前列腺癌组织中ERG蛋白的表达变化及意义

目的观察前列腺癌(PCa)组织中ERG蛋白的表达变化并探讨意义。方法选择144例PCa和100例良性前列腺增生(BPH)患者,取其前列腺组织,采用免疫组化Max Vision法检测ERG蛋白,并分析其与相关临床病理特征的关系。结果 PCa及BPH组织中ERG蛋白的阳性表达率分别为25.0%和0,两者比较,P<0.01;PCa组织中ERG蛋白表达与患者的年龄、术前前列腺特异性抗原值及远处转移无关(P均>0.05),与Gleason评分呈负相关(r=-0.175,P<0.05),Gleason评分≤7分组ERG蛋白表达率高于Gleason评分>7分组(P<0.05)。结论PCa患者前列腺癌组织中ERG蛋白表达升高,ERG蛋白的检测可能有助于PCa患者的鉴别诊断及病理分级。

前列腺癌中TMPRSS2-ERG融合基因和ERG蛋白表达及其意义

目的探讨前列腺癌(prostate cancer,PC)中TMPRSS2-ERG(T-E)融合基因和ERG蛋白表达及其与各临床病理参数和预后的关系。方法采用FISH和免疫组化技术分别检测145例PC穿刺标本中T-E融合基因和ERG蛋白的表达,以癌旁正常腺体为内对照。结果 145例PC中37例(25.5%)T-E融合基因阳性。T-E融合基因表达与患者年龄、术前血清PSA水平、Gleason评分、肿瘤有无远处转移和生存期均无相关性(P>0.05)。PC中ERG蛋白阳性率为24.8%(36/145)。ERG蛋白与术前血清PSA水平具有相关性(P<0.05);与患者年龄、Gleason评分、肿瘤有无远处转移和患者生存期均无相关性。结论T-E融合基因和ERG蛋白表达仅出现在PC中,而不出现于正常前列腺腺体,T-E融合基因和ERG蛋白可作为PC的特异性标志物。仅ERG蛋白表达与PSA水平相关,而T-E融合基因与临床病理参数和预后均无相关性。

前列腺癌主动监测期间组织ERG蛋白表达与肿瘤进展的关系

目的探讨前列腺癌患者组织ERG蛋白表达与肿瘤进展的关系。方法纳入2012年3月～2016年2月前列腺穿刺证实为前列腺癌且符合主动监测条件的56名患者,收集患者年龄、血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、格里森评分(GS)、临床分期等临床病理学参数,采用免疫组织化学的方法检测前列腺癌穿刺组织中ERG蛋白的表达。ERG蛋白表达与患者临床病理学特征之间的关系采用X^2检验,Kplan-meier生存分析模型及Cox回归模型用于分析ERG蛋白表达状态与前列腺癌进展间的关系。结果 56名患者中,48名纳入最后的研究,ERG蛋白表达阳性率37.5%(18/48)。Kplanmeier生存分析模型中,ERG蛋白阳性及阴性组中位组织学无进展生存期分别为32个月和48个月(X^2=4.476,P=0.034);中位PSA无进展生存期分别为21个月及26个月(X^2=4.272,P=0.039);在多变量分析中,穿刺组织ERG蛋白表达是前列腺癌主动监测期间进展的独立危险因素(Hr=2.024,P=0.044)。结论组织ERG蛋白的表达增加了主动监测前列腺癌进展的风险,通过对其检测和分析可以为制定个体化的主动监测方案提供参考。

拟南芥外源ERG基因的阳性苗的初步筛选

近来关于Era蛋白(E.coli ras-like protein)及其同源蛋白的研究较多,但其在真核生物中的功能仍不明朗,尤其是植物中相关研究报道尚少。拟南芥中有两个ERG蛋白,大小分别为437个氨基酸和427个氨基酸,分别用ERG437和ERG427表示。本文通过构建ERG基因的真核表达载体,利用农杆菌浸花法侵染拟南芥植株,筛选出阳性植株,为进一步定位观察和功能研究提供材料。

