牦牛雌激素受体ERα和ERβ基因分子特征及组织表达研究

为研究牦牛雌激素受体(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同组织中的表达差异.根据NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列,设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛ERα和ERβ基因序列,同时利用荧光定量PCR技术检测ERα和ERβ基因在牦牛不同组织的表达分布.结果表明,分别获得2 100 bp ERα(Gen Ban K登录号:KJ011123)和1 791 bp ERβ(Gen Ban K登录号:KJ011124)基因序列,其中ERα的ORF为1 658 bp,编码596个氨基酸,ERβ的ORF为1 584 bp,编码527个氨基酸.多重序列分析表明,牦牛ERα和ERβ与普通牛、原鸡、人、小鼠、大鼠、扬子鳄、蟾蜍及斑马鱼的氨基酸序列同源性分别为45.3%-99.5%和53.9%-99.1%.荧光定量PCR结果显示,ERα和ERβ基因在牦牛的各种组织中均有表达,且除睾丸外,ERα在输卵管、子宫及乳腺中的表达高于ERβ.此外,就ERα而言,ERα在牦牛乳腺中表达最高,子宫、输卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、肾及睾丸相对表达较低.而牦牛ERβ基因在卵巢中表达最高,子宫和输卵管次之,心、肝、脾、肺、肾、睾丸及乳腺表达较低.为进一步了解牦牛ERα和ERβ基因的生物学功能及其分子繁殖机制提供了基础.

小鼠ERβ基因片段的克隆及其在胚胎发育中的表达

为探讨ERβ在小鼠胚胎发育过程中的表达,首先设计ERβ引物并扩增ERβ基因片段,构建ERβ/pGEM-3Z重组质粒进行克隆,分别用EcoRⅠ和HindⅢ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶合成地高辛标记的(dig)正、反义RNA探针。然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERβ在小鼠胚胎中的表达。运用该探针检测到ERβ基因在10.5dpc胚胎的脑、脊神经管、生殖脊、心包、肢芽及颌弓部位表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、延髓、脊髓、肢芽中表达。推测ERβ基因可能在小鼠胚胎性别分化过程中起调节作用;可能在小鼠胚胎神经管的早期区域化过程中起作用并在3个原始脑泡进一步分化及脊髓的分化过程中起作用;可能在小鼠胚胎肢芽中的骨与软骨的形成与分化中起调控作用;可能在小鼠胚胎心脏发育过程中起作用,可能在小鼠胚胎颌弓的表面分化过程中起调控作用。

ERβ基因表达及多态性与胃癌发生发展的相关性研究

目的:研究ERβ基因表达及多态性与胃癌发生发展的相关性。方法:以100例原发性胃癌为实验组,90例胃溃疡为对照组,免疫组织化学SP法检测ERβ蛋白,限制性酶切法检测ERβ基因CA重复序列多态性和G1082A多态性。结果:ERβ实验组和对照组阳性率分别为68.0%和23.3%,差异有统计学意义(P<0.01),并且分化程度低、浸润深、有淋巴结转移和5年死亡者的ERβ阳性率分别高于分化程度高、浸润浅、无淋巴结转移和5年生存者,且Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ期(P<0.01,P<0.05),而与初复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关(P>0.05)。ERβ基因CA重复序列对照组和实验组基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),两组基因型SS、SL、LL分布和等位基因S、L频率的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ERβG1082A多态性中,RsaⅠ和AluⅠ酶切分析:实验组和对照组均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。两组基因型rr、Rr、RR分布和等位基因r、R和a、A频率的比较差异无统计学意义(P>0.05);而实验组aa基因型频率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且该基因型与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、5年生存情况密切相关(P<0.05),与肿瘤初复发、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关(P>0.05),而等位基因频率中仅a/A与肿瘤的分化程度、浸润深度密切相关(P<0.01)。结论:ERβ与胃癌的发生、分化程度、浸润深度、转移及5年存活率密切相关,并且ERβ的aa基因型和等位基因a/A与胃癌的关系极大。

