TRIB3靶向AKT磷酸化调控高糖条件下小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的机制研究

目的探讨TRIB3介导高糖条件下巨噬细胞促炎性M1型极化的下游机制。方法以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象:1)细胞分为对照(CON)组和高糖(HG)组,Western blot检测TRIB3、p-AKT和AKT蛋白;在各组内分为DMSO组和SC79组/MK2206组,使用AKT激动剂SC79或抑制剂MK2206处理细胞,Western blot检测p-AKT和AKT蛋白。2)细胞随机分为Control vector-DMSO组、TRIB3 overexpress-DMSO组、Control vector-SC79组、TRIB3 overexpress-SC79组、Control vector-MK2206组和TRIB3 overexpress-MK2206组,CCK8检测细胞活性,相差显微镜观察细胞形态并采集图像,Western blot检测TRIB3、pAKT、AKT、iNOS和Arg-1蛋白,ELISA检测细胞培养液中IL-1β和IL-10分泌。结果1)与CON组相比,HG组TRIB3显著增加、p-AKT/AKT显著下降。HG-SC79组p-AKT/AKT显著高于HG-DMSO组且与CON-SC79组无显著差异;HG-MK2206组pAKT/AKT显著低于HG-DMSO组。2)与对应的Control vector组相比,TRIB3 overexpress组TRIB3均显著增加、p-AKT/AKT均显著下降;与对应的DMSO组相比,SC79组p-AKT/AKT均显著增加、MK2206组p-AKT/AKT均显著下降。与Control vector-DMSO组相比,TRIB3 overexpress-DMSO组出现较多长梭形和不规则形细胞,iNOS和IL-1β显著增加,IL-10显著减少。与TRIB3overexpress-DMSO组相比,TRIB3 overexpress-SC79组长梭形和不规则形细胞明显减少,iNSO和IL-1β显著下降,IL-10显著增加;TRIB3 overexpress-MK2206组长梭形和不规则形细胞进一步增加,Arg-1和IL-10显著下降,IL-1β显著增加。结论高糖环境下巨噬细胞中激活的TRIB3蛋白通过靶向负调控AKT磷酸化水平发挥诱导巨噬细胞M1型极化、抑制M2型极化的促炎作用。

中药复方金思维含药血清调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对拟阿尔茨海默病细胞模型tau蛋白磷酸化的影响

目的探讨中药复方金思维含药血清对拟阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)细胞模型tau蛋白磷酸化的影响及作用机制。方法采用Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立拟AD细胞模型,CCK-8法筛选金思维含药血清、PI3K/AKT/GSK-3β通路抑制剂LY294002最佳作用浓度。将SH-SY5Y细胞分为正常组、模型组、金思维低剂量组、金思维中剂量组、金思维高剂量组以及LY294002组。蛋白免疫印迹法检测金思维含药血清对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化以及PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的影响。结果20μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h可建立最佳拟AD细胞模型。相对于正常组,模型组P-AKT显著降低(P<0.05),P-tau显著升高(P<0.01)。相对于模型组,金思维低剂量含药血清组PI3K的表达量显著升高(P<0.05),高剂量含药血清组GSK-3β的表达量显著降低(P<0.05),中剂量和高剂量含药血清组P-tau的表达量显著降低(P<0.01、P<0.001)。加入通路抑制剂LY294002后,P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、GSK-3β、P-tau蛋白的表达量较模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论金思维含药血清可降低拟AD细胞模型tau蛋白磷酸化水平,其机制可能与PI3K/AKT/GSK-3β通路的激活有关。

USP9X对Akt磷酸化水平及血小板活化的影响

目的 探讨血小板中去泛素化酶USP9X的表达及其对血小板功能的影响。方法 通过聚合酶链式反应和免疫印记方法检测人和小鼠血小板中USP9X的表达情况;分离制备年轻小鼠和老年小鼠的血小板,检测USP9X的表达变化;采用USP9X特异性抑制剂检测USP9X对血小板聚集释放及铺展功能的影响;收集激活不同时间点的血小板蛋白裂解液,并进行免疫印记检测磷酸化Akt的变化。结果 人血小板与小鼠血小板在mRNA水平和蛋白水平均表达USP9X。相对于年轻小鼠,老年小鼠血小板中USP9X的表达明显升高(0.87±0.099 vs 1.05±0.980,P<0.05)。使用USP9X的特异性抑制剂提前30 min孵育血小板,之后检测血小板的聚集、释放及铺展功能,结果显示,相比于对照组,USP9X抑制剂处理组的血小板的聚集和释放水平明显下降(P<0.05);相比于对照组,抑制剂处理组45 min的铺展面积显著降低。最后,免疫印记结果显示,USP9X抑制剂处理组的血小板的Akt磷酸化水平明显下降。结论 人和小鼠的血小板表达USP9X,USP9X可促进血小板的聚集释放及铺展,并可影响Akt的磷酸化水平,USP9X的抑制剂或可成为潜在的临床血栓干预靶点。

