艳山姜挥发油调控p62/Keap1/Nrf2信号改善糖尿病小鼠胰腺损伤

目的探讨艳山姜挥发油(essential oils from Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对2型糖尿病小鼠胰腺损伤的保护作用及作用机制。方法高糖高脂(HFS)饲料饲养C57 BL/6小鼠形成胰岛素抵抗,腹腔注射链脲佐菌素(STZ,120 mg·kg^(-1))建立2型糖尿病小鼠模型,将糖尿病小鼠随机分成糖尿病组(DM)、DM+EOFAZ低剂量组(90 mg·kg^(-1))、DM+EOFA高剂量组(180 mg·kg^(-1))、DM+二甲双胍组(250 mg·kg^(-1)),另取健康小鼠随机分为正常对照组、EOFAZ毒性组(180 mg·kg^(-1))。EOFAZ组、二甲双胍组分别灌胃EOFAZ和二甲双胍的同时,正常组和DM组以等体积生理盐水灌胃,每日一次,连续灌胃8周后,血糖仪检测血糖。采用HE染色对胰腺进行病理形态学观察;蛋白免疫印迹法分析胰腺组织中p62、Keap1、Nrf2、HO-1、Bcl-2及Bax的表达。免疫组织化学分析胰腺组织中Nrf2的表达水平。结果与模型组相比较,给予EOFAZ后,可明显改善胰岛的病理形态;明显下调Keap1、Bax蛋白表达,并上调p62、Nrf2、Ho-1及Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论EOFAZ对糖尿病诱导的胰腺损伤具有明显的改善作用,其作用可能与激活p62/Keap1/Nrf2信号通路,抑制凋亡信号相关。

艳山姜挥发油纳米乳的制备及其体内分布情况考察

目的:制备包载艳山姜挥发油(EOFAZ)的口服纳米乳,考察其体外促吸收效果和体内分布情况。方法:将醋柴胡多糖(VBCP)和牛血清白蛋白(BSA)通过Maillard反应进行偶联,制备多糖-蛋白偶联物VBCP-BSA。以VBCP-BSA为乳化剂,维生素B12(VB_(12))为吸收促进剂,中链甘油三酯与EOFAZ混合作为油相,通过高能外力乳化法制备负载EOFAZ的纳米乳,对该纳米乳的粒径及粒径分布、表面Zeta电位、EOFAZ含量、外观形态等进行表征,并利用荧光素示踪法考察荧光素标记的EOFAZ纳米乳在体外的吸收效果及体内的分布情况。结果:VBCP与BSA通过Maillard反应48 h后形成偶联物VBCP-BSA,并具有较高的接枝度。以VBCP-BSA为乳化剂,制备得到均一的粉色纳米乳液EOFAZ@VBCP-BSA/VB_(12)。该纳米乳的粒径<100 nm,粒径分布均匀,表面弱负电荷,呈圆球形,对EOFAZ的包封率>80%,其具有良好的体外吸收效果,口服后能增强肝脏蓄积。结论:设计的蛋白多糖纳米乳能够有效负载EOFAZ,促进口服吸收,增强肝脏分布,可为口服EOFAZ保肝制剂的开发提供实验依据。

艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤及一氧化氮合酶-一氧化氮的影响

目的:研究艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及一氧化氮合酶-一氧化氮(NOS-NO)的影响。方法:体外传代培养人脐静脉内皮细胞,给予0.1μg·mL-1和0.01μg·mL-1艳山姜挥发油孵育24h后,加入100μg·mL-1 ox-LDL作用24h诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型,倒置相差显微镜及吉姆萨染色观察细胞形态学变化,比色法分析细胞培养液NO的含量与细胞裂解液NOS分型活力。结果:Ox-LDL与人脐静脉内皮细胞作用24h后,细胞胞膜皱缩,细胞数目减少,tNOS与eNOS活力显著降低,培养液NO含量降低。艳山姜挥发油显著改善细胞形态学变化,提高细胞tNOS与eNOS活力及培养液中NO含量。模型组与艳山姜挥发油组均对iNOS未见显著影响。结论:艳山姜挥发油对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其保护作用与改善eNOS活力,提高NO水平相关。

艳山姜挥发油肺部定量给药用于缓解肺气肿的作用

目的:初步研究艳山姜挥发油(EOFAZ)经肺部定量给药后对猪胰弹性蛋白(PPE)诱导小鼠产生肺气肿的防治作用,并探讨其相关机制。方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组,模型组,EOFAZ低、高剂量组(2,20 mg·kg^(-1))及地塞米松组(1 mg·kg^(-1))。采用肺部给药定量雾化器每隔7 d给予PPE诱导小鼠产生肺气肿,共给药4次。在此期间,隔天使用肺部给药定量雾化器定量给予EOFAZ,共给药14次。小鼠肺部经苏木素-伊红(HE)染色用于观察各组形态学变化并测量和计算平均内衬间距(MLI),采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL^(-1)β),白细胞介素-6(IL-6)的含量,通过生化试剂盒测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核因子E2相关因子2(Nrf2),醌氧化还原酶1(NQO1),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2的表达。结果:肺部形态学观察及MLI检测结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肺部出现明显的炎症浸润、肺泡腔扩大和融合的现象,MLI升高(P<0.05);与模型组比较,EOFAZ肺部定量给药后能有效地缓解PPE引起的肺泡腔扩张、肺部炎症细胞浸润及肺组织细胞凋亡等病理变化,MLI也出现下降(P<0.05)。ELISA结果显示,模型组小鼠的炎症水平显著升高(P<0.01),肺部定量给予EOFAZ后血浆中TNF-α,IL^(-1)β和IL-6的含量均下降(P<0.01)。氧化应激结果显示,模型组小鼠的氧化应激水平显著升高(P<0.01),肺部定量给予EOFAZ后提高了肺组织中SOD,CAT的活力(P<0.01)和降低MDA的含量(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组凋亡蛋白明显升高(P<0.01),抗氧化应激蛋白Nrf2,NQO1表达明显下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,肺部定量给予EOFAZ后凋亡蛋白Bax/Bcl-2的蛋白相对表达量下降(P<0.01),抗氧化应激蛋白Nrf2,NQO1的表达增加(P<0.05)。结论:EOFAZ通过肺部定量给药能够有效降低炎症和氧化应激水平,减少肺组织细胞凋亡,缓解肺气肿的发生和发展,其抗氧化机制与提高Nrf2及其下游NQO1蛋白表达密切相关。