EPHX1基因及EPHX2基因多态与慢性苯中毒易感性的关系

目的探讨EPHX1基因及EPHX2基因多态与慢性苯中毒易感性的关系。方法采用病例对照研究,以268名苯中毒工人为病例组,268名接触苯而无中毒表现的工人为对照组。应用TaqMan PCR分析技术检测EPHX1基因rs2854451、rs3738047、rs2234922和rs1051741及EPHX2基因rs751141位点单核苷酸多态。结果在携带EPHX1rs373804GG基因型个体中,同时携带EPHX1rs2234922G等位基因个体慢性苯中毒的发病风险降低(P=0.02),而在携带EPHX1rs2234922AA基因型个体中,同时携带EPHX2rs751141A等位基因个体慢性苯中毒的发病风险升高(P=0.03);饮酒与EPHX1基因rs1051741多态(2χH=5.28,P=0.02)或rs2234922多态(2χH=6.71,P=0.01)存在联合作用,在饮酒人群中携带突变型个体较野生纯合型苯中毒发病危险性降低(P=0.04和P<0.01);EPHX1基因单倍型分析显示,携带AGAC等位基因组成的单倍型2个体或GAGT等位基因组成的单倍型4个体慢性苯中毒的发病风险增高(P<0.001),而携带GGGT等位基因组成的单倍型6个体或AAGT等位基因组成的单倍型10个体慢性苯中毒的发病风险降低(P<0.001)。多因素Logistic回归分析提示吸烟对慢性苯中毒发病风险具有一定的修饰作用(OR=0.313,95%CI:0.123-0.794,P=0.015)。结论EPHX1基因多态性可能与慢性苯中毒发生危险性相关,而EPHX2基因多态与慢性苯中毒易感性关系需进一步研究。

EPHX2 rs751141变异位点对肾脏微炎症的影响及其分子机制研究

目的研究EPHX2 rs751141基因多态性(G860A,R287Q)对可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)活性的影响及其参与肾脏微炎症的分子机制。方法以人的肾小管上皮细胞(HK2)cDNA为模板,利用p-UCT DNA连接试剂盒、点突变技术及亚克隆技术,分别构建包含EPHX2基因rs751141位点等位基因G和A的重组质粒pcDNA3.1/V5-His-G(野生型:WT)和pcDNA3.1/V5-His-A(突变型:R287Q)。以Lipofectamine 2000转染试剂分别将上述重组质粒转染至HK2细胞,给予足量的11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acid,11,12-EET);共培养后,利用ELISA试剂盒检测11,12-二羟基二十碳三烯酸(11,12-dihydroxyeicosatrienoic acid,11,12-DHET),采用t检验分析R287Q突变对sEH水解酶活性的影响;利用流式细胞术检测细胞上清中炎症因子浓度白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)和IL-1的浓度;RT-PCR检测IL-17A和IL-1β等mRNA表达水平;Western blotting方法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果与WT组相比,R287Q突变型重组质粒组水解活性明显降低(P<0.01),细胞上清中IL-17A浓度以及IL-1等炎症因子浓度显著下降(P<0.05)。与单纯WT组相比,WT+EET组的炎症因子浓度显著降低,但仍明显高于R287Q+EET组(P<0.05)。RT-PCR结果显示R287Q突变组中IL-17A和IL-1β等的mRNA表达明显低于WT组;与单纯WT组相比,WT+EET组IL-17A以及IL-1β等炎症因子mRNA表达降低,但仍明显高于R287Q+EET组(P<0.05)。Western blotting结果表明R287Q组可能通过调控PI3K/AKT信号通路减轻肾小管上皮细胞炎症水平。结论R287Q突变型重组质粒对11,12-EET的水解能力降低,炎症水平显著下降;外源性11,12-EET可降低WT组炎症水平。EPHX2 rs751141位点等位基因A的肾脏保护作用可能通过调控PI3K/AKT信号通路参与减缓炎症的分子机制。

