EP4受体激动剂可通过激活Wnt/β-catenin信号途径促进人CD34^+细胞体外增殖

目的:探讨前列腺素E2特异性受体激动剂4(EP4A)促进人CD34^+细胞体外增殖的可能信号途径。方法:收集中山一院血液科20例健康供者经G-CSF动员后的外周血造血干细胞采集物。应用免疫磁珠法分选出人CD34^+细胞,应用CCK8法明确EP4A促进人CD34^+细胞体外增殖的最佳条件(最佳浓度和最佳作用时间);在此条件下EP4A作用于人CD34^+细胞后,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测β-catenin mRNA水平的变化、Western blot检测β-catenin和P-GSK-3β蛋白表达情况。结果:EP4A 10μmol/L、在培养72 h能明显促进人CD34^+细胞体外增殖,增殖率为对照组的1.36倍(P=0.002)。最佳条件EP4A作用于人CD34^+细胞后,β-catenin mRNA及其蛋白的表达增高,GSK-3β蛋白的磷酸化增加,而这些作用均可被相应的抑制剂(EP4AA)所拮抗。结论:EP4A可通过激活Wnt/β-catenin信号途径促进人CD34^+细胞体外增殖。

EP4A对人CD34^+细胞干性因子表达的影响

目的:探讨前列腺素E2特异性受体激动剂4(EP4A)增强人CD34^+细胞干性因子表达的机制。方法:收集中山大学附属第一医院血液科20例健康供者经G-CSF动员后的外周血造血干细胞采集物,采用免疫磁珠法分选出人CD34^+细胞。以DMSO作对照,分别用EP4A、EP4A+EP4A拮抗剂(EP4AA)作用人CD34^+细胞72 h后,应用热图和Pathway富集分析检测与CD34^+细胞干性相关的差异基因和通路;再用qRT-PCR和Western blot检测不同组别细胞中通路蛋白和差异基因的mRNA及蛋白(β-catenin、Nanog、Oct4、Sox2、Stat3、AKT、P38)表达水平。结果:与对照组相比,EP4A组人CD34^+细胞中β-catenin、Nanog、Oct4及Sox2 mRNA及其蛋白的表达均增高,而STAT3、AKT、P38 mRNA及其蛋白的表达无变化;EP4A与EP4AA(XAV939)共同作用人CD34^+细胞时,人CD34^+细胞β-catenin表达水平明显降低,并且Nanog、Oct4及Sox2基因及蛋白表达相应减少。结论:EP4A可增加人CD34^+细胞干性因子(β-catenin、Nanog、Oct4和Sox2)表达,而不能增加STAT3、AKT、P38表达。