锌指蛋白-36缺陷抑制小鼠的成骨细胞分化:基于激活ERK/ MAPK通路

目的探究锌指蛋白-36(ZFP36)对成骨细胞分化的调控作用及机制。方法通过提取小鼠原代骨髓间充质干细胞,结合小鼠成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1,在体外成骨分化诱导状态下观察Zfp36(编码ZFP36)的表达变化。通过干扰RNA技术构建Zfp36缺陷的细胞,观察成骨分化作用的改变。通过第二代转录组测序技术探究Zfp36缺陷细胞成骨分化过程中的转录组水平改变。通过ERK/MAPK信号抑制分子U0126验证Zfp36缺陷对成骨分化作用的调控机制。结果小鼠原代骨髓间充质细胞以及MC3T3-E2细胞中Zfp36表达在成骨分化0~14d过程中呈逐渐升高趋势,在第7天到达峰值时较第0天升高3.85倍(P<0.0001)。抑制上述细胞Zfp36的表达后,成骨分化过程中碱性磷酸酶染色及茜素红染色弱于对照组,成骨分化标志基因Alpl(P<0.01)、Sp7(P<0.001)、Bglap(P<0.01)、Ibsp(P<0.0001)表达显著减弱。转录本测序结果提示Zfp36缺陷细胞的下调基因富集到骨矿化相关基因集中,且与ERK信号相关。蛋白表达检测显示Zfp36缺陷细胞的磷酸化ERK蛋白比例较对照组升高2.1倍(P=0.0274)。通过分子化合物U0126抑制Zfp36缺陷细胞中被激活的ERK/MAPK信号,可观察到表型挽救现象,并且呈剂量依赖。Zfp36缺陷细胞在10μmol/L度U0126作用下碱性磷酸酶染色增强,成骨细胞分化标志基因Runx2(P<0.05)及Bglap(P<0.05)表达显著增高。结论ZFP36参与了小鼠成骨细胞的分化调控过程,Zfp36缺陷会引起ERK/MAPK信号通路的激活,进而抑制成骨细胞向骨细胞的分化。

miRNA-7-EGFR/ERK通路用于卵巢癌治疗的研究进展

卵巢癌(OC)在女性生殖系统肿瘤中致死率最高,治疗多选择手术切除加辅助化疗,然而易出现耐药性,导致患者预后差。miRNA-7在卵巢癌细胞中低表达,通过靶向表皮生长因子受体(EGFR)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路发挥抗肿瘤作用。本综述介绍miRNA-7-EGFR/ERK通路在卵巢癌治疗中的作用,为卵巢癌的治疗提供新的思路。

线粒体内膜蛋白17(MPV17)通过阻断ERK通路抑制铁过载小鼠脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡

目的探索铁过载对小鼠脾脏损伤的影响及线粒体内膜蛋白17(MPV17)在铁过载小鼠脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡中的作用。方法将小鼠随机分为正常饮食组、高铁饮食组、高铁饮食联合铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)处理组、高铁饮食联合MPV17腺病毒注射组,每组5只。喂食8周后,取脾脏组织并固定,通过组织切片和HE染色法观察脾脏结构,碘化丙啶(PI)染色检测脾脏CD3^(+)T细胞死亡,脂质过氧化荧光探针C11 BODIPY 581/591检测脂质氧化,实时定量PCR检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)及前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)mRNA水平,流式细胞术检测M1、M2巨噬细胞比例,ELISA实验检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-6的含量。同时增加高铁饮食联合细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂处理组、ERK激活剂处理组、β半乳糖苷(β-gal)酶联合ERK激活剂处理组、MPV17联合ERK激活剂处理组,Western blot法检测MPV17、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、磷酸化的ERK(p-ERK)水平,JC-1结合流式细胞术检测线粒体膜电位。结果与正常饮食组相比,高铁饮食组小鼠脾脏红髓形状不规则,白髓结构消失,脾脏CD3^(+)T细胞死亡增多,脂质过氧化物增多,SLC7A11及PTGS2表达升高,血液中M1/M2巨噬细胞比例升高,炎症因子含量升高;经Fer-1处理或过表达MPV17,部分恢复脾脏结构,CD3^(+)T细胞数量及脂质过氧化物减少,SLC7A11及PTGS2表达被抑制,M1/M2巨噬细胞比例及炎症因子的含量降低。高铁饮食导致GPX4表达降低,p-ERK表达升高,抑制ERK部分恢复GPX4表达,激活ERK降低GPX4表达;MPV17抑制ERK部分恢复GPX4表达,MPV17部分恢复因ERK激活导致的线粒体膜电势降低。结论铁过载可诱导小鼠脾脏CD3^(+)T细胞发生铁死亡,MPV17通过阻断ERK信号抑制高铁饮食诱导的脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡。