产后抑郁与雌激素受体β基因单核苷酸多态性的关联研究

目的探讨产后抑郁可能存在的雌激素受体β(Estrogen Receptor Beta,ERβ)基因遗传易感性。方法从刚进行过临床试验的746例连续整群抽样的产妇整体中,随机选择产后抑郁者68例和非产后抑郁者93例,采用聚合酶链反应-限制性酶切多态性(PCR-RFLP)的方法进行ERβ的2个SNPs(rs1256030和rs3020444)基因分型。采用病例-对照关联分析和两点单体型关联分析获得产后抑郁的遗传易感性。结果ERβ基因rs3020444(T/C)多态"T/T"基因型与产后抑郁关联,导致产妇患产后抑郁的风险是其它基因型的2.91(1.22-6.91)倍(P<0.05);"T"等位基因导致产妇患产后抑郁的风险是"C"等位基因的2.72(1.19-6.18)倍(P<0.05)。未发现rs1256030(C/T)的等位基因或基因型与产后抑郁存在关联。基于rs1256030(C/T)和rs3020444(T/C)的单体型"C-C"对产后抑郁具有保护作用,OR=0.306(0.113-0.827),P=0.019。结论ERβ基因有可能参与了产后抑郁的发病。但需要扩大样本进一步验证。

性激素浓度、雌激素受体及其β基因多态性与青年人胃腺癌发生发展的相关性研究

目的:探讨性激素浓度及其受体和雌激素受体β(ERβ)基因多态性与青年人胃腺癌发生发展的关系。方法:以原发性青年胃腺癌患者男女各108例为实验组,随机抽取住院手术胃溃疡患者男女各80例为对照组,用放射免疫法(RIA)检测两组血清性激素水平;用免疫组织化学法(SP法)检测两组雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达状况,并用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术(PCR-RFLP)检测ERβ基因多态性。结果:实验组血清雄激素高于对照组,但雌激素低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.0001)。实验组男女性患者,在TNM分期之间差异无统计学意义(P>0.05),但雄激素递减,雌激素递增;而随分化程度降低、淋巴结转移阴性和阳性之间,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组ERα和ERβ均不表达,而实验组ERα和ERβ阳性率分别为57.4%(124/216)和15.7%(34/216),经统计学处理具有显著性差异(P<0.0001),其中分化程度低、有淋巴结转移者、浸润程度深的阳性率高于分化程度高、无淋巴结转移者、浸润程度浅的,且TNMⅢ期高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.001)。PCR-RFLP检测中,用Rsa I酶切显示实验组RR和Rr基因型显著高于rr型,并以RR基因型最高(P<0.0001),且分化程度低、有淋巴结转移和浸润越深者RR高,TNM分期Ⅲ期高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.0001);Alu I酶切显示各基因型差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清性激素水平改变是影响胃腺癌变和易感性的重要因素之一,ERβ基因多态性可能与胃癌的发生发展密切相关。

荧光定量RCR检测比格犬雌激素β受体mRNA在间情期与发情期表达量的差异

目的对比格犬发情期与间情期ERβ基因在性腺组织器官的变化状况进行荧光定量,明确ERβ基因在发情期与间情期下丘脑-垂体-性腺轴上的表达量差异情况,为深入研究比格犬发情机制提供基础。方法作为调控生殖的关键基因,ERβ基因位于比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上,因此分别取处于发情期和间情期的比格犬,提取下丘脑、垂体、卵巢和子宫的RNA,反转录后对ERβ基因mRNA的表达量进行荧光定量PCR检测。结果间情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA的表达量分别是发情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA表达量的0.35倍、0.17倍、0.44倍、0.43倍。结论 ERβ基因在处于发情期的比格犬下丘脑-垂体-性腺轴内表达量均上调。

