白假丝酵母菌对唑类药物耐药机制的研究进展

近年来,白假丝酵母菌对唑类药物耐药问题备受人们关注。随着耐药菌株的不断出现,耐药机制的研究也取得了一定的进展。白假丝酵母菌对唑类药物耐药机制主要与Erg11基因、CDR1和CDR2基因、MDR1基因的过度表达及突变有关。本文就这方面研究新进展进行综述。

白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列的比较研究

目的 通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列的比较,探讨两相在DNA水平的差异。方法 对5株分离自同一HIV阳性患者的白念珠菌分别进行菌丝相与酵母相培养后,抽提基因组DNA,PCR扩增ERG11基因(包括部分上游和下游非编码区),用下游引物对部分ERG11基因进行测序。结果CA-7菌丝相与酵母相ERG11基因序列存在差异,分别位于第1547,1587和1617位点。结论 白念球菌菌丝相与酵母相在DNA水平存在差异,在进行白念珠菌的病原真菌学研究中菌丝相为适宜的研究对象。

光滑假丝酵母菌氟康唑耐药机制研究

目的探讨光滑假丝酵母菌CDR1、CDR2、SNQ2和ERG11基因mRNA表达差异以及ERG11基因突变在氟康唑耐药形成中的作用。方法采用罗丹明6G试验比较氟康唑耐药组与敏感组的外排泵作用,Real-Time PCR检测外排相关基因CDR1、CDR2、SNQ2和ERG11表达情况。同时,对ERG11基因进行PCR扩增和测序,比较耐药组和敏感组的突变位点。结果耐药组光滑假丝酵母菌外排泵功能明显强于敏感组,差异有统计学意义(P<0.01)。耐药组的CDR1和CDR2 mRNA表达水平显著高于敏感组(P<0.01,P<0.05);但两组间SNQ2和ERG11 mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。检测到ERG11基因4个突变位点,均为同义突变,其中3个突变位点在耐药组和敏感组中均出现,1个突变位点只在敏感组中出现。结论外排泵功能在光滑假丝酵母菌氟康唑耐药过程中起重要作用。ERG11基因序列存在多态性,但未发现与氟康唑耐药相关的突变位点。

生殖道感染白色假丝酵母菌药敏性研究及耐药基因ERG11突变情况分析

目的分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性以及耐氟康唑白色假丝酵母菌ERG11基因突变的情况。方法收集2016年1月—2017年1月临床生殖道假丝酵母菌感染患者生殖道分泌物标本,培养并进行菌种鉴定,微量稀释法进行体外药敏性实验对氟康唑靶酶基因ERG11进行PCR扩增、测序,与已知序列进行对比分析。结果 815例样本中发现假丝酵母菌感染213例,感染率26.1%,其中白色假丝酵母菌感染139例占65.3%。通过药敏性实验从中分离耐药菌10株,通过ERG11基因分析共16个同义突变与9个错义突变。结论白假丝酵母菌是女性生殖道假丝酵母菌感染的主要致病菌,对ERG11基因测序发现了4株单位点及6株多位点的有义突变。

白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变分析

目的分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性,阐明耐氟康唑白色假丝酵母菌Erg11基因突变。方法回顾性分析2011年6月-2012年12月医院患者送检各类标本分离的287株假丝酵母菌属,采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M27-A3推荐的微量稀释法进行体外药敏试验,从177株白色假丝酵母菌中筛选出7株对氟康唑耐药株,对氟康唑靶酶基因Erg11进行PCR扩增、测序,与Genbank上标准序列(X13296)比对分析。结果在7株白色假丝酵母菌氟康唑耐药株和1株敏感株中共发现25个点突变,其中15个同义突变,10个错义突变,10个错义突变分别为V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G、D116E、K119N、K128T、D153E、E266D,其中V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G是新发现的。结论成功分析了白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变。

白色假丝酵母菌ERG11基因突变与高表达在唑类药物交叉耐药中的作用

目的初步探讨白色假丝酵母菌ERG11基因突变、高表达对唑类药物交叉耐药的作用,为临床合理用药提供理论依据。方法自2014年9月-2015年10月收集43株白色假丝酵母菌临床菌株进行体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)扩增ERG11基因并测序、分析其突变情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ERG11基因mRNA的表达水平。结果 43株实验菌株中有药物敏感菌株15株、单药耐药菌株13株、交叉耐药菌株15株,其中9株交叉耐药菌株出现5个错义突变,分别为T123I、Y132H、E174A、G450E、G464S,交叉耐药菌株ERG11基因突变概率显著高于单药耐药菌株及药物敏感菌株(P<0.05);交叉耐药菌株ERG11基因mRNA的表达量(4.00±2.06)显著高于药物敏感菌株(0.93±0.21)(P<0.05),但与单药耐药菌株(3.92±1.01)相比无统计学差异。结论 ERG11基因突变及高表达均为白色假丝酵母菌耐药的机制,其交叉耐药的产生与基因突变相关,与高表达关系尚待进一步研究。

