GSTP1和ERCC1基因多态性与食管癌患者放疗敏感性及预后的关系

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶P1基因(GSTP1)和切除修复交叉互补基因1(ERCC1)基因多态性与食管癌患者放疗敏感性及预后的关系。方法选取接受多西他赛单药化疗和同期放疗的食管癌患者200例,放疗1个疗程后根据完全缓解、部分缓解、稳定、进展情况将患者分为放疗敏感组(完全缓解、部分缓解)、放疗不敏感组(稳定、进展),进行3 a随访,记录患者生存情况。采集患者外周静脉血,提取基因组DNA并进行PCR扩增,分析GSTP1基因G28152A位点和ERCC1基因C118T位点的单核苷酸多态性(SNP)。取适量的患者食管癌组织,组织匀浆后应用酶联免疫吸附法测定髓磷脂碱性蛋白1(MBP-1)、磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、磷脂酶Cε1(PLCE1)基因蛋白浓度。结果GSTP1基因携带杂合型GA和突变型AA的食管癌患者放疗后完全缓解、部分缓解的比例明显高于野生型GG的患者,稳定、进展的比例明显低于野生型GG的患者(P<0.01)。ERCC1基因携带野生型CC的食管癌患者放疗后完全缓解、部分缓解的比例明显高于携带杂合型CT和突变型TT的患者(P<0.01)。GSTP1基因携带杂合型GA和突变型AA的食管癌患者放疗后生存率升高(P<0.05);ERCC1基因携带野生型CC的食管癌患者放疗后生存率明显升高(P<0.05)。放疗不敏感组凋亡相关基因MBP-1、PTEN表达水平明显降低,增殖相关基因Cyclin D1、PLCE1表达水平明显升高(P<0.05)。GSTP1基因携带杂合型GA和突变型AA的食管癌患者MBP-1、PTEN表达水平明显升高,Cyclin D1、PLCE1表达水平明显降低(P<0.01)。ERCC1基因携带野生型CC的食管癌患者MBP-1、PTEN表达水平明显升高,Cyclin D1、PLCE1表达水平明显降低(P<0.05)。结论GSTP1基因携带杂合型GA和突变型AA、ERCC1基因携带野生型CC的食管癌患者放疗预后较好,可能与上调凋亡相关基因MBP-1、PTEN表达,下调增殖相关基因Cyclin D1、PLCE1表达有关。

RNA干扰ERCC1基因表达对肺腺癌细胞A549/DDP顺铂耐药的影响

背景与目的核苷酸切除修复机制可修复顺铂(DDP)造成的DNA损伤,作为其中的关键酶之一,切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene1,ERCC1)的表达可能与DDP耐药有关。本研究旨在探讨小干扰RNA沉默ERCC1基因表达对肺腺癌耐药细胞A549/DDP药物敏感性的影响。方法将体外设计合成针对ERCC1的小分子RNA(siRNA)转染A549/DDP细胞,RT-PCR检测ERCC1 mRNA水平;Western blot检测ERCC1蛋白表达的变化;MTT检测RNA干扰后细胞药物敏感性改变。结果 ERCC1 RNAi干扰后ERCC1 mRNA表达指数降低,明显低于对照组,干扰后ERCC1 mRNA表达抑制率为90.4%。转染ERCC1 siRNA降低了ERCC1蛋白的表达水平。MTT显示分别用2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL顺铂处理细胞48h,转染ERCC1 siRNA细胞组较对照组敏感性明显增高,干扰前A549/DDP细胞IC50为12.49μg/mL,干扰后A549/DDP细胞IC50下降为9.27μg/mL。结论 ERCC1 siRNA干扰可以降低ERCC1的表达水平,并可提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

乳腺癌新辅助化疗对ERCC1基因表达的影响

目的探讨核苷酸切除修复基因家族成员ERCC1基因在乳腺癌中的表达情况和新辅助化疗对它的影响及临床意义。方法RT-PCR检测40例常规手术切除的乳腺癌标本和14例术前曾接受新辅助化疗的乳腺癌标本中ERCC1基因的表达。结果乳腺癌中ERCC1基因阳性表达率为35.0%,其表达水平与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、病理分型、组织学分级、ER、PR和HER-2均无明显相关性(P>0.05)。新辅助化疗组ERCC1基因的表达水平明显高于无化疗组(P<0.05)。结论ERCC1基因的表达不影响乳腺癌的临床病理特征,新辅助化疗可以上调ERCC1基因的表达水平,在临床后续化疗中应予重视。