亚甲蓝通过增强ERK1/2和AKT磷酸化降低IL⁃1β水平改善糖尿病大鼠视网膜病变

目的探究亚甲蓝对糖尿病大鼠视网膜病变的神经保护作用。方法将30只SD大鼠随机分为空白组、对照组和实验组。对照组和实验组采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建糖尿病大鼠模型。造模成功6周后,在实验组动物玻璃体内按照[0.2 mg/(kg·d)]剂量注射亚甲蓝,对照组玻璃体内注射等量二甲基亚砜(DMSO),均连续处理7 d。采用ELISA检测大鼠的视网膜超氧化物歧化酶(SOD),8⁃异前列腺素F2α(iPF2α)和白细胞介素1β(IL⁃1β)的水平,Western blot法检测视网膜磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(p⁃ERK1/2)和磷酸化的蛋白激酶B(p⁃AKT)表达,过碘酸希夫(PAS)染色检测视网膜形态变化。结果与空白组大鼠相比,对照组和实验组大鼠中的视网膜SOD活性明显降低,iPF2α和IL⁃1β水平增加,p⁃ERK1/2水平增加、p⁃AKT磷酸化水平降低;与对照组相比,实验组大鼠SOD活性增加,iPF2α和IL⁃1β水平降低,p⁃ERK1/2、p⁃AKT水平明显升高,视网膜层的整体厚度和视网膜神经节细胞的数量显著减少。结论亚甲蓝通过降低视网膜氧化应激和增强ERK1/2和AKT磷酸化改善糖尿病大鼠视网膜病变。

杜仲叶通过激活ERK及AKT磷酸化促进大鼠成骨细胞增殖的研究

目的研究杜仲叶提取物对大鼠成骨细胞的增殖作用及其分子机制。方法选取新生SD大鼠的乳鼠颅骨通过消化法分离出乳鼠成骨细胞,并用碱性磷酸酶染色进行细胞鉴定;先用杜仲叶提取物分别以0 mg/ml,5 mg/ml,20 mg/ml,40 mg/ml,60 mg/ml五种不同浓度梯度对大鼠成骨细胞干预,2d后用MTT方法检测细胞增殖情况;用无血清无酚红的培养基饥饿大鼠成骨细胞2 h后,分别以0mg/ml,5 mg/ml,20 mg/ml,40 mg/ml,60 mg/ml五种不同浓度杜仲叶提取物干预大鼠成骨细胞,2 h后Western blot检测ERK和AKT的活化情况。结果碱性磷酸酶染色后的成骨细胞呈紫红色(特异性染色),MTT法结果显示杜仲叶提取物促进大鼠成骨细胞的增殖,并具有浓度依赖性;Western blot结果显示杜仲叶提取物可使ERK及AKT磷酸化水平提高,并具有浓度依赖性。结论杜仲叶提取物通过ERK通路及AKT通路促进大鼠成骨细胞的增殖。

磷酸化Akt和ERK在大鼠腹主动脉瘤中的表达

目的观察磷酸化Ak(tp-Akt)和磷酸化ERK(p-ERK)在大鼠腹主动脉瘤模型中的表达情况,探讨腹主动脉瘤的发病机制。方法构建大鼠腹主动脉瘤模型并测量腹主动脉直径,计算直径扩张度;HE染色观察腹主动脉的病理改变;免疫组织化学技术和Western blot技术检测腹主动脉组织中p-Akt和p-ERK的相对表达量。结果腹主动脉瘤组主动脉扩张度(3.689±0.443)明显高于生理盐水组(1.175±0.159)和正常组(1),差异有统计学意义(P<0.05);HE染色显示,腹主动脉瘤组主动脉结构紊乱并有炎症细胞浸润;免疫组化结果和Western blot结果均显示p-Akt在腹主动脉瘤组中的表达明显高于生理盐水组和正常组(P<0.05);p-ERK表达差异不明显(P>0.05)。在腹主动脉瘤组中,p-Akt表达水平与主动脉扩张度呈正相关,p-ERK表达水平与主动脉扩张度无明显相关性。结论 PI3K/Akt信号通路可能参与腹主动脉瘤的发生与发展。

