EPO/Stat5信号通路在OA发病中的作用分析

目的探讨EPO/Stat5信号通路在骨性关节炎(OA)发生、发展中的作用。方法 20只成年健康雄性SD大鼠随机分为CK组与实验组,各10只。实验组建立OA大鼠模型,CK组切开皮肤,暴露关节腔,不切断前交叉韧带和内侧半月板。造模8 w后,检测两组全血高切黏度和低切黏度,以及关节液与血清C-反应蛋白(CRP)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、肿瘤坏死因子-a(TNF-α)含量;Western bloting法检测软骨细胞中促红细胞生成素(EPO)和转录激活子5(Stat5)蛋白表达水平。结果实验组全血低切黏度和高切黏度高于CK组(P <0.05),关节液和血清MMP-3、CRP和TNF-ɑ含量均高于CK组(P <0.05),软骨细胞中EPO和Stat5的蛋白表达水平也高于CK组(P <0.05)。结论在OA发病过程中,EPO/Stat5信号通路会刺激血液黏度及炎症因子水平的升高,加重OA疾病进展。

天麻素通过CCR5/JAK1/STAT1信号通路抑制缺血缺氧新生小鼠小胶质细胞介导的炎症反应

目的:探究天麻素(GAS)通过C-C趋化因子受体5(CCR5)对新生小鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后小胶质细胞JAK1/STAT1信号通路及其介导的炎症反应的影响。方法:选择新出生10 d的C57BL/6J小鼠48只,随机分为假手术(sham)组、HIBD模型组和HIBD与GAS联合处理(HIBD+GAS)组;体外培养BV-2小胶质细胞,分为对照(Con)组、氧糖剥夺(OGD)组、OGD+GAS组、GAS组、Maraviroc(MVC)组、OGD+MVC组和OGD+MVC+GAS组。通过RT-qPCR检测CCL4和CCR5的mRNA表达变化,Western blot检测CCR5、p-JAK1、p-STAT1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达变化,免疫荧光双标染色检测CCR5、p-JAK1和p-STAT1的表达变化。结果:(1)与sham组相比,HIBD组小鼠缺血侧胼胝体区CCL4和CCR5的mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平明显增高(P<0.05),而HIBD+GAS组中CCL4和CCR5 mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平显著低于HIBD组(P<0.05)。(2)与Con组相比,OGD组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平明显增高(P<0.05),而OGD+GAS组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平显著低于OGD组(P<0.05)。(3)CCR5拮抗剂MVC在0~80μmol/L范围内不会导致显著的BV-2细胞死亡。与OGD组相比,MVC+OGD组p-JAK1、p-STAT1、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著降低(P<0.05),而MVC+OGD组与OGD+MVC+GAS组无明显差异。结论:GAS可通过靶向CCR5抑制小胶质细胞p-JAK1/p-STAT1通路及相关炎症因子的表达,发挥神经保护作用。

基于JAK1/STAT5信号通路探讨肤痒静凝胶治疗慢性湿疹作用机制

目的:探讨肤痒静凝胶对慢性湿疹大鼠模型蛋白酪氨酸激酶1(janus protein kinase 1,JAK1)/信号转导与转录激活子5(signal transducerand activator of transcription 5,STAT5)信号通路调控作用的分子机制。方法:将36只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、青鹏软膏组(2500 mg·kg^(-1)·d^(-1))、肤痒静凝胶低(0.08 g/g)、中(0.16 g/g)、高(0.32 g/g)剂量组。除正常组外,其余组大鼠均采用2,4-二硝基氯苯丙酮液背部诱导慢性湿疹样病变。造模3周后青鹏软膏组及肤痒静凝胶低、中、高剂量组分别涂抹相应药物治疗;模型组涂抹空白凝胶基质,每日1次,共2周,正常组不做处理。观察慢性湿疹大鼠背部皮损的严重程度和病理变化;Western blot法检测大鼠背部皮肤组织中磷酸化蛋白酪氨酸激酶1(p-JAK1)和磷酸化信号转导与转录激活子5(p-STAT5)蛋白表达;qRT-PCR法检测大鼠背部皮肤组织中胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromallymphopietin,TSLP)、JAK1、STAT5、白细胞介素-10(IL-10)和IL-17 mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-13和IL-17水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中IL-4、IL-6、IL-13和IL-17水平明显升高,IL-10水平明显降低(P<0.05),背部皮损组织中p-JAK1、p-STAT5蛋白和TSLP、JAK1、STAT5、IL-17 mRNA表达水平明显升高,IL-10 mRNA水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,青鹏软膏组、肤痒静凝胶低、中、高剂量组大鼠血清中IL-4、IL-6、IL-13和IL-17水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05),背部皮损组织中p-JAK1、p-STAT5蛋白和TSLP、JAK1、STAT5、IL-17 mRNA表达水平明显降低,IL-10 mRNA水平明显升高(P<0.05)。与肤痒静凝胶低、中剂量组比较,青鹏软膏组大鼠血清中IL-4、IL-6、IL-13和IL-17水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05),背部皮损组织中p-JAK1、p-STAT5蛋白和TSLP、JAK1、STAT5、IL-17 mRNA表达水平明显降低,IL-10 mRNA水平明显升高(P<0.05)。与青鹏软膏组比较,肤痒静凝胶高剂量组大鼠血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-13和IL-17水平无明显差异(P>0.05),背部皮损组织中p-JAK1、p-STAT5蛋白和TSLP、JAK1、STAT5、IL-10、IL-17 mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。结论:肤痒静凝胶可能通过调控JAK1/STAT5信号通路相关炎症因子、蛋白和基因的表达发挥治疗慢性湿疹的作用。

