固定化酶催化合成EPA/DHA型磷脂的研究

以大豆卵磷脂和富含二十碳五烯酸(EPA)/二十二碳六烯酸(DHA)的鱼油为底物,在固定化磷脂酶A_(1)(PLA_(1))的催化作用下,制备EPA/DHA型磷脂(EPA/DHA-PLs)。考察了PLA_(1)的固定化酶用量、水用量、反应温度、底物鱼油与磷脂质量比对EPA/DHA-PLs制备的影响,并通过响应面法分析了影响EPA/DHA-PLs合成的关键因素。研究结果表明:EPA甲酯保留时间约为54.594 min,DHA甲酯保留时间约为69.317 min,原料鱼油中EPA和DHA的总量为83.27%。EPA/DHA-PLs合成的最佳反应条件为:固定化PLA_(1)的添加量为21.81%(以底物鱼油/磷脂的总质量为基准),鱼油与磷脂质量比为5.45∶1,反应温度为54.3℃,水用量为1.08%(以底物的总质量为基准)。在此条件下,EPA/DHA的最大结合率可达65.5%。固定化PLA_(1)经5次重复使用后,剩余的酶活性仍不低于52.3%。

三种不同EPA/DHA组成鱼油乳液的体外消化特性比较

探究不同二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)组成比例的鱼油乳液的体外消化特性。制备不同EPA/DHA(5.13、2.45、1.34)比例的O/W鱼油乳液,对消化过程中粒径、ζ-电位、微观结构及小肠阶段脂肪酸的释放行为进行研究。结果表明,不同EPA/DHA比例的鱼油乳液在消化过程中的变化趋势相似,同时各乳液消化特性有所区别。具体而言,三种初始乳液均具有较高的稳定性,电荷性介于-40.02 mV和-43.77 mV,粒径主要分布于0.1~1.0μm之间。经口腔与胃阶段消化后,各体系电荷绝对值显著降低(P<0.05),乳滴中心脂质暴露,粒径呈多峰分布且主要集中于10~100μm区间。小肠阶段各组乳液粒径显著降低至8~13μm(P<0.05),游离脂肪酸(Free Fatty Acids,FFA)相对释放结果表明,EPA/DHA=5.13组乳液(103.21%)>EPA/DHA=2.45组乳液(73.54%)>EPA/DHA=1.34组乳液(62.51%),EPA与DHA相对水平是影响三种鱼油乳液消化的重要因素。该研究可为富含EPA与DHA的海洋脂类膳食摄入及鱼油递送系统的开发设计提供一定参考。

EPA/DHA型磷脂酰胆碱对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

为探究EPA/DHA型磷脂酰胆碱(PCEPA/DHA)抗帕金森病(PD)的活性及其机制,采用MPP+诱导SH-SY5Y细胞构建PD体外模型,分析PCEPA/DHA干预对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞活力、细胞形态及活性氧(ROS)水平等的影响,并结合转录组学技术筛选关键基因及通路。结果表明:1)PD造模的最佳条件为600μmol/L MPP+处理SH-SY5Y细胞24 h,PD模型组细胞相对活力下降(53.71±3.21)%;2)PCEPA/DHA可剂量依赖性增强MPP+诱导的SH-SY5Y细胞活力,改善细胞形态和降低细胞氧化应激水平;3)转录组学结果表明:PCEPA/DHA对MPP+诱导SH-SY5Y细胞的保护作用与改善线粒体功能障碍,改善多巴胺和突触核蛋白相关功能以及抑制细胞凋亡等密切相关。