Ephx2基因敲除对小鼠基础糖脂代谢调节的影响

目的 探讨Ephx2基因敲除(Ephx2^(-/-))对小鼠体重、基础血糖及血脂代谢的调节作用。方法 选取6~8周龄体重相近的C57BL/6J雄性小鼠、Ephx2^(-/-)雄性小鼠分别作为WT组和Ephx2^(-/-)组,每组各3只,均在标准环境下饲养16周,每周称量体重。16周后行经腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT);全自动生化分析仪检测小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及糖化血清蛋白(GSP)水平,比较两组小鼠的体重和血糖血脂代谢情况;收集小鼠肝脏组织进行苏木精-伊红染色、油红染色评估肝脏组织病理学改变。结果 两组小鼠基线体重及16周后体重组间比较差异无统计学意义(P> 0.05);16周后,两组小鼠体重均较基线增加,差异均有统计学意义(P <0.05)。IPGTT结果显示,Ephx2^(-/-)组曲线下面积(AUC)均较WT组明显增加(P <0.05),且Ephx2^(-/-)组血清GSP表达水平也较WT组升高,差异有统计学意义(P <0.05)。与WT组相比,Ephx2^(-/-)组血清TG、TC及HDL-C表达水平均升高,差异均有统计学意义(P <0.05),但两组间LDL-C表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。病理学结果也显示,Ephx2^(-/-)组小鼠肝脏组织中的脂质沉积较WT组增多。结论 敲除Ephx2基因可能影响小鼠的基础血糖及血脂代谢水平。

大鼠失血性休克及复苏后肝脏EPHX2和Sp1基因表达的变化

目的观察失血性休克及复苏对大鼠肝脏EPHX2基因及预测转录因子Sp1表达的影响。方法通过软件预测EPHX2转录因子,筛选出Sp1为研究对象。将25只SD大鼠随机平均分为5组:对照(CON)组、失血性休克(HS)组、休克复苏1 h(HSR1)组、休克复苏3 h(HSR3)组、休克复苏6 h(HSR6)组。采用real-time RT-PCR和蛋白质印迹法检测大鼠肝脏中EPHX2和Sp1的表达。结果HS、HSR1、HSR3、HSR6组EPHX2 mRNA表达低于对CON组(P<0.05),HSR1、HSR3、HSR6组EPHX2 mRNA表达低于HS组(P<0.05),HSR1组EPHX2 mRNA表达低于HSR3、HSR6组(P<0.05)。CON组Sp1mRNA表达和其他组比较差异无统计学意义(P>0.05),HS、HSR1组Sp1 mRNA表达低于HSR6组(P<0.05)。HSR1、HSR3、HSR6组EPHX2蛋白表达较CON组降低(P<0.05),Sp1蛋白在各组间表达差异无统计学意义。结论失血性休克可引起肝脏EPHX2基因表达下调,而复苏不能快速逆转这种趋势;失血性休克及复苏对预测转录因子Sp1表达没有影响。

EPHX2基因过表达质粒的构建及意义探讨

目的:构建LETO、OLETF大鼠EPHX2基因过表达重组质粒,观察其在人胚肾细胞(human embryonic kidney293T,HEK293T)中的表达,及对HEK293T细胞NF-κBp65 mRNA表达的影响。方法:提取LETO、OLETF大鼠肾脏组织总RNA,RT-PCR方法扩增编码EPHX2基因的cDNA,克隆至T-载体并测序,经亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,构建两型大鼠EPHX2过表达重组质粒,酶切鉴定并测序,采用磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞系。Western Blot方法检测EPHX2融合蛋白的表达,RT-PCR方法检测EPHX2基因过表达对HEK293T细胞NF-κBp65表达水平的影响。结果:(1)两个重组质粒均含有完整EPHX2 cDNA,测序证实OLETF型大鼠较LETO型大鼠EPHX2重组质粒有五个核苷酸位点的改变。(2)转染HEK293T细胞后,Western Blot证实融合蛋白成功表达;(3)TNF-α刺激增加HEK293T细胞中NF-κBp65mRNA表达;(4)EPHX2基因过表达促进TNF-α刺激后的HEK293T细胞中NF-κBp65 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:成功构建LETO型及OLETF型大鼠EPHX2过表达重组质粒(L-EPHX2/V5、O-EPHX2/V5),可在HEK293T细胞中过表达。为进一步探讨EPHX2基因在糖尿病肾病发生发展中的作用奠定了基础。

EPHX2基因rs751141位点的单核苷酸多态性分布与冠心病的相关性

目的研究可溶性环氧化物水解酶(EPHX2)基因rs 751141单核苷酸多态性(SNP)与冠心病的相关性。方法选择108例冠脉造影结果阳性(至少1支主要冠脉内径狭窄≥50.00%)住院患者为观察组,同期住院冠脉造影结果正常者112例作为对照组,通过聚合酶链反应(PCR)和基因测序方法,对EPHX2基因rs751141位点的基因型频率进行对比分析。结果在EPHX2基因rs751141位点上可检测到3种基因型,冠心病组EPHX2基因rs751141位点的基因型频率及C等位基因频率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EPHX2基因rs751141位点SNP和冠心病发病有相关性,携带C等位基因可能是冠心病发病的易感因素之一。