铁代谢异常对贫血患者EPO-STAT5信号通路的影响

目的:研究铁代谢异常对贫血患者EPO-STAT5信号通路的影响。方法:根据疾病将患者分为较低危骨髓增生异常综合症(MDS)组30例,其中铁过载16例,非铁过载14例,对其中12例铁过载患者进行祛铁治疗;慢性病贫血(ACD)组(12例),缺铁性贫血(IDA)组(12例),另设健康对照组10例;检测患者铁代谢指标铁蛋白(SF),血清铁(SI)、总铁结合力(TIBC),血清红细胞生成素(EPO)、血浆中P-STAT5及外周血中STAT5 mRNA表达。分析铁代谢异常对各组贫血患者EPO及STAT5表达的影响。结果:与非铁过载组相比,铁过载组MDS患者EPO水平明显升高(P <0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显降低(P <0.05)。祛铁治疗后EPO水平明显下降(P <0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显升高(P <0.05)。与健康对照组相比,ACD组EPO表达明显下降(P <0.05),STAT5 mRNA表达无差异,P-STAT5表达明显降低(P <0.05);IDA组EPO表达明显升高(P <0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显升高(P <0.05)。结论:过量铁负荷或慢性炎症可能抑制EPO-STAT5通路激活,加重贫血。

rhEPO通过调节JAK2/STAT5信号通路减少大鼠脑出血后神经细胞凋亡

目的探讨重组人促红细胞生成素rhEPO是否通过JAK2/STAT5信号通路减少脑出血后神经细胞的凋亡。方法将8周龄的Wistar雄性大鼠30只随机分3组:假手术组、ICH模型组、rhEPO组,每组10只。ICH模型组大鼠进行ICH造模,假手术组除不注血外,其余步骤同ICH模型组,rhEPO组术后5 min给予腹腔注射rhEPO,所有动物24 h后进行神经功能学评分,收集大鼠脑组织,利用原位缺口末端标记法检测神经细胞凋亡的变化;采用免疫组织化学SP法检测凋亡蛋白Caspase3表达;并采用Real-time PCR和Western blot检测磷酸化JAK2、磷酸化STAT5基因和蛋白表达情况。结果手术建立脑出血模型后24 h进行神经功能评分。按Longa5分制标准判定,ICH组4只评价为1分,3只评价为2分,2只评价为3分;rhEPO组治疗后,5只评价为1分,2只评价为2分,1只评价为3分,说明rhEPO可以改善大鼠脑出血后神经元损伤,恢复神经功能。与假手术组相比,ICH模型组和rhEPO组中神经元凋亡细胞及Caspase3的蛋白表达阳性细胞数明显增多(P<0.05),而rhEPO组中凋亡细胞与ICH模型组相比明显减少(P<0.05);与假手术组相比,ICH模型组和rhEPO组中JAK2和STAT5的蛋白表达和m RNA表达显著上升(P<0.05),与ICH模型组相比,rhEPO组中JAK2和STAT5的蛋白表达和m RNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外源性rhEPO可以通过调节JAK2/STAT5信号改善大鼠脑出血后神经元损伤,对于神经系统具有保护作用。