缺血后处理对脑缺血再灌注损伤后ERK1/2和Akt磷酸化及神经细胞凋亡的影响

目的:观察缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后ERK1/2和Akt及神经细胞凋亡的影响。方法:成年健康SD大鼠72只,随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、缺血后处理(Postcond)组各24只,应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型。分别于再灌注10min、30min、6h、24h后留取大脑皮质。Western blot检测再灌注10min、30min、6h后ERK1/2和Akt活性变化;原位末端标记(TUNEL)检测再灌注后24h神经细胞凋亡。结果:Postcond组再灌注10min、30min、6h后ERK1/2和Akt活性高于I/R组(P<0.05);脑缺血再灌注24h后,Postcond组与I/R组比较,TUNEL阳性细胞减少(P<0.05)。结论:缺血后处理可提高大鼠脑缺血再灌注后皮质内ERK1/2和Akt活性,减少神经细胞凋亡。

氯化两面针碱调节AKT/ERK1/2磷酸化影响肺癌细胞生长、运动、微管形成以及免疫应答

目的:研究氯化两面针碱(NC)对肺癌细胞生长、运动及炎症因子的影响,并阐明其可能机制。方法:以肺癌细胞系A549和NCI-H661为体外研究模型,CCK-8测定不同浓度NC对细胞活力的影响。选择0、3、6、12 nmol/L 4个浓度处理细胞,EdU染色测定细胞增殖,Transwell测定细胞侵袭,微管形成实验测定细胞微管形成能力,RT-PCR检测炎症因子iNOS、TNF-α、IL-4和IL-10 mRNA表达,ELISA检测iNOS、TNF-α、IL-4和IL-10含量,Western blot检测VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白水平及AKT/ERK1/2通路磷酸化。加入AKT激活剂SC79(4μg/ml)进行验证实验。12周龄雄性BALB/c小鼠作为体外研究对象,检测NC对肿瘤的影响。结果:与对照组比较,当NC浓度>6 nmol/L时,可显著降低细胞活力,减少EdU阳性细胞数量、促进凋亡,抑制细胞侵袭,降低微管形成能力并提高细胞抗炎能力。与NC 0μg组相比,NC可抑制肿瘤生长。结论:NC可抑制肺癌细胞生长、运动,提高其抗炎能力,其机制可能与AKT/ERK1/2通路激活有关。

磷酸化STAT3和磷酸化Akt及磷酸化ERK1/2与鳞状细胞癌大小及转移的关系

目的:了解磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(p-STAT3)和磷酸化Akt(p-Akt)及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)在鳞状细胞癌(SCC)中的表达及与肿瘤大小及转移的关系。方法:将50例SCC按肿瘤大小及是否转移分组,采用免疫组化法检测其中p-STAT3,p-Akt及p-ERK1/2的表达,评估其与SCC大小及转移的关系。结果:p-STAT3、p-Akt及p-ERK1/2在SCC中均有较高的阳性表达率。p-STAT3和p-Akt的阳性表达在有转移的SCC中高于无转移的SCC(P<0.05),而与肿瘤的大小无关(P>0.05)。p-ERK1/2的阳性表达与SCC的转移无关(P>0.05),而与肿瘤的大小有密切关系(P<0.05)。结论:p-STAT3,p-AKt和p-ERK1/2在SCC的发病机制中起重要作用。p-STAT3和p-AKt在SCC的转移机制中起重要作用,而p-ERK1/2则在肿瘤生长中起重要作用。

非小细胞肺癌ERK、AKT蛋白磷酸化的病理意义

目的:探讨非小细胞肺癌ERK、AKT蛋白磷酸化的病理意义。方法:免疫组织化学SP法检测90例非小细胞肺癌的p-ERK和p-AKT表达状况,分析二者表达与通路上游EGFR、KRAS、PI3K表达及患者部分临床病理参数间的相关关系。结果:非小细胞肺癌中,p-ERK表达阳性率为53.33%,其与患者的性别和吸烟史及肺腺癌的分化程度相关(P<0.05)。p-ERK表达与EGFR及KRAS表达均无显著相关关系(P>0.05)。p-AKT表达阳性率为56.67%,p-AKT表达与EGFR表达显著正相关(r=0.336,P<0.05),但与PI3K表达无显著相关关系(P>0.05)。p-ERK与p-AKT表达显著正相关(r=0.292,P<0.05)。结论:非小细胞肺癌中可能存在ERK的自身激活,检测ERK与AKT蛋白的磷酸化状态可能对筛选EGFR-TKI治疗获益人群有所帮助。