连翘脂素调节Ras/Raf/MEK/ERK信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究连翘脂素(PG)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化的影响及机制。方法 培养HCT116结直肠癌细胞,采用10~200μmol/L的连翘脂素处理细胞,检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度。将细胞分为对照组(Control组),连翘脂素低、中、高浓度组(PG-L组、PG-M组、PG-H组),连翘脂素高浓度+转染慢病毒阴性对照组(PG-H+NC组),连翘脂素高浓度+Ras慢病毒组(PG-H+Ras组)。平板克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞术以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测上皮间质转化(EMT)标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及信号通路相关蛋白p-Raf、p-MEK、p-ERK表达;建立荷瘤小鼠模型评价连翘脂素对结直肠癌肿瘤生长的影响。结果 10~200μmol/L的连翘脂素处理HCT116结直肠癌细胞,可以显著抑制细胞存活率,经计算IC50值为(140.4±2.147)μmol/L,选择10、50、100μmol/L连翘脂素进行后续实验;与Control组比较,PG-L组、PG-M组、PG-H组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著降低,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PG-H+NC组比较,PG-H+Ras组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著升高,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著降低(P<0.05);连翘脂素可以显著抑制结直肠癌移植瘤的生长。结论 连翘脂素可以抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化,其作用机制可能与抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路激活有关。

藏红花水提取物通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响人卵巢癌细胞HO-8910增殖

目的:探讨藏红花水提取物调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达对人卵巢癌细胞HO-8910增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:以人卵巢癌细胞HO-8910为研究对象,给予不同浓度(0、0.4、0.8、1.0 mg/L)藏红花水提取物进行培养,MTT法检测细胞HO-8910的增殖活力;流式细胞术观察细胞HO-8910的凋亡率;划痕法检测细胞HO-8910的迁移情况;Transwell法检测细胞HO-8910的侵袭情况;Western blot法检测细胞HO-8910的ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力受藏红花水提取物的影响,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力减弱;而人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率则相反,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率逐渐增加;受藏红花水提取物影响,人卵巢癌细胞HO-8910中ERK、Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加,且藏红花水提取物剂量越高,ERK、Bcl-2蛋白表达越低,Bax蛋白表达越高。结论:藏红花水提取物能够降低卵巢癌细胞的增殖活力、迁移能力及侵袭能力,并诱导卵巢癌细胞凋亡,这可能是通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达来实现的。

利用FRET技术检测不同力学条件下T细胞中ERK活性的脉冲现象

目的探索Jurkat T细胞中胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)活性动力学以及基质刚度对ERK活性的影响。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时观测Jurkat细胞中ERK活性的变化,或细胞处于I型胶原基质胶中检测其影响。结果部分Jurkat细胞中存在ERK活性脉冲现象,频率约为3次/h,FRET振幅变化约为20%。在抗体激活T细胞抗原受体(T-cell receptor,TCR)的条件下,ERK脉冲依然存在,频率和振幅无显著变化。当细胞处于I型胶原水凝胶中,随着胶基质刚度增加,脉冲频率有所下调。结论Jurkat T细胞中存在自发的ERK活性脉冲现象,初步实验显示其频率受基质刚度影响。而该信号波动的生理意义和分子机制仍有待探索。