基于IL-6/STAT3和IL-2/STAT5信号通路探讨伏九贴敷药物调控Th17/Treg免疫平衡的抗哮喘作用机制

目的考察伏九贴敷药物(白芥子、甘遂、延胡索、细辛组成)通过IL-6/信号转导器和转录激活因子3(STAT3)、IL-2/信号转导器和转录激活因子5(STAT5)信号通路对哮喘大鼠CD4+T辅助细胞17(Th17)/CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)平衡的调节作用,揭示其抗哮喘的作用机制。方法采用卵白蛋白(OVA)和氢氧化铝混合液致敏激发造模,然后于大鼠大椎穴、肺俞穴和肾俞穴敷上伏九贴敷药物,每次贴敷4 h,隔日1次,共给药7次。采用免疫组化检测肺组织Th17特异细胞因子IL-17、Treg转录因子Foxp3的阳性表达;流式细胞术检测外周血中Th17、Treg细胞比例;免疫蛋白印迹法检测肺组织IL-6/STAT3和IL-2/STAT5通路相关蛋白的表达。结果与模型组比较,伏九贴敷组大鼠肺中IL-17的阳性表达量明显减少(P<0.01),Foxp3的阳性表达明显增加(P<0.05);同时IL-6蛋白和STAT3磷酸化蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而IL-2蛋白和STAT5磷酸化蛋白表达水平明显升高(P<0.01),但总STAT3和STAT5蛋白表达均没有明显变化(P>0.05)。此外,伏九贴敷组大鼠外周血中Th17细胞比例低于模型组,而Treg细胞比例高于模型组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论哮喘大鼠存在Th17/Treg免疫失衡,伏九贴敷药物可通过抑制哮喘大鼠IL-6表达,下调磷酸化STAT3的表达,降低产生IL-17的Th17细胞水平;同时增加IL-2表达,介导STAT5磷酸化,升高表达Foxp3的Treg细胞水平,促进Th17/Treg趋于平衡,抑制大鼠哮喘免疫应答,从而发挥抗哮喘效应。

自拟柴郁寄生汤对高催乳素血症大鼠卵巢PRL/PRLR-JAK2-STAT5信号传导通路的影响

目的观察自拟柴郁寄生汤对高催乳素血症(HPRL)模型大鼠卵巢组织PRL/PRLR-JAK2-STAT5信号传导通路的影响及其改善卵巢功能的机制。方法 Wistar大鼠60只皮下注射多巴胺受体阻断剂灭吐灵造成高催乳素血症模型。造模成功后按拉丁方法随机分为模型组、溴隐亭组、大剂量组、中剂量组、小剂量组各10只,并设正常组10只。中药高剂量组柴郁寄生汤剂量为18 g·kg^(1)·d^(1),中剂量组为9 g·kg^(1)·d^(1),低剂量组为4.5 g·kg^(1)·d^(1)。各药物组每只大鼠每次灌胃量均为2 ml。溴隐亭组给溴隐亭2 mg·kg^(1)·d^(1);模型组及正常组依据体质量予等容量蒸馏水灌胃;各组每日给药1次,连续给药30 d。治疗结束后将大鼠处死,量取大鼠卵巢体积;检测血清雌二醇(E_2)、促黄体生成素(FSH);通过Western blot及PCR法检测卵巢STAT、PRLR表达水平,以观察高催乳素血症环境对PRL/PRLR-JAK2/STAT5信号传导通路及卵巢功能的影响,并探讨其可能机制。结果与正常组比较,模型组大鼠血清PRL水平明皿升高,E_2、FSH水平均明显下降(P<0.05);卵巢STAT、PRLR蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组血清PRL水平均明显下降,血清E_2、FSH水平及卵巢STAT、PRLR表达水平均明显升高。不同治疗组间比较,中药中剂量组大鼠血清E_2、FSH水平改善最显明,卵巢STAT、PRLR蛋白表达明显最强(P<0.05),而PRL水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柴郁寄生汤治疗高催乳素血症对改善卵巢功能有良好疗效,其作用机制可能是调节卵巢PRL/PRLR-JAK2/STAT5信号传导通路相关因子的表达,进而改善E_2、FSH等生殖激素水平。