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响

目的研究ERCC1基因表达与卵巢癌顺铂耐药的关系。构建携带ERCC1基因小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,观察RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响。方法RT-PCR方法检测COC1、COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达,基因重组技术构建携带ERCC1小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,脂质体法转染COC1/DDP细胞,RT-PCR及westernblot方法检测转染后细胞内ERCC1mRNA和蛋白的表达,MTT法检测转染后细胞对顺铂敏感性的改变。结果COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达明显高于COC1细胞。重组质粒转染后,COC1/DDP细胞中ERCC1mRNA和蛋白表达显著下调。转染后细胞对顺铂的敏感性显著增加。结论COC1/DDP中ERCC1基因表达增强与卵巢癌顺铂耐药相关。RNA干扰抑制ERCC1基因表达能增加卵巢癌耐药细胞COC1/DDP对顺铂的敏感性。

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞耐药的影响

目的:观察RNA干扰沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞耐药的影响。方法:体外合成靶向于ERCC1基因的小干扰RNA(ERCC1-siRNA),用脂质体法转染至卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP,RT-PCR方法检测转染前后细胞内ERCC1 mRNA的表达,W estern blot方法检测ERCC1基因蛋白表达的改变,MTT实验检测转染前后COC1/DDP细胞对顺铂敏感性的变化。结果:转染ERCC1-siRNA后,COC1/DDP细胞中ERCC1基因的mRNA和蛋白表达均明显减少。RNA干扰联合顺铂用药能明显提高COC1/DDP细胞对顺铂的敏感性。结论:RNA干扰ERCC1基因能明显抑制COC1/DDP细胞内ERCC1基因mRNA和蛋白的表达,增加COC1/DDP细胞对化疗药顺铂的敏感性。

肺癌细胞与血液细胞ERCC1基因的表达及其临床意义

目的探讨铂类药物相关的切除修复交叉互补基因1(ERCC1)mRNA在不同病理组织学类型肺癌细胞及其对应患者血液细胞中的表达水平和临床意义。方法收集105例肺癌标本石蜡组织及其对应的血液样本,其中腺癌73例,鳞状细胞癌22例,小细胞癌10例,利用实时荧光定量PCR技术检测肺癌石蜡组织和对应血液样本中ERCC1 mRNA的表达水平,分析其在肺癌不同病理组织学类型中的表达差异。结果 105例肺癌石蜡组织中ERCC1 mRNA表达为4.579±1.926,对应的血样中为8.324±1.280,差异有统计学意义(P<0.05)。ERCC1 mRNA在鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌中的表达分别为4.366±1.822、4.724±1.434和4.366±1.822,差异无统计学意义;在对应的血液细胞中表达分别为8.146±1.501、8.336±1.928和8.664±1.848,差异亦无统计学意义。3种病理组织学类型肺癌细胞ERCC1 mRNA表达水平与对应血液细胞相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌细胞和血液细胞中ERCC1 mRNA表达水平无相关性(r=0.329,P>0.05)。结论根据肺癌病理组织学类型选择铂类化疗并无指导意义,需要进一步进行ERCC1 mRNA的个体化检测,目前尚不能用血液细胞代替肿瘤组织细胞检测ERCC1 mRNA表达水平以评价铂类药物的疗效及毒副反应。

ERCC1基因表达与磁性Fe_3O_4纳米颗粒逆转卵巢癌细胞耐药性的关系

目的探讨磁性Fe3O4纳米颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)的耐药性的可能性及其机理。方法将SKOV3/DDP分为对照组、顺铂组、Fe3O4-MNPs组、顺铂+Fe3O4-MNPs组等4个组,流式细胞技术测定细胞凋亡、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测细胞内顺铂的含量,及RT-PCR检测切除DNA修复基因ERCC1 mRNA在SKOV3/DDP中的表达。结果在顺铂+Fe3O4-MNPs组中,细胞凋亡率及细胞内铂含量均高于顺铂组(P<0.05);ERCC1 mRNA的表达明显低于顺铂组(P<0.05)。结论Fe3O4-MNPs可以逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,其作用可能是通过提高细胞内铂浓度、下调ERCC1表达来逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药。