麸炒苍术对脾虚大鼠结肠组织MEK/ERK信号通路的影响

目的探讨麸炒苍术对脾虚大鼠结肠组织丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方谷氨酰胺组(9 mg·kg^(-1))及麸炒苍术高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g·kg^(-1)),每组10只。采用慢性束缚、苦寒破气联合饥饱失常复制脾虚大鼠模型。观察动物的宏观表征、摄食情况,记录每日体质量增加情况,测定粪便含水率,对大鼠脾虚证进行评分。采用HE染色法及透射电镜观察结肠组织病理形态学改变;ELISA法检测结肠黏膜组织中密封蛋白2(Claudin-2)、Claudin-3、黏蛋白(MUC2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的含量;免疫组化法检测结肠组织中磷酸化肌球蛋白轻链激酶(p-MLCK)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Raf)蛋白表达水平;Real-time PCR法检测结肠组织中MEK、ERK、MLCK mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠的脾虚证积分、粪便含水率显著升高(P<0.01),每日体质量增加量显著降低(P<0.01);结肠组织黏膜层上皮细胞萎缩,结构疏松水肿,固有膜结构被破坏,炎性细胞浸润,杯状细胞减少;肠上皮细胞结构及体积明显异常,核固缩,染色质及核仁形态模糊不清,线粒体减少且结构异常;结肠黏膜组织中Claudin-3、MUC2含量显著降低(P<0.01),Claudin-2、MMP-9含量显著升高(P<0.01);结肠组织p-MLCK、p-Raf蛋白表达及MEK、ERK、MLCK mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的脾虚证积分、粪便含水率明显降低(P<0.05,P<0.01),每日体质量增加量明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠黏膜表面结构明显改善,水肿减轻,杯状细胞排列整齐、增多;结肠组织细胞超微结构有不同程度修复;结肠黏膜组织中Claudin-3、MUC2含量明显升高(P<0.05,P<0.01),Claudin-2、MMP-9含量明显降低(P<0.05,P<0.01);结肠组织p-MLCK、p-Raf蛋白表达及MEK、ERK、MLCK mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论麸炒苍术能够修复脾虚大鼠受损的肠黏膜及其组织细胞超微结构,缓解肠黏膜炎性改变,可能与干预Raf/MEK/ERK信号通路,双相调节肠黏膜Claudin-2、MMP-9、Claudin-3等紧密连接蛋白及黏蛋白MUC2的表达,从而增强肠道屏障功能有关。

Identification of Secondary Structure of Extracellular Signal Regulated Kinase (ERK) Interacting Proteins and Their Domain: An in Silico Study

ERK is involved in multiple cell signaling pathways through its interacting proteins. By in silico analysis, earlier we have identified 22 putative ERK interacting proteins namely;ephrin type-B receptor 2 isoform 2 precursor (EPHB2), mitogen-activated protein kinase 1 (MAPK1), interleukin-17 receptor D precursor (IL17RD), WD repeat domain containing 83 (WDR83), tescalcin (Tesc), mitogen-activated protein kinase kinase kinase 4 (MAPP3K4), kinase suppressor of Ras2 (KSR2), mitogen-activated protein kinase kinase 6 (MAP3K6), UL16 binding protein 2 (ULBP2), UL16 binding protein 1 (ULBP1), dual specificity phosphatase 14 (DUSP14), dual specificity phosphatase 6 (DUSP6), hyaluronan-mediated motility receptor (RHAMM), kinase D interacting substrate of 220 kDa (KININS220), membrane-associated guanylate kinase (MAGI3), phosphoprotein enriched in astrocytes 15 (PEA15), typtophenyl-tRNA synthetase, cytoplasmic (WARS), dual specificity phosphatase 9 (DUSP9), mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1 (MAP3K1), UL16 binding protein 3 (ULBP3), SLAM family member 7 isoform a precursor (SLAMMF7) and mitogen activated protein kinase kinase kinase 11 (MAP3K11) (Table 1). However, prediction of secondary structure and domain/motif present in aforementioned ERK interacting proteins is not studied. In this paper, in silico prediction of secondary structure of ERK interacting proteins was done by SOPMA and motif/domain identification using motif search. Briefly, SOPMA predicted higher random coil and alpha helix percentage in these proteins (Table 2) and motif scan predicted serine/threonine kinases active site signature and protein kinase ATP binding region in majority of ERK interacting proteins. Moreover, few have commonly dual specificity protein phosphatase family and tyrosine specific protein phosphatase domains (Table 3). Such study may be helpful to design engineered molecules for regulating ERK dependent pathways in disease condition.

