含额外拷贝ERG3B基因烟曲霉的表型分析

目的克隆烟曲霉ERG3B基因,并构建烟曲霉ERG3B基因额外拷贝株,了解该基因对烟曲霉表型的影响。方法通过同源性比对,在烟曲霉基因组找出烟曲霉可能的ERG3基因的开放读码框(ORF),PCR扩增ERG3B基因ORF连同其上下游各约1kb的DNA片段,将该片段重组到穿梭质粒pRG-AMA1-NotI。用重组后的质粒转化嘧啶营养缺陷株烟曲霉AF293.1。观察转化子的生长速度并测定转化子对抗真菌药物敏感性。结果①烟曲霉ERG3基因有3个拷贝(ERG3A,ERG3B,ERG3C)。Erg3Ap和Erg3Bp与其他真菌的Erg3同源性高。②烟曲霉ERG3B基因被重组到了pRG-AMA1-NotI,产生质粒pERG3B。用pERG3B和空载体pRG-AMA1-NotI转化AF293.1后,分别得到转化子AF-pERG3B和AF-empty。AF-pERG3B与AF-empty的生长速度无差异;两者对伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬、两性霉素B、卡泊芬净、灰黄霉素的敏感性也无差异。结论额外拷贝的ERG3B基因不影响烟曲霉的生长速度及对伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬、两性霉素B、卡泊芬净、灰黄霉素的敏感性。