艾滋病患者白念珠菌ERG11基因突变的研究

目的 探讨艾滋病患者的白念珠菌唑类耐药株中唑类抗真菌药物（氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑）的作用靶位基因ERG 11基因突变与耐药的关系.方法 用PCR对临床分离的93株白念珠菌的Erg11基因进行扩增、测序,DNAman软件将测序结果与基因库中的X13296进行比对,将突变碱基翻译为氨基酸,确定是否发生错义突变.结果 共检出40个碱基突变位点,包括27个同义突变位点和13个错义突变位点.耐一种药物的突变菌株中每株菌只发生一处错义突变或无错义突变,而耐二种或三种药物的菌株中每株菌还可以同时出现两处或三处错义突变.结论 ERG 11基因错义突变与白念珠菌耐药有关.

白念珠菌临床株氟康唑敏感性试验与ERG11基因突变检测

目的了解白念珠菌临床株对氟康唑的敏感性,筛查临床菌株的ERG11突变,探讨其与耐药的关系。方法收集鉴定白念珠菌临床株,采用微量稀释法和药敏纸片法体外测定试验菌株对氟康唑的敏感性。分段扩增ERG11基因的第295～777 bp(483 bp)、第723～1204 bp(482 bp)和第1179～1667 bp(489 bp)等3个片段,并测序。结果共收集念珠菌80株,分离白念珠菌52株,52株白念珠菌均为敏感株。经测序的5株敏感白念珠菌ERG11基因共出现19处突变,其中14处为同义突变,其余5处错义突变(T495A、A530C、G640A、A945C、G1609A)分别可引起羊毛甾醇14α-去甲基酶的下列氨基酸改变:D116E、K128T、E165K、E266D、V488I。结论白念珠菌临床株对氟康唑敏感性较高;E165K和V488I可能与耐药无关。

Relationship between antifungal resistance of fluconazole resistant Candida albicans and mutations in ERG11 gene

Background The cytochrome P450 lanosterol 14a-demethylase （Ergllp） encoded by ERG11 gene is the primary target for azole antifungals. Changes in azole affinity of this enzyme caused by amino acid substitutions have been reported as a mechanism of azole antifungal resistance. This study aimed to investigate the relationship between amino acid substitutions in Erg11 p from fluconazole resistant Candida a/bicans （C. albicans） isolates and their cross-resistance to azoles. Methods Mutations in ERG11 gene were screened in 10 clinical isolates of fluconazole resistant C. albicans strains. DNA sequence of ERG11 was determined by PCR based DNA sequencing. Results In the 10 isolates, 19 types of amino acid substitutions were found, of which 10 substitutions （F72S, F103L, F1451, F198L, G206D, G227D, N349S, F416S, F422L and T482A） have not been reported previously. Mutations in ERG11 gene were detected in 9 isolates of fluconazole resistant C. albicans, but were not detected in 1 isolate. Conclusions Although no definite correlation was found between the type of amino acid substitutions in Ergllp and the phenotype of cross-resistance to azoles, the substitutions F72S, F1451 and G227D in our study may be highly associated with resistance to azoles because of their special location in Erg11p.

白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因差异性分析

目的探讨白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因间的差异。方法将16株同一亲本来源、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌（CA-1-CA-9、CA-11-CA-17）进行菌丝相与酵母相培养后，分别抽提基因组DNA。设计引物扩增ERG11基因，扩增产物分别用AccⅠ、MunⅠ、AnⅡ消化，电泳后比较两相细胞RFLP图谱，同时用下游引物P2对ERG11基因扩增产物进行反向测序。结果AccⅠ、MunⅠ、AftⅡRFLP图谱及基因测序结果均显示菌株CA-7、CA-8、CA-14、CA-16、CA-17的菌丝相与酵母相间存在差异。两相细胞ERG11基因在1547、1587、1617三位点存在差异，位点编号按照基因库中ERG11基因序列编号（登录号X13296）。结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因间存在差异，在进行白念珠菌体外研究时，选用其菌丝相更能反映体内真实情况。

阴道白假丝酵母菌的耐药性和ERG11基因突变关系研究

目的探讨ERG11基因突变与白假丝酵母菌对吡咯类药物敏感性下降的关系。方法收集VVC患者的白假丝酵母菌60株,用科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定,纸片扩散法进行药敏试验,选取所有中度敏感株和耐药株用聚合酶链反应扩增(PCR)ERG11基因,将PCR产物进行测序分析和比对分析。结果 60株白假丝酵母菌对咪康唑、酮康唑和氟康唑敏感率分别为36.7%、56.1%和80%;将38株中度敏感株和耐药株进行ERG11基因分析后共发现29个有义突变和25个同义突变,其中,有义突变中发现多个新突变位点。结论有些新发现的突变位点可能与耐药相关;多位点有义突变可能降低菌株对药物的敏感性。