CYP2J2基因和EPHX2基因多态性与缺血性脑卒中的遗传易感性

目的研究我国汉族人群细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2),可溶性环氧化物水解酶2(EPHX2)基因多态性与缺血性脑卒中的关系。方法选择200例缺血性脑卒中患者和350例健康人群,采用PCR-RFLP技术分析两个基因CYP2J2G-50T,EPHX2 G860A多态性的基因型。结果仅EPHX2 860A等位基因频率在缺血性脑卒中组与对照组比较有显著性差异。多元Logistic回归分析表明,携带EPHX2 860A等位基因的人群患缺血性脑卒中相对风险率下降50%(OR=0.5)。当个体同时携带CYP2J2-50GG和EPHX2 860A+(A+示A等位基因)联合基因型时,其患缺血性脑卒中相对风险率下降53.9%(OR=0.461)。结论虽然EPHX2 860A等位基因与缺血性脑卒中有相关性并且为缺血性脑卒中一个独立的保护因子,但联合基因型CYP2J2-50GG/EPHX2 860A+的协同作用对缺血性脑卒中有更强的保护作用。

CYP2J2基因和EPHX2基因多态性与肺癌易感性研究

目的探讨CYP2J2基因启动子区G-50T多态性和EPHX2基因G860A多态性与肺癌发生的关系。方法经病理检查确诊为肺癌患者150例（肺癌组），300名本院健康体检者作为对照组，检测其CYP2J2基因启动子区G-50T多态性和EPHX2基因G860A多态性，并进行统计学分析。结果肺癌组和对照组比较，CYP2J2启动子区G-50T多态性差异无统计学意义，而肺癌组患者EPHX2 860G等位基因频率显著高于对照组人群（96％比78．3％，P〈0．01），多元回归分析方法显示，肺癌的发生与EPHX2 G860A多态性显著相关（校正OR值=0．164，95％CI 0．079～0．342，P〈0．001）。结论EPHX2 G860A多态件与肺痛密切相关．可作为肺癌高毹患者的预涮指标．

环氧二十碳三烯酸受EPHX2基因调控与急性缺血性小卒中后早期神经功能恶化发生相关

目的:探究环氧二十碳三烯酸(EETs)与急性缺血性小卒中(MIS)后早期神经功能恶化(END)发生的相关性及其是否受EPHX2基因的调控。方法:本研究为前瞻性观察性研究。连续纳入2013年3月至2015年6月德阳市人民医院、温州医科大学第二附属医院和温州医科大学第三附属医院收治的首次发病且发病在24 h内的急性MIS患者。入院时对所有患者的血浆EETs水平进行检测,并检测其EPHX2基因rs751141单核苷酸多态性。主要终点为患者在入院10 d内出现END(END定义为美国国立卫生研究院卒中量表评分与入院时基线水平相比增加2分及以上者)。结果:共纳入322例患者,其中85例(26.4%)发生了END。与未发生END患者[(68.4±8.1)nmol/L]相比,发生END患者入院时EETs水平[(60.3±7.3)nmol/L]显著降低(t=8.464,P<0.001),EPHX2基因rs751141 GG频率分布明显增高[发生END者66/85(77.6%),未发生END者123/237(51.9%),χ^(2)=17.130,P<0.001]。EPHX2基因rs751141 GG携带者EETs水平较低[GG型:(59.6±7.8)nmol/L;AG型:(67.9±8.2)nmol/L;AA型:(68.8±3.2)nmol/L,F=9.285,P<0.001]。多因素分析结果表明血浆低水平的EETs(≤64.3 nmol/L)为END发生的独立预测因素之一(31.5~51.3 nmol/L组:OR=2.96,95%CI 1.18~8.77,P=0.02;51.4~64.3 nmol/L组:OR=2.46,95%CI 1.06~6.89,P=0.03)。END的发生与患者3个月时预后不良密切相关(OR=1.82,95%CI 1.46~2.35,P=0.02)。结论:END在急性MIS后常见,且与预后不良相关。急性MIS后END与EETs水平降低和EPHX2基因rs751141 GG频率分布明显增高有关。