MiR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用

目的:探讨miR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用。方法:将ATDC5细胞分为4组:对照组、LPS组、NC mimics组、miR-467b mimics组。于转染培养48 h后收集细胞并进行后续实验:采用ELISA检测各组细胞TNF-α、IL-1β水平;采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-467b的表达水平;采用MTT法检测各组细胞的增殖能力;采用蛋白质印迹和qRT-PCR法检测各组细胞JAK/STAT信号通路相关基因的蛋白质及mRNA表达水平。结果:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞TNF-α、IL-1β的表达水平均显著升高、miR-467b的表达水平显著降低(P<0.05);MTT实验结果表明:LPS组在24、48、72 h的吸光度值显著降低(P<0.05)。蛋白质印迹结果发现:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-467b mimics组TNF-α、IL-1β的表达水平均显著降低而miR-467b的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-467b后,细胞在24、48、72 h的吸光度值显著升高(P<0.05),而STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:LPS刺激ATDC5细胞后可通过激活JAK/STAT3信号通路引起细胞炎性损伤,过表达miR-467b后可抑制JAK/STAT3信号通路的活化,降低ATDC5细胞的炎症水平。

补肾益髓生血法AA大鼠含药血清对大鼠造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响

目的:探讨补肾益髓生血法再生障碍性贫血(Aplastic Anemia,AA,简称再障)大鼠含药血清对大鼠骨髓造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响。方法:在前期整体动物实验的基础上,体外培养正常大鼠造血干细胞,诱导其定向红系分化,分为空白对照组、正常对照组、模型组、司坦唑醇组(康力龙组)、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组,在培养体系中加入含药血清干预4d后,提取红系细胞总RNA及蛋白,分别采用RT-PCR和Western blot检测细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,模型组细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01);与模型组相比,各治疗组JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01或P<0.05);滋肾生血组JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达高于益髓生血组和温肾生血组(P<0.05)。结论:补肾益髓生血法能够增强JAK2、STAT5的表达,可能通过影响JAK2/STAT5信号通路来促进红系细胞的分化成熟,其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。

有氧运动干预非酒精性脂肪肝小鼠肝脏JAK2/STAT5信号通路的变化

背景:酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路在脂质代谢中起重要作用,运动有效预防与治疗非酒精性脂肪肝与改善内脏脂质沉积和脂质代谢密切相关。目的:探讨有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路的影响及可能作用机制。方法:6周龄C57BL/6雄性小鼠48只,分为普通膳食组及高脂膳食诱导组(n=24),第10周末2组各随机抽取4只进行油红O染色观察肝脏病理形态变化。确定造模成功后,普通膳食组随机分为普通膳食+安静组、普通膳食+运动组(n=10);高脂膳食诱导组随机分为非酒精性脂肪肝+安静组、非酒精性脂肪肝+运动组(n=10),连续干预8周,直至实验结束。观察小鼠肝脏病理形态变化,检测小鼠肝脏组织泌乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、信号传导及转录激活因子5a、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化蛋白表达量。结果与结论:(1)与普通膳食+安静组相比,非酒精性脂肪肝+安静组肝细胞脂肪变性加重,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子信号通路蛋白表达量降低;(2)与非酒精性脂肪肝+安静组相比,非酒精性脂肪肝+运动组的肝细胞脂肪变性减轻,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路蛋白表达量升高;(3)肝脏病理形态指标与催乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化均呈显著负相关(P<0.05);(4)提示有氧运动干预可通过调节非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路,改善肝内脂质沉积及肝脏脂肪变性程度。

MAPK信号通路及STAT3、STAT5A/B在银屑病皮损中表达增高

目的检测寻常型银屑病患者皮损中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、蛋白S6激酶1(p70S6k)、核因子-кB(NF-кB)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)、信号传导及转录激活因子5(STAT5A/B)、钙反应元件结合蛋白(CREB)的蛋白表达情况,探讨这些因子在银屑病中的作用。方法收集27例寻常型银屑病患者皮损(银屑病组)及19例健康者皮肤组织(对照组),应用高灵敏MILLIPLEX MAP试剂及Luminex仪检测并定量9种因子的蛋白表达,比较两组之间的表达水平。结果 p38、ERK1/2、JNK、STAT3、STAT5A/B在银屑病组的表达量高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05);STAT5A/B与p38、ERK1/2、JNK、STAT3呈正相关(均P <0.05)。结论 JNK、p38、ERK1/2、STAT3、STAT5A/B在寻常型银屑病中表达增高,且STAT5A/B与p38、ERK1/2、JNK、STAT3有正相关性,表明STAT5A/B与MAPK因子互相作用,可能共同参与银屑病发病机制。