饲料中DHA与EPA比例对星斑川鲽雌鱼性类固醇激素及繁育性能的影响

为了探索饲料中DHA与EPA比例对星斑川鲽(Platichthys stellatus)雌性亲鱼繁育性能的影响,配制等氮等脂含不同DHA与EPA比例(0.65、1.33、2.12、3.08和3.92)饲料5组,每组设3重复,室内循环水系统养殖,试验周期90 d,试验结束后取亲鱼血清及性腺检测。结果表明,随着饲料DHA与EPA比值的升高,亲鱼雌二醇(E 2)呈先升后降趋势,DHA与EPA比值为1.33时,促进作用显著(P<0.05)。性腺中FSHR、StAR和芳香化酶表达量也显著高于对照组(P<0.05);添加DHA和EPA后亲鱼的绝对繁殖力显著提高,但DHA与EPA比值为1.33效果更显著(P<0.05);在DHA与EPA比值为0.65、1.33组和2.12时,雌鱼性腺中单不饱和脂肪酸的含量显著高于其他组(P<0.05),n-6多不饱和脂肪酸出现显著下降(P<0.05),n-3多不饱和脂肪酸明显上升,差异显著(P<0.05)。由此可见,饲料中添加DHA和EPA能有效促进星斑川鲽雌性亲鱼的性腺发育,DHA与EPA比值为1.33时能提高亲鱼E 2分泌,FSHR、StAR和芳香化酶表达以及单不饱和脂肪酸的吸收,增加性腺发育能量供给,促进亲鱼性腺成熟,提高繁育性能。

裂殖壶藻油提取及高浓度 EPA/DHA分离纯化工艺研究

为实现藻油中ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)的简单、绿色、高效分离纯化工艺,首先利用裂殖壶菌原始菌株及定向驯化菌株ALE40为原料提取油脂,通过优势性评估及细胞通透性对比二者提油效果,并通过测定油脂指标对比3种提油方法(酸解法、超声干法、超声湿法)优劣。对超声湿法提取的粗藻油采用酯交换法进行乙酯化后,联合尿素包埋法和分子蒸馏技术富集高浓度二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),对酯交换及尿素包埋工艺条件进行单因素实验优化,通过对分子蒸馏重相DHA和EPA含量测定确定分子蒸馏级数,并对纯化藻油的理化指标进行测定。结果表明:相比裂殖壶菌原始菌株,ALE40的细胞通透性明显较好,在无需干燥的情况下,超声10 min即可达到最高油脂得率(53.2%),缩短超声时间的同时提高了破壁效率;3种提油方法中超声湿法提取的藻油理化指标较好;酯交换反应最佳条件为反应温度60℃、KOH添加量3%、醇油比10∶1、反应时间0.5 h,尿素包埋最佳工艺条件为脲酯比0.8∶1、溶酯比8∶1、包埋温度4℃、包埋时间8 h;尿素包埋后的藻油经二级分子蒸馏纯化后,藻油中EPA和DHA总含量从17.40%(酯交换反应)升高到90.86%,总回收率为62.28%;得到的纯化藻油的各项理化指标均符合行标要求,且储存3个月内无沉淀,具备一定稳定性。综上,该提取分离纯化工艺全程实现试剂循环利用,且制备的藻油酸值低、无异味。

气相色谱-质谱法测定鱼油中EPA和DHA 含量的方法研究

建立气相色谱-质谱(GC-MS)法测定鱼油中EPA、DHA的含量。方法:采用安捷伦DB-FastFAME石英毛细管柱(20 m×0.18 mm×0.20μm),质谱检测器,内标法定量检测。样品经由氢氧化钠-甲醇溶液甲酯化,经离心过滤后由GC-MS法测定。结果:EPA和DHA分别在27.150~434.41μg/mL和27.244~435.91μg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(相关系数分别为0.995 9和0.997 5)。该方法EPA和DHA的检出限分别为1.530μg/g、2.312μg/g,样品平均添加回收率为96.92%~100.42%。

