ER拮抗剂对Ishikawa细胞中p57^(kip2)、Cyclin D1表达及形态变化的影响研究

目的:研究雌激素受体(ER)拮抗剂对人子宫内膜样癌(EC) Ishikawa细胞(高分化)形态变化及细胞中p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达情况的影响,探讨女性激素调控、细胞周期调控和EC发生、发展的影响。方法:分别用含雌二醇(E2)、他莫昔芬(TAM)、氟维司群(Faslodex,ICI182780)、E2+TAM、E2+ICI182780的培养基培养Ishikawa细胞,用不含药物的培养基作为对照。培养24、48、72、96h后,MTT法观察细胞增殖情况,培养24、48、72h后,通过光镜和电镜观察细胞的形态变化,Western blot法检测p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT结果显示,与对照组比较,E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组Ishikawa细胞增殖活性降低,以E2+ICI182780组更甚(P<0.05);与E2组比较,E2+ICI182780组的细胞增殖活性降低(P<0.05);实验组及对照组细胞的增殖活性均随着药物作用时间延长而增强(P<0.05)。光镜下:与对照组比较,E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组细胞密度降低,以E2+ICI182780组更甚,TAM组则稍增加;与E2组比较,E2+ICI182780组细胞密度降低,E2+TAM组则增加;各组细胞形态变化均不明显。电镜下:与对照组比较,E2组部分细胞可见内质网、线粒体明显肿胀,其余各组内质网呈不同程度肿胀,可见凋亡现象;与E2组比较,TAM组、ICI182780组内质网肿胀较轻,E2+TAM、E2+ICI182780组肿胀明显。Western blot结果示:与对照组比较,随着药物作用时间延长,p57^(kip2)蛋白在E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组表达逐渐增加,其中E2+ICI182780组表达最高(P <0. 05); Cyclin D1、CDK4蛋白则在E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组表达逐渐降低,其中E2+ICI182780组表达最低(P <0. 05);与E2组比较,p57^(kip2)蛋白在E2+ICI182780组表达增加,在E2+TAM组表达降低(P<0.05); Cyclin D1、CDK4蛋白在E2+ICI182780组表达降低,在E2+TAM组表达增加(P<0.05)。结论:ER拮抗剂ICI182780单独或联合使用雌激素,可能通过诱导p57^(kip2)蛋白表达,下调Cyclin D1、CDK4蛋白表达,达到阻碍细胞周期进程,抑制Ishikawa细胞增殖的作用,且对细胞损伤较重; TAM单独或联合应用雌激素,可能通过上调Cyclin D1、CDK4蛋白表达,下调p57^(kip2)蛋白表达,对Ishikawa细胞产生较弱的促增殖作用,从而发挥TAM的弱雌激素样作用。ICI182780可能比TAM更适合用于EC患者的内分泌治疗,这为EC内分泌治疗药物的选择提供了一定的实验依据。

ER拮抗剂逆转乳腺癌多药耐药的实验研究

目的探讨ER拮抗剂（ICI 182，780）对人乳腺癌紫杉醇（PTX）耐药细胞株MCF-7／PTX耐药逆转的作用及其相关机制。方法应用Western印迹方法检测MCF-7／PTX细胞多药耐药基因（MDRl）编码的P-糖蛋白（P-gp）的表达；应用荧光酶标仪检测MCF-7／PTX细胞R-123外排。反映P-gp的泵功能；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度ICI 182，780及化疗药物（PTX、EPI、VCR）对MCF-7／PTX细胞的增殖抑制效应，并计算半数抑制浓度（IC50）；应用RT—PCR检测无毒剂量ICI182，780对MCF-7／PTX细胞内MDR1表达水平的影响。结果P-gp在MCF-7／PTX细胞较MCF-7细胞表达增高；无毒剂量ICI182，780通过降低MCF-7／PTX细胞内MDRl表达水平发挥耐药逆转作用;MCF-7／PTX细胞对PTX、ADR和VCR的耐药性较MCF-7细胞强，加入ICI182，780能增强MCF-7／PTX细胞对化疗药物的敏感性。结论ER拮抗剂ICI182，780可部分逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX细胞对PTX、EPI和VCR的耐药性，其逆转机制与抑制MDRI的表达有关。

基于神经网络抗乳腺癌候选药物优化建模

ERα在乳腺发育过程中具有十分重要的作用,被认为是治疗乳腺癌的重要靶标。在化合物候选过程中,其不仅需要具备良好的生物活性,还需要具备良好的药代动力学性质和安全性。本文采用数据挖掘技术,根据提供的ERα拮抗剂信息,构建化合物生物活性的定量预测模型和ADMET性质的分类预测模型,从而为同时优化ERα拮抗剂的生物活性和ADMET性质提供预测服务,具有一定的现实意义。