调督理筋针法联合揿针治疗腰椎间盘突出症的临床观察

【目的】观察调督理筋针法联合揿针治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。【方法】将98例腰椎间盘突出症患者随机分为观察组和对照组,每组各49例,对照组给予调督理筋针法治疗,观察组在对照组治疗的基础上,给予揿针治疗。连续治疗1个月。治疗1个月后,评价2组临床疗效,观察2组患者治疗前后日本骨科协会(JOA)评分和疼痛视觉模拟评分法(VAS)的变化情况,以及腰椎活动度和ERK蛋白、ERK mRNA表达的情况。比较2组患者治疗前后β-内啡肽(β-EP)、神经肽Y(NPY)、5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)水平和白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平的变化情况。并评价2组的安全性。【结果】(1)观察组总有效率为93.88%(46/49),对照组为79.59%(39/49)。观察组疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)治疗后,2组患者的JOA、VAS评分均明显改善(P<0.05),且观察组在改善JOA、VAS评分方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗后,2组患者的β-EP、NPY、5-HT、SP水平明显改善(P<0.05),且观察组在改善β-EP、NPY、5-HT、SP水平方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)治疗后,2组患者的IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显改善(P<0.05),且观察组在改善IL-6、IL-1β、TNF-α水平方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)治疗后,2组患者的腰椎前屈、后伸活动度明显改善(P<0.05),且观察组在改善腰椎前屈、后伸活动度方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)治疗后,2组患者的ERK蛋白表达、ERK mRNA水平明显改善(P<0.05),且观察组在改善ERK蛋白表达、ERK mRNA水平方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(7)观察组不良反应发生率为8.16%(4/49),对照组为4.08%(2/49),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】调督理筋针法联合揿针治疗腰椎间盘突出症,疗效显著,能明显改善患者的疼痛症状,降低血清疼痛介质、炎性因子水平,改善腰椎功能,其作用机制可能与抑制ERK的信号通路相关。

在无血清条件下TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路对FBJ细胞生长的调控作用

目的研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)在无血清条件下作为生长因子促进FBJ细胞生长的信号通路。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性;分别用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)法和免疫印迹法检测细胞中TNFα的表达以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)、p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化水平。结果在无血清培养基培养条件下,经TNFα(10μg.L-1)处理的FBJ细胞明显对抗无血清条件下诱发的细胞死亡,TNFαsense cD-NA转染的FBJ-LL和FBJ-S1细胞均能提高其在正常培养基以及无血清培养基中的生长速度,TNFα是FBJ细胞中重要的生长因子之一;蛋白酶N1(protein kinase N1,Pkn1)siRNA可明显沉默目的基因Pkn1的表达,同时降低TNFα的含量;Pkn1沉默的细胞在无血清条件下的生长明显被抑制;TNFα处理的细胞能迅速刺激Erk的磷酸化,Erk沉默的FBJ-LL细胞的生长速度明显降低,TNFα通过Erk信号通路诱发细胞生长;TNFα亦能诱导另一有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-ac-tivated protein kinase,MAPK)家族p38的磷酸化;神经节苷脂GD1a可降低TNFα在FBJ细胞中的表达,TNFα诱发的无血清条件下的生长速度也被神经节苷脂GD1a抑制。结论在无血清条件下,TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路调控小鼠骨肉瘤FBJ细胞的生长。

乳腺浸润性导管癌组织学分级与BAD、p-BAD及p-ERK蛋白的表达

目的:探讨乳腺浸润性导管癌不同组织学分级间BAD及其磷酸化形式p-BAD和上游作用因子ERK的活性形式p-ERK蛋白表达的变化。方法:应用免疫组化SP法检测83例乳腺浸润性导管癌中BAD、p-BAD及p-ERK蛋白表达及应用TUNEL法原位观察不同组织学分级间凋亡指数的差异。结果:组织学分级越高,凋亡指数及BAD、p-BAD及p-ERK蛋白表达均越高,且在高分化与低分化组间差异均具有统计学意义。BAD与凋亡指数存在正相关性(r=1.000,P=0.018),BAD与p-BAD存在正相关性(r=0.999,P=0.031),p-BAD与p-ERK存在正相关性(r=0.997,P=0.040)。结论:BAD、p-BAD及p-ERK在乳腺浸润性导管癌蛋白表达水平呈现出肿瘤分化级别越低而表达越强的特征,这与肿瘤恶性进程中细胞发生凋亡与增殖的变化有关。

靶向ERK信号转导通路抗肿瘤的研究进展

Ras,Raf基因突变及MAPK的过度激活与人类肿瘤的发生密切相关,而且由于ERK通路在细胞信号转导中的枢纽地位,其作为抗肿瘤的分子靶受到基础研究与药物开发工作者的广泛关注,为肿瘤治疗提供了可喜的前景。

