SNF2家族新成员Ercc6l的cDNA克隆与表达分析(英文)

SNF2家族蛋白在基因组复制、修复与表达中具有重要作用 .报道了SNF2家族新成员Ercc6l (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiency,complementationgroup 6 like)的cDNA克隆、特性与表达分析 .通过表达序列标签 (EST)搜索和组装 ,获得了cDNA全长 4 0 0 2bp的新基因Ercc6l (GenBankAcc .NoAY172 6 88) ,然后通过RT PCR在小鼠胚胎心脏成功克隆了该基因 .Ercc6l在小鼠基因组中由两个外显子和一个内含子组成 ,定位于X染色体 ,最大开放阅读框 (ORF)编码一个含 12 4 0个氨基酸的假定蛋白质 .该假定蛋白质含有SNF2蛋白的 8个保守基序 (SNF2结构域 ) .通过与SNF2家族各亚家族的成员进行多重比对 ,初步确认Ercc6l属于ERCC6亚家族成员 .将Ercc6l编码区克隆到pEGFP C3然后转染HeLa ,3T3和B16细胞 ,融合蛋白主要定位于胞浆 .BLAST搜索检索出 6 9条小鼠EST与Ercc6l同源 ,这些EST主要来自胚胎和肿瘤组织 .对小鼠不同发育时期的多种组织进行RT PCR ,发现Ercc6l在胚胎期强表达 ,出生产后表达显著下调 .

发育相关基因Ercc6l的分子克隆与表达分析及其在酒精致畸中的作用

背景与目的 :在GeneBank中筛选新的小鼠发育相关基因 ,研究其在酒精致畸中的作用。材料与方法 :利用EST介导的基因克隆和表达谱分析进行新基因克隆、表达和同源性分析 ;利用RT-PCR、绿色荧光蛋白标记基因转染、全胚胎原位杂交、石蜡切片原位杂交和Northern杂交进行新基因的验证、亚细胞和组织定位及其在酒精致畸中的表达变化研究。结果 :成功克隆小鼠基因Ercc6l,其在胚胎期正常组织中强表达 ,在新生鼠表达明显减弱 ,在成年鼠几乎不表达。酒精染毒体内、外实验均显示畸变胚胎Ercc6l的表达显著降低。结论 :Ercc6l是小鼠胚胎发育相关基因 ,同时是酒精致畸作用的分子靶点。

ERCC6L在结直肠肿瘤中的表达及其对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨DNA解旋酶ERCC6L在结直肠肿瘤中的表达及其对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法利用GEPIA和UALCAN数据库分析ERCC6L在结直肠肿瘤组织中的表达情况;通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹(Western blotting)和免疫组织化学检测ERCC6L在结直肠肿瘤组织和细胞中的表达;分别用CCK8和侵袭实验检测ERCC6L对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。结果 ERCC6L在结直肠肿瘤组织和细胞系中高表达(P<0.05);用siRNA干扰ERCC6L表达后,结直肠肿瘤细胞的增殖和侵袭能力被显著抑制。结论 ERCC6L促进了结直肠肿瘤细胞的增殖和侵袭,有可能成为癌症治疗的潜在新靶点。

1pcDNA3.1-Ercc6l真核表达载体的构建及在P19细胞内的表达

目的构建Ercc6l的正、反义真核表达载体,并在P19胚胎癌细胞内瞬时表达,在细胞学水平对基因功能进行初步研究。方法KpnⅠ/XhoⅠ双酶切pGEM-T-Ercc6l获得目的基因Ercc6l,将其克隆到同样经过双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)Myc His6,重组质粒pcDNA3.1(+/-)-Ercc6l经菌落PCR和双酶切鉴定;脂质体介导法体外瞬时转染正义载体至P19细胞,RT-PCR检测基因在细胞内的表达活性情况。结果重组质粒经菌落PCR和KpnⅠ/XhoⅠ双酶切鉴定,表明真核表达载体构建正确;脂质体介导法瞬时转染正义载体至P19细胞后,检测表明转染细胞能够表达Ercc6l。结论成功构建了Ercc6l正、反义真核表达载体,其正义载体转染真核细胞后能在其中表达。

ERCC6L在肿瘤中的表达和作用

ERCC6L是一种新发现的DNA解旋酶,也被称为PLK1相互作用检查点解旋酶(PICH)。它最初在小鼠组织中被鉴定,并属于SNF2蛋白家族的成员之一。作为PLK1的底物,ERCC6L在控制细胞有丝分裂中扮演重要角色。很多研究报道了ERCC6L在肿瘤细胞中异常表达的情况。ERCC6L的异常表达可以通过促凋亡因子抑制细胞增殖或诱导凋亡。然而,由于肿瘤环境的差异和不同肿瘤复杂的调控机制,ERCC6L对不同肿瘤的进展影响也不尽相同。在某些肿瘤中,高表达的ERCC6L可能促进肿瘤的转移,而在其他肿瘤中,高表达的ERCC6L则可能抑制肿瘤的侵袭和转移。越来越多的证据表明,在不同的肿瘤环境中,ERCC6L通过多种复杂的调控机制,在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着复杂而不同的作用。因此,ERCC6L不仅可能成为一种有用的转移生物标志物,还可能成为研究肿瘤细胞代谢机制和治疗多种类型肿瘤的靶点。本文作者综述了ERCC6L在不同肿瘤中的表达、机制和功能的研究进展,并对ERCC6L在不同肿瘤中的表达情况进行了进一步的分析,为深入理解ERCC6L在肿瘤中的作用机制提供重要的参考。

干扰ERCC6L增强非小细胞肺癌细胞放疗敏感性

目的探讨切除修复交叉互补酶6L(ERCC6L)在非小细胞肺癌中的表达及其与放射敏感性的关系。方法Western blot和免疫荧光验证ERCC6L在肺癌细胞系中的表达水平及亚细胞定位;Western blot检测16对癌组织及癌旁组织中ERCC6L的表达;免疫组化的方法检测肺癌和X射线照射后肺癌组织中ERCC6L的表达;用ERCC6L特异性siRNA干扰其在A549细胞中的表达,用磷酸化-γH2AX荧光焦点检测DNA双链断裂损伤的修复情况。结果ERCC6L在肺癌组织的中表达水平高于癌旁组织,在A549细胞中干扰ERCC6L并经过X射线照射后,抑制DNA双链断裂损伤的修复能力。结论干扰ERCC6L可以增强非小细胞肺癌的放射敏感性。