磷酸化ERK-1及磷酸化AKT在子宫内膜癌中表达及意义

目的观察子宫内膜癌组织中磷酸化ERK-1（P-ERK-1）及磷酸化AKT（PAKT）表达情况。方法采用免疫组织化学S-P法检测78例子宫内膜癌组织、40例正常子宫内膜组织中P-ERK-1和P-AKT的表达情况。结果子宫内膜癌组织中P-ERK-1和P-AKT表达定位于细胞核和细胞膜,其表达率分别为74%（58/78）和77%（60/78）,明显高于正常子宫内膜组织（P均〈0.05）;子宫内膜癌组织中,P-ERK-1和P-AKT蛋白在组织学分级G2、G3级及病理分期Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ期的表达率分别高于G1级和Ⅰ期（P均〈0.05）,与肌层浸润程度有关（P〈0.05）;P-ERK-1表达与无淋巴结转移、病理组织类型无关（P均〉0.05）;P-AKT与有无淋巴结转移有关（P〈0.05）,而与病理组织类型无关（P〉0.05）;相关性分析显示,二者之间呈正相关（P〈0.05）。结论 P-ERK-1和P-AKT在子宫内膜癌组织中过度表达,与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。

橘红素上调Cyclin B1和抑制ERK磷酸化诱导人胃癌AGS细胞周期阻滞

目的探讨橘红素对人胃癌AGS细胞增殖和周期的作用及其机制。方法采用MTT法观察橘红素对人AGS胃癌细胞增殖的作用;流式细胞仪检测橘红素对细胞周期的影响;Western blot检测橘红素对Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1和ERK、p-ERK蛋白表达的影响。结果橘红素可明显抑制AGS胃癌细胞的增殖(P<0.01),呈时间和剂量依赖性。橘红素作用于AGS细胞24 h,S期细胞百分比明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);作用48和72 h,S期阻滞消失,G2/M期细胞百分比增高(P<0.05,P<0.01)。作用48 h,橘红素可上调Cyclin B1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),对Cyclin D1和Cyclin E1蛋白表达无明显影响;对ERK蛋白表达无影响,可降低p-ERK蛋白的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论橘红素可明显抑制人AGS胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于S期和G2/M期,主要机制可能是通过抑制ERK磷酸化和上调CyclinB1蛋白表达。

电针胃经穴的大鼠血清上调胃黏膜细胞ERK磷酸化

目的探讨电针胃经穴的大鼠血清对胃黏膜细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法72只大鼠随机分为正常组、模型组、胃经组、胆经组、胃经+PD153035组和胆经+PD153035组,链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂PD153035和100 mL/L血清孵育胃黏膜细胞,W estern b lot检测ERK的磷酸化。结果胃经组和胆经组胃黏膜细胞ERK磷酸化明显高于正常组和模型组(P<0.01);胃经组胃黏膜细胞ERK磷酸化明显高于胆经组(P<0.01);当用PD153035阻断EGFR后,胃经+PD153035组胃黏膜细胞ERK磷酸化明显低于胃经组(P<0.01)。结论电针胃经穴的大鼠血清能上调胃黏膜细胞ERK的磷酸化水平,并且存在经脉-脏腑的特异性联系。

贝母素乙对肺纤维化大鼠肺组织MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化的影响

目的探讨贝母素乙对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化的影响。方法大鼠麻醉后,经气管软骨环间隙向心端穿刺,注入博莱霉素5mg/kg建立大鼠肺纤维化模型,假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等容积生理盐水。术后第2天开始每天灌胃给药,假手术组和模型组给予蒸馏水,地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液,贝母素乙A组、B组分别给予等容积贝母素乙5、2.5mg/kg蒸馏水溶液。灌胃28d后,麻醉并颈动脉取血后处死大鼠,肺组织固定,包埋切片,常规脱蜡,行免疫组化SABC法检测肺组织MEK1/2、ERK1/2水平,Western blot法检测p-MEK1/2、pERK1/2水平。结果贝母素乙可显著降低肺纤维化大鼠的肺组织ERK1/2、MEK1/2水平(P<0.01),与地塞米松作用相似(P>0.05),贝母素乙A组、B组之间比较未见明显差异(P>0.05)。贝母素乙可以显著降肺纤维化大鼠的肺组织p-MEK1/2、p-ERK1/2水平(P<0.01),较地塞米松更为显著(P<0.01),贝母素乙B组较贝母素乙A组更为显著(P<0.01)。结论贝母素乙减轻博莱霉素致肺纤维化大鼠的MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化水平可能是其抗纤维化的作用机理之一。