ERCC1基因多态性与非小细胞肺癌预后的相关性

目的研究证实ERCC1基因多态性与非小细胞肺癌预后的相关性。方法对119例接受胸部根治性放疗的非小细胞肺癌患者进行ERCC1基因分型,统计分析其与患者放疗后总生存的相关性。结果 Codon118基因型频率分别为TT45.4%(54/119)、TC39.5%(47/119)、CC15.1%(18/119)。C8092A基因型频率分别为CC48.7%(58/119)、CA39.5%(47/119)、AA11.8%(14/119)。Condon118的TT基因型与CT/CC基因型患者总生存的差异具有统计学意义(59.3%vs75.4%,P=0.034)。而C8092A的CC基因型与CA/AA基因型患者总生存的差异无统计学意义(62.1%vs78.7%,P=0.052)。结论 ERCC1Codon118多态性可能与非小细胞肺癌患者预后相关联。

非小细胞肺癌组织中ERCC1基因的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织ERCC1基因mRNA表达情况及其临床意义。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测82例肺癌组织、36例癌旁组织及15例良性组织中ERCC1基因mRNA的表达情况。结果 ERCC1基因在NSCLC患者癌、癌旁及良性组织中均有表达,分别为54.9%(45/82)、44.4%(16/36)和73.3%(11/15),三者总体差异无统计学意义(P>0.05)。在临床、病理等特征中腺癌表达率63.0%(34/54)高于鳞癌39.3%(11/28),差异有统计学意义(P<0.05)。与其他临床及病理特征均无关联(P>0.05)。结论 ERCC1基因mRNA在不同组织中的表达无显著差异,但其在广西人群中腺癌表达高于鳞癌,可指导患者术后铂类药物的个体化治疗。

SYBR荧光实时定量PCR检测NSCLC中ERCC1基因表达

目的:建立检测核苷酸切除修复基因ERCC1 mRNA的SYBR GreenI实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其癌缘肺组织中ERCC1的表达水平,研究肺癌组织中ERCC1的表达水平与各种临床病理特征之间的关系。方法:应用SYBR荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术检测30例肺癌组织和离肿瘤边缘5cm处正常癌旁组织中的ERCC1 mRNA表达水平,同时分析ERCC1表达水平在不同肺癌临床分期和病理类型各组间的关系。结果:肺癌中ERCC1 mRNA的表达(5.16±2.51)低于正常癌旁组织(11.17±4.79)(P<0.05)。但在不同肺癌临床分期、组织类型各组之间差异均无统计学意义。结论:所建立的SYBR GreenI实时定量PCR方法可以成功地检测ERCC1基因的表达量。

乳腺癌患者新辅助化学治疗后ERCC1基因表达情况研究

目的研究乳腺癌新辅助化学治疗(简称化疗)对核苷酸切除修复基因ERCC1表达的影响及临床意义。方法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常健康志愿者活检组织(18例),常规手术切除的乳腺癌标本(28例)和术前曾接受新辅助化疗的乳腺癌标本(18例)中ERCC1基因的表达,分析其表达与乳腺癌临床病理特征的相关性以及乳腺癌新辅助化疗对其的影响。结果无化疗组患者的ERCC1基因表达水平显著低于正常组(P<0.05)。无化疗组乳腺癌中ERCC1基因表达水平与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、病理分型、组织学分级、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮因子受体-2(HER-2)均无明显相关性(P>0.05)。新辅助化疗组ERCC1基因的表达水平明显高于无化疗组(P<0.05)。结论与正常人相比,乳腺癌患者ERCC1基因表达水平显著下降(P<0.05),而ERCC1基因的表达水平与乳腺癌的临床病理特征无相关性,患者经过新辅助化疗后ERCC1基因的表达水平可出现上调,对乳腺癌患者实施化疗治疗具有参考意义。