JAK2-STAT3/STAT5信号通路与儿童食物过敏CD4^+T淋巴细胞亚群变化的相关性研究

目的:探讨JAK2-STAT3/STAT5信号通路与儿童食物过敏CD4^+T淋巴细胞亚群变化的相关性。方法:收集2015年1月至2017年3月来我院就诊的食物过敏患儿78例,为过敏组;同期收集来我院体检的健康儿童78例,为对照组。并根据儿童年龄将过敏组和对照组分为A、B、C、D四组,其中A组≤1岁,B组1~3岁(不包括1岁),C组3~6岁(不包括3岁),D组6~11岁(不包括6岁)。采用流式细胞仪检测CD4^+T淋巴细胞亚群Th1、Th2、Th17和调节性T淋巴细胞(Treg)百分比,同时采用q PCR检测外周血单核细胞JAK2、STAT3、STAT5的mRNA水平,分析两组儿童上述CD4^+T淋巴细胞亚群和JAK2、STAT3、STAT5表达水平的差异,并进一步分析JAK2-STAT3/STAT5信号通路和CD4^+T淋巴细胞亚群的相关性。结果:对照组A组、B组、C组儿童Th1、Treg淋巴细胞百分比及Th1/Th2、Treg/Th17比值均明显高于过敏组患儿A组、B组、C组,而Th2、Th17淋巴细胞百分比均小于过敏组所对应的同年龄段患儿,随儿童年龄增大,两组间差异均明显减小,但差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组D组儿童和过敏组D组儿童上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。分别针对A、B、C三组患儿JAK2、STAT3、STAT5和CD4^+T淋巴细胞亚群水平进行相关性比较,Th1、Treg、Th1/Th2、Treg/Th17的相关性系数均<0(P<0.05),而Th2、Th17的相关性系数均>0(P<0.05),且上述三组的相关系数绝对值逐次减小。上述信号通路分子与CD4^+T淋巴细胞亚群水平在D组均无明显相关性。结论:低龄食物过敏儿童的JAK2-STAT3/STAT5信号通路存在明显活化和CD4^+T淋巴细胞亚群改变现象,JAK2-STAT3/STAT5信号通路可有效调控CD4^+T淋巴细胞亚群的分布,并伴随患儿年龄增大,上述作用相关性减弱并消失。

基于NFKB/STAT3信号通路探究防风多糖对过敏性鼻炎大鼠行为学、AQP5及鼻粘膜组织的影响

目的基于NF-κB/STAT3信号通路探究防风多糖对过敏性鼻炎大鼠行为学、AQP5及鼻粘膜组织的影响。方法选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(N)组,模型(M)组,糠酸莫米松(F)组,防风多糖(W)组,每组10只,采用卵清蛋白致敏法建立过敏性鼻炎模型,N组不建立该模型,建模成功后,对F组给予1喷/侧的糠酸莫米松喷鼻治疗,对W组灌胃600㎎/㎏的防风多糖,N组、M组同期给与灌胃同体积生理盐水,观察大鼠一般情况并对其行为学进行评分,HE染色法检测鼻黏膜组织病理形态,免疫组化法检测鼻黏膜组织中AQP5表达,免疫印迹法检测鼻黏膜组织中NF-κB/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果实验开始前各组大鼠均活动饮食正常且精神状态良好,未见流涕、喷嚏、挠鼻等症状,造模完成后,可见大鼠精神状态明显变差,进食及活动明显减少,且可见被毛凌乱无光泽,出现常见抓鼻动作,喷嚏频发,大量鼻分泌物流出鼻前孔,给药后,大鼠纳食摄水都逐渐恢复正常,精神状态良好,喷嚏、流涕、挠鼻等症状都较治疗前有明显缓解,均无脏器损伤,但各组大鼠体重无明显变化(P>0.05);与N组相比,M组行为学评分显著升高(P<0.05),与M组比较,F、W两组行为学评分显著降低(P<0.05),且W组比F组降低显著(P<0.05);N组大鼠鼻黏膜组织结构完整、平滑且排列整齐,腺体大小正常,未见明显上皮坏死脱落、炎性细胞浸润及明显血管扩张或充血现象,M组鼻黏膜上皮结构紊乱且不完整,可见鼻粘膜上皮细胞破坏变性,出现纤毛坏死甚至脱落现象,可见明显腺体增生、肿胀、出血及炎性细胞浸润,与M组相比,F组、W组病理状态明显改善,炎性细胞明显减少;与N组比较,M组鼻黏膜组织中AQP5蛋白表达显著降低(P<0.05),与M组比较,F组、W组鼻黏膜组织中AQP5蛋白表达显著升高(P<0.05),且W组比F组升高显著(P<0.05);与N组比较,M组鼻黏膜组织中NF-κB、P-NF-κB、STAT3、P-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05),与M组比较,F组、W组鼻黏膜组织中NF-κB、P-NF-κB、STAT3、P-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.05),且W组比F组变化显著(P<0.05),而B组与W组相比无明显差异(P>0.05),O组比B组降低明显(P<0.05)。结论防风多糖可有效改善过敏性鼻炎大鼠行为学及鼻黏膜病理形态,并可显著促进AQP5表达,其机制可能与抑制NF-κB/STAT3信号通路有关。