绿色荧光蛋白基因与hERG基因G604S突变共表达功能研究

目的观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因与h ERG(human ether-a-go-go-related gene)基因融合后是否影响h ERG通道的电生理特性。方法 HEK293细胞分别被转入pc DNA3-WT-h ERG和/或pc DNA3-G604S-h ERG,p EGFP-WT-h ERG和/或p EGFP-G604S-h ERG。激光共聚焦观察h ERG通道蛋白在细胞内的表达定位;膜片钳实验记录h ERG电流。结果在转染pc DNA3-WT-h ERG或p EGFP-WT-h ERG的细胞中,h ERG蛋白表达于胞质与胞膜;在转染pc DNA3-G604S-h ERG或p EGFP-G604S-h ERG的细胞中,h ERG蛋白仅在胞质表达。HEK293细胞转染pc DNA3-WT-h ERG后,h ERG电流的最大尾电流密度为(75.4±2.2)p A/p F,明显高于转染p EGFP-WT-h ERG的最大尾电流密度[(15.1±0.7)p A/p F,P<0.05]。共转染pc DNA3-WT-h ERG与pc DNA3-G604S-h ERG的最大h ERG尾电流密度明显高于p EGFP-WT-h ERG/p EGFP-G604S-h ERG的最大h ERG尾电流密度[(23.1±0.8)p A/p F vs(12.6±0.9)p A/p F,P<0.05]。此外,EGFP基因与野生型或突变h ERG基因融合后,明显改变了h ERG通道的电压依赖性激活及去失活特性。结论 EGFP基因与野生型或突变h ERG基因融合不影响h ERG通道蛋白在细胞内的表达定位,但明显改变了h ERG电流的大小、激活及去失活特性,因此检测突变h ERG通道的电生理功能时应避免使用绿色荧光蛋白基因质粒作为表达载体。

拟南芥悬浮细胞中ERG437蛋白的细胞定位的初步观察

近来在大肠杆菌中新发现的Era蛋白(E.coli ras-like protein)是一类新的GTP结合蛋白,研究表明Era蛋白参与调节细胞分裂、细胞周期以及部分细胞代谢过程。植物中相关研究报道尚少,推测ERG蛋白可能定位在线粒体,并且与种子的正常发育相关。本实验通过构建植物表达载体初步观察了ERG437蛋白在拟南芥悬浮细胞中的定位情况,同时利用CoxⅣ蛋白初步观察到绝大部分ERG437蛋白定位于线粒体。

拟南芥外源ERG基因的阳性苗的初步筛选

近来关于Era蛋白(E.coli ras-like protein)及其同源蛋白的研究较多,但其在真核生物中的功能仍不明朗,尤其是植物中相关研究报道尚少。拟南芥中有两个ERG蛋白,大小分别为437个氨基酸和427个氨基酸,分别用ERG437和ERG427表示。本文通过构建ERG基因的真核表达载体,利用农杆菌浸花法侵染拟南芥植株,筛选出阳性植株,为进一步定位观察和功能研究提供了材料。

膀胱尿路上皮癌组织中ERG蛋白表达水平与微血管密度和肿瘤分期相关性研究

目的:分析膀胱尿路上皮癌(BTCC)组织中ERG蛋白表达水平与微血管密度(MVD)和肿瘤分期的相关性。方法:选取62例BTCC患者的癌组织及癌旁组织石蜡标本,检测其ERG蛋白表达、程序性死亡受体配体-1(PD-L1)表达水平以及MVD水平。分析各蛋白阳性表达水平与肿瘤分期的关系,以及ERG、PD-L1蛋白与MVD的相关性。结果:BTCC癌组织中ERG阳性表达39例(62.90%),明显高于癌旁组织中的ERG阳性表达12例(23.08%)(P<0.05);BTCC癌组织中PD-L1阳性表达26例(41.94%),明显高于癌旁组织中的PD-L1阳性表达5例(8.06%)(P<0.05);BTCC癌组织的MVD水平明显高于BTCC癌旁组织(P<0.05)。ERG、PD-L1蛋白阳性表达率、MVD水平在病理类型、肿瘤分期、肿瘤数目中存在统计学差异,在浸润性癌、肿瘤高分期、多发性肿瘤中阳性表达率增高(均P<0.05)。ERG、PD-L1蛋白表达与MVD水平均呈正相关(r=0.426、0.357,P<0.05)。ERG蛋白表达与PD-L1呈正相关(r=0.512,P<0.05)。结论:ERG蛋白在BTCC癌组织中表达异常升高,其可能通过调节PD-L1蛋白表达,参与肿瘤血管的生成和恶性进展。

粗糙脉孢菌ERG-11蛋白抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

构建p ET-28a(+)-ERG-11重组质粒,表达6×His-ERG-11融合蛋白,制备ERG-11多克隆抗体。采用PCR技术扩增目的片段,插入p ET-28a(+)原核表达载体,并转入E.coli BL21(DE3)感受态表达融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化及分子筛纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,取血清后,采用间接ELISA法和Western blot法检测多克隆抗体的效价及特异性。成功构建了p ET-28a(+)-ERG-11表达载体,SDS-PAGE电泳显示成功诱导出以包涵体形式存在的6×His-ERG-11融合蛋白,两步纯化后得到纯度较高的抗原,间接ELISA法显示制备的多克隆抗体效价达到1∶512 000,Western blot显示具有较高特异性。成功实现了粗超脉孢菌ERG-11蛋白的原核表达,制备出一支兔抗粗超脉孢菌ERG-11的多克隆抗体。

