,Envision法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可在PRRS诊断中推广应用。

EGFR在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与NSCLC发生、发展及预后的关系,指导非小细胞肺癌的靶向治疗。方法:回顾性分析82例NSCLC手术病例临床病理资料及随访资料,用免疫组化(EnVision法)的方法观察EGFR在非小细胞肺癌组织中的表达,对比分析20例非恶性肺组织中EGFR的表达。结果:EGFR在NSCLC中的表达率为53.66%,在非恶性肺组织中EGFR均呈阴性表达;EGFR在NSCLC中的表达与患者的性别、病理类型、TNM分期及淋巴结转移有显著统计学意义(P<0.05);EGFR高表达者生存期短。结论:EGFR在NSCLC中高表达;女性患者高于男性,并且与患者的病理类型、TNM分期及淋巴结转移有密切的关系,可作为判断NSCLC患者病情进展及预后的重要指标,还可以指导NSCLC患者的靶向治疗。

AZT对大鼠种植性肝癌细胞凋亡及bax蛋白和PCNA表达影响的研究

目的:观测端粒酶抑制剂3’-叠氮-3’-脱氧胸腺核苷(AZT)对大鼠种植性肝癌组织细胞凋亡及bax蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。材料和方法:对Walker-256荷瘤大鼠行直视下瘤内注射AZT6天后观测肿瘤细胞凋亡率并采用免疫组化EnVision法检测肿瘤组织中bax蛋白及PC-NA的表达,并与对照组进行对照。结果:AZT组及对照组肿瘤细胞凋亡率分别为(12.439±0.802)%、(3.903±0.182)%,AZT组明显高于对照组(P<0.05);对照组bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率分别为(16.851±10.064)%和(54.234±24.589)%,AZT组bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率为(39.279±17.041)%和(27.278±13.961)%,经AZT处理后bax蛋白表达被明显调高(P<0.05),PCNA表达明显降低(P<0.05)。结论:AZT能调高大鼠walker-256肿瘤组织bax蛋白的表达,抑制PCNA表达,促进肿瘤细胞凋亡。

直肠癌病理和分子生物特征与预后的多因素分析

目的:探讨直肠癌临床病理特征和生物学因素与预后的关系方法:143例直肠癌患者,青年组31例,中年组60例, 老年组52例,中高分化腺癌101例,其他42例,低于C期的67例,淋巴结转移31例,应用EnVision法分析切片P16ink4a、P53、PCNA和PKC-α的表达,单因素和多因素分析其对预后的影响. 结果:各年龄组5 a生存率分别为56.5%,61.4%和59.4%.单因素分析,预后与病理类型(x2=18.994,P=0.002)、淋巴结转移情况(x2=13.311,P=0.021)、临床病理分期(x2=17.075,P=0.004)及年龄(x2=11.249,P=0.047)均有显著相关;与P16ink4a的表达缺失(x2=15.179,P=0.01)、突变型P53的过度表达(x2=28.185,P<0.001)显著相关. COX模型分析显示,临床病理类型、病理分期、P1Cink4a的表达缺失、突变型P53的过度表达是独立预后因素,P值分别为0.029,0.028,<0.001和<0.001,风险比分别为1.982, 2.049,0.219和4.175. 结论:直肠癌病理类型、病理分期和P16ink4a、P53是重要的预后指标,可以指导直肠癌患者术后个体化治疗.

人胚胎发育中胰腺细胞的增殖变化

目的:探索人胚胎发育过程中胰腺细胞增殖水平。方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测30例人胚胎胰腺组织PCNA的表达。结果:各胎龄段胰腺外分泌细胞PCNA的阳性表达均显著高于内分泌细胞,胚胎发育早期阶段(9～14w)外分泌细胞PCNA的阳性表达明显高于其它胎龄,胚胎发育晚期阶段(29～37w)内分泌部PCNA阳性率高于其它胎龄组。结论:在胚胎发育过程中胰腺外分泌部细胞增殖水平高于内分泌部,随着胎龄的变化,胰腺内、外分泌细胞的增殖水平也发生了变化。

眼眶原发性粘膜相关淋巴组织淋巴瘤4例分析

目的:分析眼眶原发性粘膜相关淋巴组织淋巴瘤4例临床病理特点及误诊原因。方法:双上睑1例确诊后化疗3次效果欠佳,左眼下眶1例行眶内容物摘除术,右上睑1例行肿块局部切除,疗效良好,双侧外眦1例,术后未做放疗。病理切片用Envision法免疫组化染色,并与正常淋巴组织对照。结果:临床影像为眼眶的无边界、形态不规则、密度不均匀的肿块。病理表现为相对单一性的中心细胞样淋巴细胞增生。结论:眼眶粘膜相关淋巴组织淋巴瘤是眼眶淋巴组织增生的一个阶段,对该病认识不足极易误诊。病检随访观察是减少误诊的关键。

丙型肝炎病毒核心蛋白、Bcl-2、P21^(waf1)在丙型肝炎中的表达及相互关系

目的 调查丙型肝炎、肝硬化病人组织中的丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白、P2 1、Bcl 2的表达以及相互间关系 ,探讨HCV核心蛋白是否抑制P2 1和促进Bcl 2表达。方法 收集 2 3例HCV表达阳性的肝炎、肝硬化组织 ,采用免疫组化Envision法检测核心蛋白、P2 1、Bcl 2表达 ,并用统计学方法分析三者间的表达关系。结果 HCV核心蛋白和突变P2 1的阳性表达主要位于细胞核中 ,Bcl 2的阳性表达主要位于细胞质 ;HCV核心蛋白表达阳性组织中 ,P2 1阳性表达率仅 13 % ,Bcl 2阳性表达率则达 95 .7% ,三组间比较差异有显著性 (P =0 .0 12 )。HCV核心蛋白和Bcl 2二组间比较差异无显著性 (P =0 .5 61) ;HCV核心蛋白与Bcl 2、p2 1阳性强度两者间P值分别为 0 .0 12和 0 .2。结论 三种蛋白的表达有相关性 ,HCV核心蛋白可能促进Bcl 2蛋白的表达 ,抑制P2