牦牛雌激素受体ERα和ERβ基因分子特征及组织表达研究

为研究牦牛雌激素受体(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同组织中的表达差异.根据NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列,设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛ERα和ERβ基因序列,同时利用荧光定量PCR技术检测ERα和ERβ基因在牦牛不同组织的表达分布.结果表明,分别获得2 100 bp ERα(Gen Ban K登录号:KJ011123)和1 791 bp ERβ(Gen Ban K登录号:KJ011124)基因序列,其中ERα的ORF为1 658 bp,编码596个氨基酸,ERβ的ORF为1 584 bp,编码527个氨基酸.多重序列分析表明,牦牛ERα和ERβ与普通牛、原鸡、人、小鼠、大鼠、扬子鳄、蟾蜍及斑马鱼的氨基酸序列同源性分别为45.3%-99.5%和53.9%-99.1%.荧光定量PCR结果显示,ERα和ERβ基因在牦牛的各种组织中均有表达,且除睾丸外,ERα在输卵管、子宫及乳腺中的表达高于ERβ.此外,就ERα而言,ERα在牦牛乳腺中表达最高,子宫、输卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、肾及睾丸相对表达较低.而牦牛ERβ基因在卵巢中表达最高,子宫和输卵管次之,心、肝、脾、肺、肾、睾丸及乳腺表达较低.为进一步了解牦牛ERα和ERβ基因的生物学功能及其分子繁殖机制提供了基础.

ERβ基因表达及多态性与胃癌发生发展的相关性研究

目的:研究ERβ基因表达及多态性与胃癌发生发展的相关性。方法:以100例原发性胃癌为实验组,90例胃溃疡为对照组,免疫组织化学SP法检测ERβ蛋白,限制性酶切法检测ERβ基因CA重复序列多态性和G1082A多态性。结果:ERβ实验组和对照组阳性率分别为68.0%和23.3%,差异有统计学意义(P<0.01),并且分化程度低、浸润深、有淋巴结转移和5年死亡者的ERβ阳性率分别高于分化程度高、浸润浅、无淋巴结转移和5年生存者,且Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ期(P<0.01,P<0.05),而与初复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关(P>0.05)。ERβ基因CA重复序列对照组和实验组基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),两组基因型SS、SL、LL分布和等位基因S、L频率的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ERβG1082A多态性中,RsaⅠ和AluⅠ酶切分析:实验组和对照组均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。两组基因型rr、Rr、RR分布和等位基因r、R和a、A频率的比较差异无统计学意义(P>0.05);而实验组aa基因型频率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且该基因型与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、5年生存情况密切相关(P<0.05),与肿瘤初复发、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关(P>0.05),而等位基因频率中仅a/A与肿瘤的分化程度、浸润深度密切相关(P<0.01)。结论:ERβ与胃癌的发生、分化程度、浸润深度、转移及5年存活率密切相关,并且ERβ的aa基因型和等位基因a/A与胃癌的关系极大。

中国成都汉族人群ERβ基因遗传多态性研究

目的：研究ERB基因单核苷酸多态性（rs1256049 1082G〉A，rs4986938 1730G〉A和rs928554 Cx＋56A〉G）在中国成都汉族正常人群中的分布，同时比较不同种族间ERβ基因型及等位基因频率分布的差异。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测150名中国成都汉族人基因多态性，并与国际人类基因组单倍型图计划中的不同种族研究结果进行比较。结果：在中国成都汉族人群中，ERB基因rs1256049 1082G〉A位点GG、GA、AA基因型频率分别为50．7％、46．7％、2．6％，G、A等位基因频率分别为61．3％、38．7％；rs4986938 1730G〉A位点GG、GA、AA基因型频率分别为59．3％、40．0％、0．7％，G、A等位基因频率分别为79．3％、20．7％；rs928554Cx＋56A〉G位点AA、AG、GG基因型频率分别为36．0％、47．3％、16．7％，A、G等位基因频率分别为59．7％、40．3％。与国际人类基因组单倍型图计划中的不同种族相比，rs1256049 G〉A位点基因型和等位基因频率在中国成都汉族与欧洲和非洲人群的差异具有统计学意义（P〈0．05）；rs4986938 G〉A位点在各人群中的分布差异有统计学意义，而rs928554 A〉G位点基因型和等位基因频率在中国成都汉族与非洲人群的差异具有统计学意义（P〈O．05）。结论：ERp基因单核苷酸多态性（rs1256049 1082G〉A，rs4986938 1730G〉A和rs928554 Cx＋56 A〉G1在不同种族间的分布存在明显差异。

比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选

目的筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。

荧光定量RCR检测比格犬雌激素β受体mRNA在间情期与发情期表达量的差异

目的对比格犬发情期与间情期ERβ基因在性腺组织器官的变化状况进行荧光定量,明确ERβ基因在发情期与间情期下丘脑-垂体-性腺轴上的表达量差异情况,为深入研究比格犬发情机制提供基础。方法作为调控生殖的关键基因,ERβ基因位于比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上,因此分别取处于发情期和间情期的比格犬,提取下丘脑、垂体、卵巢和子宫的RNA,反转录后对ERβ基因mRNA的表达量进行荧光定量PCR检测。结果间情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA的表达量分别是发情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA表达量的0.35倍、0.17倍、0.44倍、0.43倍。结论 ERβ基因在处于发情期的比格犬下丘脑-垂体-性腺轴内表达量均上调。