STAT5-ROS信号通路介导K562细胞伊马替尼耐药的机制研究

目的探讨信号转导与转录因子5-氧化物(STAT5-ROS)细胞信号转导通路在慢性髓细胞白血病细胞(K562)伊马替尼(IM)耐药中的作用机制。方法以浓度递增的方法诱导K562对IM产生耐药,CCK-8法检测其耐药性。RTPCR方法定量测定K562/G细胞中STAT5A和STAT5B m RNA表达。流式细胞术测定ROS和细胞凋亡水平。Western blot法检测细胞中总STAT5和p-STAT5蛋白表达。结果实验成功诱导K562/G耐药细胞,CCK-8法测定耐药倍数为80倍。细胞生长曲线显示20μmol/L IM作用于K562/G细胞48 h,活细胞数量减半。0.1μmol/L IM作用于K562细胞24 h,活细胞数量几乎为零。流式细胞检测K562/G细胞内ROS水平明显高于K562细胞(P=0.000 1),相同浓度IM作用于两株细胞相同时间,K562/G细胞凋亡比例低于K562(P<0.05)。RT-PCR结果显示K562/G细胞中STAT5A和STAT5B水平均高于K562(P=0.000 1、0.017 0)。Western blot结果表明K562/G细胞中STAT5蛋白水平显著升高(P=0.009 0)。结论 STAT5在慢性髓细胞白血病中高表达,STAT5-ROS通路的活化与K562细胞IM耐药密切相关。

lncRNA GAS5与JAK1/STAT3信号通路对大鼠心肌细胞缺氧损伤影响

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(growth arrest specific transcript 5 long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncRNA GAS5)与JAK1/STAT3信号通路在大鼠心肌H9C2细胞缺氧损伤中的调控作用,为心血管疾病的治疗提供实验基础。方法通过缺氧培养建立体外缺氧模型,以正常培养的H9C2细胞为对照,用RT-qPCR方法检测GAS5的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测炎症细胞因子,CCK-8法用于测定细胞活力。通过细胞活力、凋亡和炎症反应的变化来评估下调GAS5对缺氧心肌细胞的影响。采用RT-qPCR检测JAK1/STAT3信号通路中mRNA的表达,用酪氨酸激酶抑制剂(AG490)抑制JAK1/STAT3信号通路,探讨JAK1/STAT3信号通路对GAS5的表达水平缺氧细胞活力、凋亡和炎症的影响。结果(1)缺氧能够减低H9C2细胞活力,增加细胞凋亡和炎症的发生;(2)GAS5在缺氧诱导的细胞中表达较高,在缺氧H9C2细胞中下调GAS5可抑制细胞凋亡和炎症细胞因子,促进细胞活力;(3)JAK1/STAT3信号通路在缺氧细胞中被激活,并受到GAS5的调控。当JAK1/STAT3信号通路受到抑制时细胞活力会明显增加,细胞凋亡和炎症的发生会明显降低。结论GAS5可通过JAK1/STAT3信号通路调控H9C2细胞的缺氧损伤,GAS5的抑制剂可能与酪氨酸激酶抑制剂协同作用,保护心肌细胞免受缺氧损伤。