ERCC1基因C118T单核苷酸多态性与儿童晚期头颈部横纹肌肉瘤短期预后的相关性

目的探讨ERCC1基因C118T单核苷酸多态性与儿童晚期头颈部横纹肌肉瘤短期预后的相关性。方法对41例接受以铂类为主要药物化疗的晚期头颈部横纹肌肉瘤的患儿进行ERCC1基因检测,分析其C118T单核苷酸多态性及基因拷贝数与患儿短期预后的相关性。结果 ERCC1基因C118T突变类型为C/C占29.3%(12/41),C/T 36.6%(15/41),T/T 34.1%(14/41)。C/C基因拷贝数为1.151 8±0.265 0,C/T 0.694 8±0.184 0,T/T 0.679 2±0.178 0,C/C组与C/T+T/T组基因拷贝数的差异有统计学意义(P=0.000),且两组间短期预后差异亦有统计学意义(P=0.034)。结论晚期头颈部横纹肌肉瘤患儿ERCC1基因C118T单核苷酸多态性以C/T+T/T型为主,与C/C型相比,C/T+T/T型ERCC1基因表达水平更低,患儿对铂类化疗药物更加敏感,疗效更好,缓解率高,近期生存情况更佳。

ERCC1基因多态性与大肠癌化疗疗效相关性的研究进展

近年来，对大肠癌的研究和报道逐渐增多，对大肠癌的临床病理特征不断有新的认识。大肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，其发病率和病死率都很高^[1]。在世界范围内，大肠癌的发病率在男性肿瘤中居第四位，在女性肿瘤中居第五位。在中国，根据国家卫生部在2006年所做的统计数据显示，我国大肠癌死亡率已上升至恶性肿瘤死亡率的第五位，发病率呈逐年上升的趋势，人群发病率高峰表现在60-75岁，已经严重危害到人们的健康。时至今日。

胃癌组织中ERCC1基因的高甲基化及DNMT1的表达

目的探讨人切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1)基因启动子Cp G岛甲基化和DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因的表达与胃癌发生的关系及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测60例胃癌组织及其相应癌旁正常组织中ERCC1基因启动子区甲基化状态。同时应用逆转录聚合酶链反应(realtime RT-PCR)法和免疫组化(IHC)SP法分别检测ERCC1及DNMT1基因的mRNA和蛋白表达水平。结果胃癌组织中ERCC1基因启动子Cp G岛甲基化阳性率为68.3%,明显高于相应的癌旁正常组织(23.3%)。胃癌组织中ERCC1 mRNA阳性率显著低于癌旁正常组织(31.7%vs 71.7%,P<0.05),而胃癌组织中DNMT1 mRNA阳性率明显增高,差异均有统计学意义(78.3%vs 16.7%,P<0.05)。ERCC1 mRNA阴性表达的胃癌组织中基因启动子的甲基化率较ERCC1 mRNA阳性表达者明显升高,差异具有统计学意义(92.7%vs 15.8%,P<0.001)。结论 ERCC1基因启动子Cp G岛高甲基化及DNMT1基因表达上调可能参与胃癌的发生与发展。DNMT1可能调控ERCC1基因的甲基化。

腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用

目的探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用。方法采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流失细胞仪检测等方法,绘制SKOV3细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3细胞感染重组病毒前后其顺铂的IC50值、细胞凋亡形态及细胞各周期的分布。结果 (1)顺铂浓度与SKOV3细胞抑制率呈线性正相关,相关系数r=0.9905(P<0.05),顺铂IC50值为(7.76±0.37)μg/ml;腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达后,SKOV3细胞的生长受到一定程度的抑制;(2)与对照组相比,梯度浓度的重组腺病毒感染后,SKOV3细胞对顺铂的敏感性分别增加了9.4%、16.4%、23.2%、33.5%,呈剂量依懒性;(3)梯度滴度重组腺病毒表达载体联合顺铂作用于SKOV3细胞株,细胞凋亡显著增高;(4)重组腺病毒表达载体感染并联合顺铂用药,G1期细胞比例减小,S期细胞比例增大,细胞凋亡率进一步增高。结论重组腺病毒表达载体可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、调节肿瘤细胞周期分布等途径增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性。

