mTOR和ERK/MAPK信号通路调控自噬在孤独症发病中的作用

孤独症是一种以重复刻板样行为和社交缺陷为主要特征的神经发育障碍性疾病,发病率高的特点使其逐渐成为研究的热点。中国与西方国家孤独症的发病率相似,约为1%,位于儿童精神疾病的前列^([1])。目前认为孤独症由环境和遗传因素共同决定,病因复杂,具体机制尚不明确。随着研究的深入,自噬在孤独症发病机制中的作用受到广泛关注。

基于腺苷A3受体活化调控MAPK/ERK信号通路探究针刀疗法治疗兔膝骨关节炎的分子机制

目的基于腺苷A3受体(adenosine A3 receptor,A3R)活化调控MAPK/ERK信号通路探究针刀疗法对兔膝骨关节炎的影响及其分子机制。方法行膝关节腔灌注2%木瓜蛋白酶溶液加膝关节强迫屈曲位法构建KOA模型。50只体质量相近的新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、针刀组、针刀联合A3R拮抗剂组、针刀联合ERK激活剂组,共5组,每组10只大兔(5只雄性、5只雌性)。针刀组行针刀疗法治疗,每周1次,持续4周。针刀联合A3R拮抗剂组、针刀联合ERK激活剂组:在行针刀疗法的同时,分别经耳缘静脉注射A3R拮抗剂MRS1220和MAPK/ERK信号通路激活剂LM22B-10,每周1次,持续4周。干预完成后对各组大兔行行为学观察并评分;采用HE染色法观察右膝关节软骨组织形态变化;采用ELISA法检测右膝关节软骨组织TNF-α、IL-1β、MMP-3水平变化;采用Western Blot法检测右膝关节软骨组织A3R、ERK、p-ERK的蛋白水平;采用Real-time PCR法检测右膝关节软骨组织A3R、ERK1、ERK2的基因表达水平。结果干预完成后,与空白组相比,模型组右膝关节软骨组织损伤严重,Lequesne MG评分均显著上升(P<0.01),TNF-α、IL-1β、MMP-3含量显著上升(P<0.01),A3R蛋白显著减少(P<0.01),p-ERK蛋白显著增加(P<0.01),A3R基因表达显著下调(P<0.01);与模型组相比,针刀组、针刀联合A3R拮抗剂组、针刀联合ERK阻断剂组以上指标皆逆转(P<0.05);与针刀组相比,针刀联合A3R拮抗剂组、针刀联合ERK阻断剂组右膝关节软骨组织损伤改善程度较低,Lequesne MG评分均上升(P<0.05),TNF-α、IL-1β、MMP-3含量上升(P<0.05),A3R蛋白减少(P<0.05),p-ERK蛋白增加(P<0.05),A3R基因表达下调(P<0.05)。5组间ERK蛋白水平差异、ERK1/2基因表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论针刀疗法可明显改善KOA大兔膝关节活动功能,降低相关炎性因子的含量,其作用机制可能与通过其产生的力学效应活化膝关节软骨组织中的A3R从而降低膝关节内致炎因子IL-1β、TNF-α水平和抑制MAPK/ERK信号通路中ERK的磷酸化以降低软骨组织中MMP-3的含量相关。

基于ERK/p38 MAPK信号通路探究解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制

目的探究解毒活血汤调控ERK/p38 MAPK信号通路治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制。方法采用去势手术+苯甲酸雌二醇(EB)诱导慢性前列腺炎大鼠模型。36只SD大鼠随机分为空白组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、阳性药物对照组(前列康片混悬液,4 mL·kg^(-1))、解毒活血汤低(4 mL·kg^(-1))、中(8mL·kg^(-1))、高剂量组(12 mL·kg^(-1)),每组6只,所有实验动物连续给药30 d。苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠组织病理学变化;免疫组化法、RT-PCR、Western Blot技术检测相关炎症因子及蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,慢性前列腺炎大鼠前列腺组织增生及水肿明显、炎症浸润增加,而阳性药物对照组及解毒活血汤各剂量组大鼠前列腺组织病变减轻或消失、炎症浸润减少,且与解毒活血汤剂量成正比;免疫组化表示模型组p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达较高,阳性药物对照组、不同剂量解毒活血汤组的p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达呈下降趋势,且均低于模型组。RT-PCR结果显示阳性药物对照组及解毒活血汤低、中、高剂量组均能降低大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-2、IL-6的表达水平;Western Blot检测提示大鼠疾病发生进展过程中p38、P-p38、P-ERK1/2、STAT3、P-STAT3呈高表达状态,解毒活血汤能够降低其表达,从而降低相关炎症因子的过度激活。结论解毒活血汤能够抑制ERK/p38 MAPK信号通路的过度激活,从而降低IL-2、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,以改善前列腺组织炎症反应。