STAT5通路抑制剂对脂多糖诱导RAW264.7细胞的保护作用研究

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)5通路抑制剂对经脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达的影响。方法将处于对数期的RAW264.7细胞分为空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定iNOS mRNA的表达量,Western blot测定iNOS以及磷酸化STAT5(p-STAT5)的蛋白表达量。结果RAW264.7细胞培养24 h后,空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组以及STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞中NO的含量差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);低、中、高浓度STAT5通路抑制剂对RAW264.7细胞释放NO的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞iNOS mRNA以及蛋白质的表达量比较差异有统计学意义(F=123.59、23.37,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞p-STAT5/STAT5表达比较差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论STAT5通路抑制剂能够抑制RAW264.7细胞iNOS的表达以及NO的产生,其机制可能与抑制STAT5磷酸化的表达有关。

大鼠肾小球系膜细胞活性氧簇JAK2/STAT5通路与TIMP-1之间的关系及对其凋亡的影响

目的:探讨高糖(HG)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)活性氧簇(ROS)、JAK2/STAT5信号通路与金属蛋白酶1组织抑制剂(TI MP-1)之间的关系及对其凋亡的影响。方法:在HG培养条件下的RMC中,根据是否使用DPI(NADPH氧化酶特异性抑制剂,可抑制ROS产生)和AG490(JAK2特异性抑制剂)刺激24 h,将RMC分为HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组四组。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组RMC Bcl-xl、Cyclin D1、P27kip1、JAK2和TI MP-1 mRNAs的表达,Western blot检测胞浆中JAK2、STAT5及相应磷酸化蛋白的表达。结果:HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组的细胞总凋亡率分别为:(10.69±0.26)%、(20.52±0.51)%、(24.56±0.36)%和(26.01±0.28)%;加入AG490和(或)DPI后RMC总凋亡率明显升高(P<0.01),Bcl-xl、Cyclin D1、JAK2和TI MP-1 mRNAs表达显著减少,P27kip1 mRNA表达增加。AG490和(或)DPI可使各组RMC P-JAK2和P-STAT5的表达显著减少,尤其在加入DPI后减少更加明显。结论:HG条件下JAK2/STAT5信号通路受ROS调控;阻断ROS生成和(或)JAK2/STAT5信号通路,可使RMC TI MP-1 mRNA表达减少,凋亡增加。

SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌

目的研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌。方法培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA(miR)-203处理组,Western blot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC)5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量。结果在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P<0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P<0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P<0.05)。结论细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC。

HOXB5基因调控STAT3信号对膀胱癌细胞凋亡及免疫抑制因子的影响研究

目的:探讨HOXB5基因调控STAT3信号对膀胱癌细胞凋亡及免疫抑制因子影响及机制研究。方法:以正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1为对照,Western blot检测膀胱癌T24、5637和BIU-87细胞HOXB5的蛋白表达。将HOXB5的特异性siRNA(si-HOXB5组)转染T24细胞,同时转染无干扰的siRNA(NC组),并设置空白组,AG490作为STAT3信号通路抑制剂,48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率; Western blot检测各组细胞p-JAK2、p-STAT3、STAT3、Bax、VEGF和TGF-β1蛋白表达。结果:HOXB5在T24、5637和BIU-87细胞的蛋白表达均显著高于在SV-HUC-1细胞中的表达(P<0. 05)。转染si-HOXB5的T24细胞HOXB5蛋白表达显著低于空白组(P<0. 05)。与NC组比较,si-HOXB5组细胞凋亡率显著升高,p-JAK2、pSTAT3、VEGF和TGF-β1的蛋白表达显著降低,Bax的蛋白表达显著升高(P<0. 05)。si-HOXB5+AG490组细胞凋亡率显著高于si-HOXB5组和AG490组(P<0. 05)。结论:HOXB5基因表达抑制可诱导膀胱癌细胞凋亡,下调免疫抑制因子VEGF和TGF-β1的表达,其机制与抑制STAT3信号通路有关。

PRMT5与JAKs/STATs通路的相互作用及其机制的研究进展

蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)属于Ⅱ型甲基转移酶,主要催化组蛋白和非组蛋白物质的精氨酸残基的对称二甲基化修饰。PRMT5通过表观遗传学调控靶基因的表达或信号分子的翻译后修饰,从而参与多种细胞进程。PRMT5可能是一种癌基因,并且通过多种肿瘤抑制基因或者信号分子的修饰导致肿瘤的发生。骨髓增殖性肿瘤(MPN)中普遍存在JAK2基因的突变并且导致Janus激酶(JAKs)/信号转导和转录激活因子(STATs)信号通路的激活,JAKs/STATs在MPN的发病机制中起着重要的作用,而且有证据表明PRMT5在MPN发展中有重要作用。