外周血miR-30a对脓毒血症并发ARDS患者预后的预测价值

目的探讨外周血miR-30a对脓毒血症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者预后的预测价值。方法选取诊治的100例脓毒血症合并ARDS患者为研究对象,根据患者的28天病情转归情况分为死亡组35例,生存组65例,比较两组患者的miR-30a、ERK蛋白以及磷酸化蛋白水平,评估miR-30a、ERK蛋白以及磷酸化蛋白水平对脓毒血症并发ARDS患者预后的预测效能。结果死亡组的miR-30a和磷酸化蛋白水平高于生存组,ERK蛋白低于生存组(P<0.05)。miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白进行联合诊断,其诊断特异度较高,联合检测的曲线下面积高于单独检测(P<0.05)。结论外周血miR-30a、ERK蛋白以及磷酸化蛋白表达异常可作为脓毒血症并发ARDS患者预后判定的重要依据。

磷酸化ERK、TGF-β受体Ⅱ和磷酸化Smad2蛋白在食管癌组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化ERK(P-ERK)、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)和磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白在食管癌发生、发展中的作用。方法采用Western blot技术检测38份手术切除的食管癌标本和12份癌旁组织标本中P-ERK、TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达。结果食管癌组织中TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达明显低于癌旁组织,P-ERK蛋白表达明显高于癌旁组织,P均<0.05;P-ERK、TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达与食管癌患者年龄、性别及肿瘤组织分化程度、淋巴结转移均无明显相关性;P-ERK、TβRⅡ与P-Smad2蛋白表达亦无明显相关性。结论食管癌组织中存在P-ERK、TβRⅡ和Smad2蛋白表达异常;此可能与食管癌的发病有关。

PTEN和P-ERK蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达和意义

目的:探讨PTEN和P-ERK蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法观察34例皮肤鳞癌组织和15例正常皮肤组织石蜡标本中PTEN蛋白和P-ERK蛋白的表达情况。结果:皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中PTEN蛋白阳性表达率(41.18%)明显低于正常皮肤组织(100%)(P<0.05);P-ERK蛋白在SCC中的阳性表达率(76.47%)明显高于正常皮肤组织(20.00%)(P<0.05);SCC中低分化组的PTEN和P-ERK蛋白的阳性表达率分别低于和高于高分化组(P<0.05)。SCC中PTEN和P-ERK蛋白表达之间呈明显的负相关(P<0.01)。结论:PTEN蛋白的低表达或失表达,不能有效抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的异常激活,可能使细胞恶性转化和增殖。

牡蛎提取物对足细胞裂孔膜蛋白NEPHRIN和ERK通路的影响

目的:探讨牡蛎提取物对足细胞裂孔膜蛋白NEPHRIN细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路的影响。方法:体内实验采用一次性尾静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)的方法,建立阿霉素肾病大鼠模型。随机分为空白对照组、模型对照组、牡蛎提取物小、中、大剂量组和阳性对照组。从第4周起,牡蛎提取物组分别给予牡蛎提取物3.0 g/kg、6.0 g/kg、12.0 g/kg灌胃,阳性对照组给予泼尼松25 mg/kg灌胃。连续28 d后,进行24 h尿蛋白定量、血清生化指标检测,实验结束时用Real-time PCR法及Western Blot法检测足细胞骨架蛋白NEPHRIN m RNA及NEPHRIN蛋白表达。体外选用1μmol/L阿霉素制造足细胞损伤模型,Western Blot检测NEPHRIN蛋白含量及足细胞ERK信号通路的磷酸化水平。结果:牡蛎提取物可升高血浆白蛋白、降低总胆固醇的含量,同时减少尿蛋白;阿霉素肾病大鼠及阿霉素诱导的足细胞中NEPHRIN蛋白表达均下降。经牡蛎提取物干预后,可以上调体内、体外的NEPHRIN蛋白表达;阿霉素(1μmol/L)可显著升高ERK的磷酸化水平,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。牡蛎提取物预处理细胞后,能够有效地遏制阿霉素诱导的ERK通路活化,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:牡蛎提取物对足细胞裂孔膜蛋白NEPHRIN有调控作用,可能是通过抑制ERK通路活化而实现的。

hCG通过ERK1/2调节睾丸间质细胞StAR蛋白的表达

以2-3周龄的仔猪睾丸间质细胞为试验材料,研究了hCG在快速调节期对StAR蛋白表达的调节机制。结果表明:hCG、8-Br-cAMP均能使StAR蛋白、mRNA和P-ERK1/2的水平随刺激时间的延长逐渐增加,8-Br-cAMP作用的速度较hCG更快,增幅也更明显;加入PKI,StAR蛋白、mRNA和P-ERK1/2活性明显下降,但StAR mRNA仍然可以检测到;加入MAPK的抑制剂PD98059后,StAR蛋白、mRNA的水平均降低。由此可知,hCG在诱导StAR蛋白的表达过程中,首先通过cAMP-PKA直接调节蛋白前体蛋白向成熟蛋白的转化,随着时间的延长,通过cAMP-PKA-ERK1/2级联,磷酸化转录因子,促进StAR基因的表达。