TFF2、ERa和ERβ在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的:研究三叶因子2(Trefoil factors2,TFF2)及雌激素受体ERa,ERβ在子宫内膜癌、子宫内膜不不典型增生及正常子宫内膜组织中的表达并探讨其临床意义。方法:应用免疫组化法对14例正常子宫内膜组织、22例子宫内膜不典型增生及82例子宫内膜癌病例中TFF2,ERa和ERβ的蛋白表达进行检测,观察在不同子宫内膜组织中TFF2,ERa和ERβ蛋白的表达情况。结果:TFF2在正常子宫内膜中的阳性表达率为85.7%(12/14),在不典型增生组织中的阳性表达率72.7%(16/22),在子宫内膜癌中的阳性表达率为57.3%(47/82),TFF2蛋白表达强度在正常、不典型增生和内膜癌组间比较有统计学差异(P<0.05)。TFF2蛋白表达与肿瘤的分化程度,肿瘤的分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与浸润程度无关。ERa在正常子宫内膜中的阳性表达率为92.8%(13/14),在不典型增生组织中的阳性表达率为86.4%(19/22),在子宫内膜癌中的阳性表达率为53.7%(44/82),ERa蛋白表达强度在正常,不典型增生和内膜癌组间比较有统计学差异(P<0.05),ERa蛋白表达与肿瘤的分化程度和浸润程度有关(P<0.05),与肿瘤的分期和淋巴结转移无关。ERβ在14例正常子宫内膜组织中ERβ蛋白阳性表达率为78.6%(11/14),在子宫内膜不典型增生中的蛋白阳性表达率为72.7%(16/22),在82例子宫内膜癌组织中ERβ蛋白阳性表达率为48.8%(40/82),ERβ蛋白表达强度在正常、不典型增生和内膜癌组间比较有统计学差异(P<0.05),ERβ蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润程度有关,与肿瘤的分期和淋巴结转移无关。结论:TFF2、ERa和ERβ在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌中的表达逐渐降低,为进一步研究在子宫内膜癌诊治中的作用提供依据。

ERβ基因多态性与新疆维吾尔族和汉族女性乳腺癌相关性研究

目的雌激素受体β基因（estrogen receptorp，ERβ）为雌激素受体（estrogen receptor，ER）亚型之一，有2个常见多态位点，不同个体ERβ的表达水平和功能可能受其基因多态性的影响，本研究探讨ERβ基因RsaI多态性与新疆维吾尔族和汉族女性乳腺癌易感性的关系。方法选择2013-01-01—2014-09—30新疆医科大学附属肿瘤医院初次诊断为原发性乳腺癌的维吾尔族患者130例和汉族患者120例，选择本院同期健康体检者维吾尔族125名和汉族118名。应用聚合酶链反应一限制性内切酶片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR—RFLP）方法检测入选对象ERβ基因RsaI位点多态性，比较该位点多态性与新疆维吾尔族和汉族女性乳腺癌易感性的关系。结果维吾尔族和汉族两民族病例组、对照组基因型分布及等位基因频率差异均有统计学意义，P〈0．05。在维吾尔族中，病例组与对照组的基因型分布差异及等位基因频率差异无统计学意义，P〉0．05；在汉族中，病例组与对照组的基因型分布及等位基因频率差异均有统计学意义，P〈0．05。以rr基因型为对照，非条件Logistic回归分析发现，汉族妇女中，无多产史（OR=0．466，95％CI为0．234～0．928，P〈0．05）和无乳腺良性病史（OR=0．421，95％CI为0．204-0．869，P〈0．05）的Rr型乳腺癌发病风险降低。结论维吾尔族和汉族两民族ERβ基因RsaI基因型分布和等位基因频率差异有统计学意义。携带Rr基因型可能降低新疆汉族妇女乳腺癌易感性。

雌激素受体基因多态性与慢性乙型肝炎易感性的相关性

目的探讨人群中和ERβ基因多态性与慢性乙型肝炎易感性之间的关系。方法选取112例慢性乙型肝炎患者和100例健康对照者，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）分析法检测该人群中ERa和ERβ基因多态性。结果与对照组比较、慢性乙型肝炎组ERa各基因型的频率分布有差异，具有统计学意义；与对照组比较，慢性乙型肝炎组ERβ各基因型的频率分布无差异，没有统计学意义。经Logistic回归分析，与携带肼dPvuⅡ C／C者比较．携带ERaPvu II C／T者发生慢性乙型肝炎的危险性为OR：1．86（95％CI：1．077～3．213）；与携带ERaXbnIGIG者比较，携带ERaXbaIA／G者发生慢性乙型肝炎的危险性为OR=4．2（95％CI：2．360～7．475）：结论ERdnMⅡ、职“XbaI基冈多态性与慢性乙型肝炎的易感性相关：EPq3RsaI、ERβAlu I基因多态性与慢性乙型肝炎的易感性没有相关性．