脂肪酶催化鱼油醇解富集EPA和DHA的研究

研究了固定化脂肪酶Lipozyme RM IM催化鱼油部分醇解反应,探讨了油醇比、酶加量等因素对反应的影响,在优化条件下,可以使鱼油中EPA、DHA的含量由26.1%升至43.0%,得率大于75%,对鱼油醇解产物进行了分子蒸馏提纯,得到了富含EPA、DHA的甘油酯型鱼油产品。

细胞融合法构建EPA和DHA高产异养藻株的研究

利用细胞融合技术 ,将富含EPA和DHA的自养微藻绿色巴夫藻和生长迅速的异养微藻四鞭藻相融合 ,并筛选出兼养的融合藻株。融合藻株的总脂、EPA、DHA和EPA/DHA等各指标均比异养亲本四鞭藻有较大提高 ;在兼养条件下生长速率高于亲本微藻 ,脂肪酸组成以多不饱和脂肪酸为主 ;而在异养条件下以饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸为主。

从鱼油中提取分离高纯度EPA和DHA的试验研究

进行了硝酸银络合与超临界ＣＯ２精馏相结合的方法，从鱼油中提取高纯度ＥＰＡ和ＤＨＡ的试验研究，结果表明：用该两步法可同时获得纯度为９０％以上的ＥＰＡ和ＤＨＡ。

高效液相色谱/质谱联用直接测定鱼油中EPA/DHA含量

建立快速、简单、准确测定鱼油样品中EPA和DHA两种ω-3PUFA含量的高效液相色谱/电喷雾质谱联用(HPLC-ESI/MS)分析方法。鱼油经2mol/LNaOH乙醇溶液皂化、3mol/LHCL酸化后,使用Waters液相色谱仪、SymmetryC8柱(2.1×150mm),以甲醇—水为流动相、十七酸为内标,利用质谱定性定量测定EPA/DHA含量。质谱在电喷雾负离子模式下,对m/z301、m/z327和m/z269进行选择离子监测。该方法下EPA、DHA分别在5.55～55.50μg/mL和0.90～9.00μg/mL范围内峰面积和浓度呈良好的线性关系,相关系数REPA=0.9995、RDHA=0.9993;EPA、DHA的回收率分别为98.63%～99.23%、97.12%～99.17%,EPA、DHA的相对标准偏差分别为1.57%、1.20%(n=5)。此方法流动相简单,分析时间短且无需衍生处理,不受色谱分离度的限制并可实现对样品的重复分析,能准确快速测定鱼油中EPA和DHA含量。

皂化-尿素包合法制备高含量EPA、DHA产品研究

在金属盐沉淀法和尿素包合法基础上研究了皂化 尿素包合法新工艺 ,简化操作 ,降低成本 ,产品EPA、DHA含量可达 82 5 7%以上。

尿素包合法富集鱼油中的EPA和DHA的研究

用尿素包合法（脲包法）对大连鱼油中的ＥＰＡ和ＤＨＡ进行富集，得到较佳操作条件为温度０℃，脲酯比１３，鱼油甲酯为脲包客体，以甲醇作溶剂。

尿素包合法富集蛇鲻鱼油中EPA和DHA的研究

以蛇鲻精制鱼油为原料,采用氢氧化钾乙醇皂化和硫酸酸化制备鱼油混合脂肪酸,以EPA和DHA含量为指标,探讨了尿素包合法富集鱼油中EPA和DHA的工艺条件。结果表明:以乙醇为溶剂,在尿脂质量比为2︰1和包合温度0℃的条件下进行一次性包合20 h后,富集产物中EPA和DHA总含量达到了69.74%,其中EPA含量为22.05%,DHA含量为47.69%,达到了保健鱼油的生产要求。