磷酸化ERK,p38MAPK在婴幼儿血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化ERK和p38MAPK信号通路在小儿血管瘤增生、消退中的作用。方法应用免疫组化SP法检测47例血管瘤(增殖期26例、消退期21例)组织中磷酸化ERK和p38MAPK的表达情况。结果磷酸化ERK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(67.71±12.68)%和(21.54±6.85)%;磷酸化p38MAPK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(83.78±5.25)%和(57.79±7.63)%;增生期磷酸化ERK与p38MAPK阳性表达呈正相关,而消退期呈负相关。结论磷酸化ERK和p38MAPK参与血管瘤的增生、消退过程;ERK通路可介导内皮细胞的增生和存活,而p38MAPK可能主要在消退期传递内、外源性凋亡信号,诱导内皮细胞凋亡。

有氧运动对肥胖大鼠海马组织tau蛋白磷酸化水平及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:探讨有氧运动对肥胖大鼠海马组织tau蛋白磷酸化水平及其调控通路PI3K/Akt的影响,为揭示运动改善肥胖导致的神经系统功能紊乱提供一定的理论依据。方法:3周龄雄性SD大鼠随机分为高脂饮食组和正常饮食组,分别以高脂饲料和普通饲料饲养12周。随后高脂饮食组大鼠随机分为高脂安静组(HF-Sed组)和高脂运动组(HF-Ex组)。正常饮食组大鼠随机分为正常安静组(ND-Sed组)和正常运动组(ND-Ex组)。HF-Ex组和ND-Ex组大鼠进行为期8周的跑台训练。训练结束后48小时,分离两侧海马组织。通过Western blot检测各组大鼠海马组织中tau、GSK3β、PI3K和Akt蛋白含量及其磷酸化水平。结果:经过12周的饲养后,高脂饮食组大鼠中有55%符合肥胖大鼠建模成功条件。经过8周跑台训练后,HF-Sed组tau蛋白的磷酸化水平显著高于ND-Sed组;而HF-Ex组tau蛋白的磷酸化水平却显著低于HF-Sed组。另外,HF-Sed组GSK3βSer9位点的磷酸化水平显著低于ND-Sed组,Tyr216位点的磷酸化水平显著高于ND-Sed组,说明HF-Sed组GSK3β激酶活性高于ND-Sed组;而经过8周跑台训练,HF-Ex组GSK3βSer9位点的磷酸化水平显著高于HF-Sed组,Tyr216位点的磷酸化水平显著低于HF-Sed组,说明HF-Ex组GSK3β激酶活性受到抑制。此外HF-Sed组PI3K p110、p85亚基蛋白含量和AktThr308、Ser473位点的磷酸化水平显著低于ND-Sed组,说明HF-Sed组PI3K/Akt通路活性受到抑制;而HF-Ex组PI3K p110、p85亚基蛋白含量和Akt Thr308、Ser473位点的磷酸化水平显著高于HF-Sed组,说明HF-Ex组该通路活性增强。结论:肥胖能够诱导大鼠海马组织tau蛋白磷酸化水平上升,而有氧运动通过提高肥胖大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,抑制GSK3β的激酶活性,从而降低了tau蛋白的磷酸化水平,对于延缓脑内神经纤维缠结的形成,防治肥胖导致的神经系统退行性疾病有积极作用。

丹参-人参组分配伍对肺癌A549细胞侵袭迁移及ERK1/2磷酸化水平的影响

目的研究丹参-人参组分配伍对肺癌A549细胞侵袭迁移以及ERK1/2磷酸化水平的影响。方法采用细胞划痕实验和高内涵细胞成像系统分析丹参-人参组分配伍对肺癌A549细胞迁移的影响;应用实时细胞传感电阻仪Transwell实验动态检测丹参-人参组分配伍对肺癌A549细胞侵袭的影响;通过纳米级超微量蛋白质分析系统检测丹参-人参组分配伍对肺癌A549细胞ERK1/2磷酸化水平的影响。结果丹参-人参组分配伍可显著增加划痕空白区域的距离(P<0.01),且呈一定的时间依赖性;显著降低细胞迁移的面积(P<0.01),且呈一定的剂量依赖性;对A549细胞侵袭有抑制作用(P<0.01),且呈一定的时间依赖性;能够显著降低肺癌A549细胞ERK1/2磷酸化水平(P<0.01)。结论丹参-人参组分配伍能显著降低肺癌A549细胞迁移侵袭的能力,其作用机制可能与降低肺癌A549细胞ERK1/2磷酸化水平有关。