EPHX2基因多态性与长沙地区汉族人群脑梗塞继发性癫痫遗传易感性的关联研究

目的:研究EPHX2 rs1042032(A/G)多态性与长沙地区汉族人群脑梗塞继发性癫痫遗传易感性关联关系。方法:收集中南大学湘雅医院及湘雅三医院脑梗塞未继发癫痫及脑梗塞继发癫痫患者血液标本。利用病例-对照研究方法,将标本分为对照组(即无EP组)402例和病例组(即EP组)124例,提取血样的DNA。然后根据人类基因组DNA序列,设计EPHX2 rs1042032 PCR引物,用PCR方法对目的基因EPHX2进行扩增。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法,先对扩增的目的基因片段进行酶切,然后通过凝胶电泳对不同的等位基因进行分辨。结果:EP组和无EP组间EPHX2 rs1042032多态位点基因型分布无显著统计学差异(P>0.05)。结论:EPHX2 rs1042032的基因多态性与脑梗塞继发性癫痫可能无关。

汉族可溶性环氧化物酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系研究

目的探讨汉族人中可溶性环氧化物酶(EPHX2)基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法利用聚合酶链式反应(PCR)和PCR产物直接测序的方法检测EPHXZ,比较238例颅内动脉瘤(病例组)与221例无颅内动脉瘤(对照组)EPHX2基因rs751141、rs2291635多态性位点的基因型频率。结果女性颅内动脉瘤组与对照组中EPHX2 rs751141多态性基因型分布比较,差异有统计学意义,即前者GA+AA基因型频率(22.2%)低于后者(41.7%)(P=0.002);但在男性和不分性别患者中该基因型频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。rs2291635位点的基因型频率分布在男性、女性、不分性别患者中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论汉族人的rs751141基因异质性可能与女性颅内动脉瘤的发生相关。

可溶性环氧化物水解酶基因多态性与冠心病的相关性

目的:研究中国浙江籍汉族人群中可溶性环氧化物水解酶(EPHX2)基因rs2271001位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与冠心病的相关性。方法:176例冠心病患者(至少1支冠状动脉血管内径狭窄≥50%)为冠心病组,选取同期179例冠脉造影正常者作为对照组。采用PCR和基因测序方法,检测rs2271001位点的SNP。结果:在rs2271001位点上检测到3种基因型,其基因型分布符合HardyWeinberg平衡定律。冠心病组EPHX2基因rs2271001位点的AG、GG、AA基因型及G、A等位基因分布频率均高于对照组(均P<0.05)。结论:EPHX2基因rs2271001位点A/G多态性与冠心病发病存在相关性,G等位基因可能是中国浙江籍汉族人群冠心病患者患病的危险等位基因。

环氧化物水解酶2在肝细胞癌中的表达水平与功能作用

本研究通过公共数据和实验数据,全面分析环氧化物水解酶2(epoxide hydrolase 2,EPHX2)在肝细胞癌中的表达情况、功能作用以及预后意义。利用GEO和MitoCarta数据集,筛选肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因;利用TCGA数据库分析EPHX2及其相关基因在肝细胞癌中的表达水平;运行R包绘制Kaplan-Meier生存曲线和功能富集分析;基于STRING和GSEA构建蛋白质互作网络和基因集富集分析;荧光定量PCR和GEO数据集验证EPHX2在肝细胞癌中的表达水平。本研究共筛选得到15个在肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因。EPHX2在肝细胞癌组织中的表达水平显著降低(P<0.01)。EPHX2表达水平与肝癌患者性别、分期和级别有关,而与年龄、T分期等因素无关。与EPHX2低表达组肝癌患者相比,EPHX2高表达组肝癌患者预后较好。功能富集结果显示,EPHX2与补体途径、脂肪酸降解等信号通路有关。蛋白质互作网络结果显示,EPHX2与HAO1、AGXT、ACOX1、GSTκ1、SCP-2、CAT、CYP2C8,CYP2C9,CYP2B6,和CYP2J2等密切相关。GSEA结果显示,EPHX2低表达组与肝癌细胞增殖、肝癌复发等基因集正相关。荧光定量PCR和GEO数据集验证结果显示,EPHX2在肝细胞癌组织和肝癌细胞株中呈显著低表达。EPHX2在肝细胞癌中呈显著低表达,提示其可能在肝细胞癌发生发展过程中发挥抑癌基因作用,但具体作用机制还需进一步验证。

新疆维吾尔族原发性高血压与环氧化物水解酶基因多态性的相关性

目的:研究新疆维吾尔族人群环氧化物水解酶(EPHX2)基因rs751141多态性与原发性高血压的关系。方法:通过流行病学调查获得新疆维吾尔族原发性高血压患者302例(高血压组),健康对照组323例,采用TaqMan探针法分析EPHX2基因rs751141多态性的基因型。结果:高血压组与对照组EPHX2基因rs751141G/A多态性差异无统计学意义。结论:EPHX2基因rs751141G/A多态性与新疆维吾尔族原发性高血压无相关性。