脂肪酶催化乙酯甘油酯酯交换制备富含EPA和DHA的甘油三酯

采用脂肪酶催化乙酯型鱼油和甘油酯型鱼油进行酯交换制备富含EPA和DHA的甘油三酯。对脂肪酶进行了筛选,并确定了两种脂肪酶TLIM和K酶用于后续研究。应用填充床反应器作为反应装置,采用正交试验对影响酯交换反应的几个主要因素条件进行了优化,得到了反应的最佳条件为:以K酶为催化剂,反应温度40℃,加酶量6%,反应时间18 h,底物摩尔比2.0∶1.0。同时,也得到了以TLIM酶为催化剂,获得最高含量EPA和DHA反应的最佳条件。

从鳀鱼油中提取高不饱和脂肪酸（EPA和DHA）的研究

分别用尿素附加法和分子蒸馏法从鱼鱼油中提取出高不饱和脂肪酸（ＥＰＡ和ＤＨＡ）。用尿素附加法，以相对于原料油１：１．５、１：２、１：２．５倍量的尿素处理而得到的产品中ＥＰＡ和ＤＨＡ的含量分别为３５．１％、６１．０％和７０．０％。分子蒸馏法所得到的产品中ＥＰＡ＋ＤＨＡ含量达到７０．１％，碘价达到３２０。尿素附加法工艺复杂，成本高。分子蒸馏法结合低温处理是提取浓缩ＥＰＡ＋ＤＨＡ的理想方法。

海水鱼与淡水鱼脂肪中EPA、DHA含量的比较

通过对鲑鱼、带鱼、黄花鱼、鲅鱼和鲳鱼 5种市售海水鱼的肌肉与鲈鱼、鳜鱼、中华鲟、鲢鱼、鳙鱼、罗非鱼、武昌鱼、鲤鱼和草鱼 9种市售淡水鱼的肌肉和内脏脂肪中EPA、DHA的含量的分析比较 ,结果显示 ,除鲤鱼和草鱼外 ,无论是海水鱼还是淡水鱼 ,其脂肪中均含有一定数量的EPA、DHA。特别是淡水鱼中的鲈鱼 ,其肌肉与内脏脂肪中的DHA含量居所有被测样品之首 ,占其脂肪酸组成的 18.6 %～ 2 0 .1% ,比被检测的鲑鱼DHA含量高出近

从深海鱼油中制备提纯二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)乙酯的研究

用尿素沉淀法和分子蒸馏法研究了二十碳五烯酸（ 简称 Ｅ Ｐ Ａ） 、二十二碳六烯酸（ 简称 Ｄ Ｈ Ａ） 乙酯的分离提纯。实验表明，尿素沉淀法能够将 Ｅ Ｐ Ａ、 Ｄ Ｈ Ａ 乙酯提纯到９０ ％ ，分子蒸馏法能提纯到７０ ％ 以上。两种方法对比，分子蒸馏法提纯工序简单，效率高，尿素沉淀法工序繁杂，效率低。

脂肪酶水解低值鱼油富集EPA和DHA甘油酯的研究

以从南海盛产低值鱼蛇鲻中提取的鱼油为原料,采用脂肪酶选择性水解法富集鱼油中EPA和DHA,研究结果表明在pH 7的缓冲溶液反应体系中,按照水油质量比4∶1加入鱼油,脂肪酶OF添加量为1%,然后充氮气密封,在40℃的恒温水浴中震荡反应16 h后,鱼油中的EPA和DHA总含量达到了34.1%;水解后鱼油的组分主要以甘油二酯为主,含量为63.3%;其次是甘油三酯和甘油一酯,含量分别为34.3%和2.4%。

深海鱼油中两种脂肪酸(EPA和DHA)的生理功效及机理的研究进展

论述了深海鱼油中两种脂肪酸EPA、DHA对人体的生理功效、对疾病抑制作用以及目前对深海鱼油中这两种脂肪酸的研究进展。

鱼油生理活性物质EPA和DHA分离进展

报导了鱼油中生理活性物质EPA和DHA分离方法及其进展,重点讨论了具有工业化前景的超临界CO2分离法,介绍了此领域连续萃取分离的成就,给出了作者进行连续萃取分离的试验结果。