前列腺癌细胞内TMPRSS2-ERG融合基因产物转录调控机制研究进展

前列腺癌在欧美国家男性中是最常见的恶性肿瘤,但前列腺癌的发生发展机制还未完全明确。在前列腺癌中,TMPRSS2-ERG融合基因具有较高的发生率,其促进ERG过表达,引起相应的靶基因和信号通路改变,如雄激素受体、斑点型锌指结构蛋白、Notch通路等。深入了解前列腺癌细胞中TMPRSS2-ERG融合基因产物转录调控机制,可以为前列腺癌的治疗提供新的药物作用靶点。

伴FUS/TLS∷ERG融合基因急性髓细胞白血病的研究现状

位于16p11.2的FUS/TLS基因与位于21q22.2的ERG基因融合形成FUS/TLS∷ERG,伴该融合基因急性髓细胞白血病(AML)是近年来报道的一类少见白血病,发生率<1%。FUS/TLS∷ERG融合蛋白由于FUS/TLS蛋白C末端结构域被ERG基因下游的DNA结合域取代而缺乏招募丝氨酸-精氨酸富集(SR)剪接因子的能力,导致RNA剪接的普遍减少。FUS/TLS∷ERG融合基因可显著增加髓系祖细胞的增殖和自我更新能力。该类AML患者临床特征包括发病年龄较轻,细胞形态学具有嗜酸性粒细胞增多、小巨核细胞增多、可见细胞吞噬和空泡现象等表现,免疫分型多表达CD56,可伴其他染色体异常和基因突变。伴FUS/TLS∷ERG融合基因AML患者疾病进展快、常规化疗难以获得完全缓解(CR),患者预后差,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是该类患者的首选方法,但其克服融合基因所致不良预后的潜力仍需要进一步评估,并且如何减少移植后复发仍然是一项难题,需要继续探索新的治疗方法以改善患者的预后。

前列腺癌ERG基因重排与蛋白表达及其与预后的关系

目的检测中国前列腺癌患者ETS相关基因(ERG)重排及蛋白表达情况,分析其与患者预后的关系。方法选取四川大学华西医院2009~2014年前列腺穿刺确诊的前列腺癌患者482例,采用荧光原位杂交法检测ERG基因重排情况,采用免疫组化染色法检测ERG蛋白表达情况。采用Spearman秩相关分析ERG基因重排与蛋白表达的相关性,采用χ~2检验分析ERG基因重排和蛋白表达与患者临床病理特征的关系,采用KaplanMeier法分析ERG基因重排和蛋白表达与患者预后的关系。结果 87例(18.0%)患者检出ERG基因重排,其中45例(51.7%)为转位重排,42例(48.3%)为缺失重排。74例(15.4%)患者表达ERG蛋白。ERG蛋白表达与基因重排正相关(r=0.849,P=0.000)。368例获得随访资料,ERG基因重排状态及蛋白表达水平与患者年龄、Gleason评分、初诊时前列腺特异性抗原(PSA)水平无关(P>0.05),但发生远处转移及进展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的病例中ERG蛋白表达率下降(P<0.05)。预后分析显示ERG基因重排及蛋白表达均不能提示预后。结论 ERG基因重排状态与蛋白表达情况均不能作为前列腺癌进展为CRPC及总生存率的独立预测指标。

一个新C_2H_2型锌指蛋白的功能的初步研究

通过筛选人 18周胎脑cDNA文库 ,得到一条编码 332AA的全长新基因 .生物信息学研究表明 ,该蛋白质序列有 2个C2 H2 型锌指结构 ,其中 1个锌指结构有RNA binding蛋白特异锌指的特征 .虽然同源比较发现与多种蛋白质精氨酸N端转甲基酶 (proteinarginineN methyltransferase)有一定的同源性 ,但新锌指蛋白不含转甲基酶的活性功能区域 ,属功能未知的基因 .利用基因芯片研究功能未知基因的表达是一种较好的手段 ,通过代谢增强剂PMA(phorbolmyristateacetate)刺激培养的血管内皮细胞 ,观察细胞受激活后新锌指蛋白基因的表达变化 ,结果表明新基因表达量提高了 11倍以上 ,证实新基因属内皮细胞的极早期应答基因 (Immediateearlyre sponsegene ,ERG) .