鼻咽癌患者循环肿瘤细胞ERCC1基因表达与放化疗疗效及预后的相关性

目的探讨外周血循环肿瘤细胞(CTC)分析DAN切除修复交叉互补基因(ERCC)1的表达强度与患者放化疗疗效及预后的相关性。方法选取鼻咽癌初治患者42例,分别在诱导化疗前、放疗前、放疗后分别进行CTC细胞收集检测其ERCC1基因的表达;所有患者以多西紫杉醇+顺铂方案进行3个周期化疗;诱导化疗后即进行根治性放疗并同步化疗。完成全部治疗后按期进行随访并记录临床资料,随访结果均采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析患者不同时间ERCC1表达强度对疗效及预后的影响。结果诱导化疗前不同临床分期患者ERCC1表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。放疗前及放化疗后不同临床分期、诱导化疗周期数患者ERCC1表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。1年和2年生存率(OS)分别为97.1%、91.4%;中位生存期尚未成熟;1年无进展生存(DFS)和局部无复发生存(LRFS)均为100.0%,2年DFS为100.0%,2年LRFS为92.2%;以不同时间点检测的ERCC1表达强度作为观察指标,通过比较患者生存时间,在诱导化疗前,ERCC13种表达强度对应生存率无明显影响(P>0.05);在经过诱导化疗后、放疗前患者ERCC1基因的不同表达强度对生存率均有影响,差异均有统计学意义(P<0.05);在完成同步放化疗后,ERCC1基因的高表达者预后差,与低表达和中表达者比较差异均有统计学意义(P<0.05);而低表达和中表达者生存率比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.62,P=0.55)。结论CTC细胞中ERCC1基因表达通过影响患者放化疗疗效而影响患者预后。

ERCC1基因与非小细胞肺癌关系的研究进展

切除修复交叉互补基因1(ERCC1)是核苷酸切除修复系统的关键基因,切除修复包括铂类药物导致的DNA损伤、紫外线导致的DNA损伤等各种DNA损伤。研究发现其基因表达情况及其多态性与恶性肿瘤的发病、含铂方案的疗效及预后相关,本文着重综述ERCC1与非小细胞肺癌(NSCLC)之间的关系,包括与非小细胞肺癌的发生发展的关系、与铂类药物治疗肺癌疗效及预后的关系。

胃癌ERCC1基因甲基化与蛋白表达的关系及其意义

目的:检测胃癌组织、相应癌旁组织及正常胃组织中ERCC1蛋白表达情况,探讨ERCC1基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达的关系及其意义。方法:采用甲基化特异性PCR技术,检测30例胃癌组织、相应癌旁组织、10例正常胃组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态。采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织、相应癌旁组织及正常胃组织中ERCC1蛋白的表达情况。结果:胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛完全甲基化率为46.7%(14/30),部分甲基化率为30.0%(9/30),总甲基化率为76.7%(23/30),显著高于相应癌旁组织中该基因的甲基化率13.3%(4/30),差异有统计学意义(P<0.05)。10例正常胃组织中未检测到该基因的甲基化(0/10)。30例胃癌组织中ERCC1蛋白阴性表达率为70.0%(21/30),显著高于相应癌旁组织中蛋白阴性表达率33.3%(10/30),差异有统计学意义。10例正常胃组织中ERCC1蛋白均阳性表达。胃癌组织中发生ERCC1基因启动子CpG岛甲基化其ERCC1蛋白表达率明显低于胃癌组织中未发生ERCC1基因启动子CpG岛甲基化其ERCC1蛋白表达率。结论:ERCC1基因启动子CpG岛甲基化与其蛋白表达呈负相关,ERCC1基因启动子CpG岛甲基化可能是导致其蛋白表达下调的主要原因之一。

ERCC1基因多态性与食管癌的研究进展

核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation 1,ERCC1)是核苷酸切除修复(NER)系统的关键酶,其表达情况与食管癌的发生发展及铂类耐药有关。检测ERCC1基因多态性有助于制定食管癌个体化治疗。