中药复方通脉口服液对IL-1β诱导肾小球系膜细胞ERK通路活化的影响

目的:探讨中药复方"通脉口服液"对IL-1β诱导肾小球系膜细胞ERK通路活化的影响,进一步揭示中药复方"通脉口服液"抑制系膜细胞增生、延缓肾纤维化的可能机制。方法:应用细胞培养技术,进行肾小球系膜细胞的培养,采用血清药理学方法,制备中药复方"通脉口服液"、黄芪、三七药物血清,分别用IL-1β(终浓度1μg/L)刺激系膜细胞5、15、30min后,Western印迹法测定细胞外调节激酶(ERK)1/2的表达。分别加入10%中药复方"通脉口服液"、10%黄芪药物血清、10%三七药物血清以及特异性络氨酸激酶抑制剂genistein(10μg/mL)预处理12h后,观察磷酸化细胞外调节激酶(ERK)1/2的表达情况。结果:IL-1β刺激下,ERK活化在5min时出现高峰,后逐渐减弱,genistein预处理12h后,ERK活化延迟到30min时才出现。通脉、黄芪含药血清预处理12h后均可使IL-1 beta刺激下ERK活化延迟到15min时出现,30min时增强,且峰值较前减弱。三七含药血清预处理12h后在3个观察时间点上(5min、15min、30min)均未出现磷酸化。通脉、黄芪、三七含药血清与genistein联合使用后在3个观察时间点上(5min、15min、30min)均未观察到ERK的磷酸化。结论:中药复方"通脉口服液"、黄芪、三七含药血清对ERK的磷酸化均有一定的阻断作用,与genistein合用可增强这一阻断作用。组间相比较结果显示三七组作用要优于黄芪组,提示在抑制ERK的磷酸化作用方面,活血类中药作用可能要优于益气类中药;中药复方"通脉口服液"抑制系膜细胞增生、延缓肾纤维化的可能机制为抑制ERK抗体的磷酸化。

纤维化大鼠肝组织中SMAD3蛋白和ERK1的表达

目的:通过研究大鼠肝纤维化模型肝组织中细胞外信号调节激酶(Extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)和SMAD3蛋白的表达及分布规律,初步探讨它们所介导的信号通路在肝纤维化发病机制中的作用。方法:雄性SD大鼠32只,质量250～300g,皮下注射CCl4制备大鼠肝纤维化模型,分别于注射CCl4后1、4、8周处理动物,采用免疫组织化学方法检测肝组织中ERK1和SMAD3蛋白的表达及分布。结果:ERK1和SMAD3蛋白均主要表达于肝星状细胞中。CCl4注射诱导后,大鼠肝组织中ERK1和SMAD3蛋白的表达较正常对照明显增强(P<0.05)。且CCl4注射1、4、8周组肝组织中两者的表达强度均呈明显的逐级递增的趋势(P<0.05)。结论:ERK信号通路的激活促进肝星状细胞活化增殖;与此同时,SMAD3蛋白介导的信号通路则可能与肝星状细胞的纤维化活性密切相关,两者共同促进大鼠肝纤维化的发生发展。

IL-8通过激活PKC/ERK信号通路促进肾癌细胞上皮细胞-间质细胞转化

上皮细胞-间质细胞转化(EMT)在肿瘤转移方面起着非常重要的作用.肾癌发生EMT的具体分子机制尚不清楚.IL-8是一个重要的炎症趋化因子,研究表明肾癌细胞可以分泌IL-8,但IL-8是否参与肾癌细胞EMT的调节目前尚无报道.我们研究发现,IL-8可以促进肾癌细胞形态发生间质化改变,IL-8刺激后E-钙黏蛋白表达水平下降,N-钙黏蛋白表达上调.另外,IL-8可以促进肾癌细胞侵袭,但对肾癌细胞增殖的影响并不明显.进一步研究显示,IL-8通过激活蛋白激酶C(PKC)引起细胞外调节性激酶(ERK)磷酸化.因此,我们认为IL-8可能通过PKC/ERK信号通路促进肾癌细胞发生EMT,这可能是肾癌转移的重要机制之一.