食管鳞癌组织中磷酸化表皮生长因子受体和Akt蛋白的表达

目的:探讨磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)及其下游信号磷酸化蛋白激酶Akt(p-Akt)在食管鳞癌组织中的表达及其相关性。方法:采用免疫组化法检测50例食管鳞癌组织和50例相应癌旁正常食管黏膜组织中p-EGFR和p-Akt蛋白的表达,并分析二者与食管鳞癌患者临床病理特征的关系以及二者在食管鳞癌组织中表达的相关性。结果:食管癌组织中p-EGFR和p-Akt蛋白表达水平均高于癌旁正常食管黏膜组织(χ2配对=9.818和33.390,P<0.05)。p-EGFR和p-Akt蛋白的表达与食管鳞癌的分化程度(χ2=18.083和11.049,P<0.05)、淋巴结转移(χ2=7.284和5.817,P<0.05)有关,与患者的性别、肿瘤直径及TNM分期无关(P>0.05)。此外,p-EGFR和p-Akt蛋白在食管鳞癌中的表达呈正关联(rP=0.501,P<0.001)。结论:p-EGFR和p-Akt蛋白的高表达可能与食管鳞癌的恶性程度密切相关。

低氧预适应小鼠脑内ERK1/2磷酸化水平和蛋白表达量的改变

目的:初步探讨细胞外信号调节激酶(Extracellularsignal-regulatedkinases,ERK1/2)在脑低氧预适应发生发展过程中的作用。方法:按已建小鼠整体低氧预适应模型,将BALB/C小鼠(18～22g,雌雄不限)随机分为正常对照(H0)、早期(H1-H4)和延迟性(H5-H6)低氧预适应等7组(每组至少6只动物)。应用SDS-PAGE和Westernblot等生化技术,并结合GelDoc凝胶成像系统,半定量检测小鼠脑组织内ERK1/2的磷酸化水平和蛋白表达量。结果:①早期低氧预适应形成过程中,随低氧暴露次数的增加(H1-H4),小鼠海马和皮层组织内ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05,n=6),而ERK1/2蛋白表达量并无显著变化;②延迟性低氧预适应中(H5-H6),小鼠大脑皮层和海马组织内ERK1/2的蛋白表达量显著降低(P<0.05,n=6)。结论:ERK1/2的活性降低(磷酸化水平降低),以及ERK1/2蛋白表达量下调可能分别参与了脑早期低氧预适应和晚期延迟性低氧预适应的发生发展过程。

黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞增殖和Akt磷酸化的影响

目的:观察黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞增殖和Akt蛋白磷酸化的影响。方法:用不同浓度的黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)干预MDA-MB-468细胞,用甲基噻唑基四唑法检测不同浓度APS干预对MDA-MB-468细胞增殖的量效和时效关系。用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞株1、2、4和7d后对磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)(Thr308)和p-Akt(Ser473)蛋白表达水平的影响,以及p53/鼠双微体2(murine double minute 2,MDM2)信号转导通路中的关键靶点p53、MDM2和人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白表达水平的影响。用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默PTEN的表达,用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞2d对p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)蛋白表达水平的影响。结果:1和0.5mg/mL的APS对MDA-MB-468细胞的增殖有明显的抑制作用。1和0.5mg/mL的APS干预1、2、4和7d后能下调p-Akt(Thr308)的表达;干预1和2d后下调p-Akt(Ser473)的表达,上调MDM2蛋白的表达;干预7d后上调p53和PTEN蛋白的表达。PTEN沉默后,APS在干预2d后对p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达没有影响,细胞增殖的抑制率低于PTEN未沉默时。结论:APS能抑制MDA-MB-468细胞的增殖,下调MDA-MB-468细胞Akt磷酸化的水平,其抑制MDA-MB-468细胞增殖的机制可能与通过对p53/MDM2正负反馈环的调节从而上调p53和PTEN蛋白的表达有关。