艾附暖宫丸通过调控MAPK/ERK信号通路对寒凝血瘀型原发性痛经大鼠的影响

目的探讨艾附暖宫丸对寒凝血瘀型原发性痛经(PD)大鼠MAPK/ERK信号通路的影响。方法采用冰水浸泡法联合苯甲酸雌二醇和缩宫素建立寒凝血瘀PD模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、布洛芬组(0.06 g/kg)和艾附暖宫丸低、中、高剂量组(0.36、0.72、1.44 g/kg),每组10只;另取10只正常饲养的大鼠为空白组,各组大鼠灌胃给予相应剂量药物,连续6 d。给药前后,分别对大鼠进行症候评分。末次给药后,观察大鼠扭体反应,取子宫组织测定平滑肌收缩最大张力和频率;ELISA法检测子宫组织PGF_(2α)、IL-6、TNF-α水平;HE染色观察子宫组织病理形态;免疫荧光法观察子宫组织HSP70蛋白表达;Western blot法检测大鼠子宫组织中p38MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果与模型组比较,艾附暖宫丸各剂量组寒凝血瘀型PD的症候评分降低(P<0.05,P<0.01),扭体次数减少(P<0.05,P<0.01),子宫组织中HSP70蛋白及ERK1/2、p38MAPK蛋白磷酸化表达降低(P<0.05,P<0.01);艾附暖宫丸中、高剂量组大鼠扭体潜伏期延长(P<0.05,P<0.01),子宫平滑肌收缩的最大强度和频率降低(P<0.05,P<0.01),子宫组织PGF_(2α)、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论艾附暖宫丸对大鼠实验性寒凝血瘀型PD有良好的改善作用,其机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路活化有关。

黄芪甲苷对肥胖型多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗及MAPK/ERK通路的影响

目的研究黄芪甲苷对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗(IR)的改善作用,并分析对其卵巢MAPK/ERK通路的影响。方法来曲唑联合高脂高糖饮食法构建肥胖PCOS大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍(135 mg/kg)组和低、高剂量黄芪甲苷(25、50 mg/kg)组,每组8只,另设对照组,连续灌胃给药21 d后,记录体质量,计算卵巢指数,测定空腹血糖(FBG)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、促卵泡激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E_(2))、促黄体生成素(LH)及空腹胰岛素(FINS)水平,计算HOMA-IR和LH/FSH值,HE染色观察卵巢组织形态,Western blot法检测卵巢组织MAPK/ERK通路相关蛋白表达,免疫荧光法检测卵巢组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠卵巢形态呈多囊样病态改变,体质量、卵巢指数、血清TG、TC、LH、FSH、T、FINS、FBG水平、LH/FSH和HOMA-IR值、卵巢组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-MEK1/2/MEK1/2、p-Raf/Raf、VEGF蛋白表达升高(P<0.01),血清E_(2)水平降低(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷各剂量组和二甲双胍组大鼠卵巢多囊样病变明显缓解,体质量、卵巢指数、血清TG、TC、LH、FSH、T、FINS、FBG水平、LH/FSH和HOMA-IR值、卵巢组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-MEK1/2/MEK1/2、p-Raf/Raf、VEGF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清E_(2)水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪甲苷可拮抗肥胖PCOS大鼠IR,改善激素水平,减轻其卵巢病变,该作用可能与抑制MAPK/ERK通路活化有关。

欧前胡素调节ERK/MAPK信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响

目的 探讨欧前胡素(Imp)调节细胞外调节蛋白激酶(ERK)/有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响。方法 64只大鼠随机分为对照组12只及造模组52只,造模组大鼠通过尾部注射结核杆菌方法建立肺结核大鼠模型,之后随机分为模型组、Imp低(Imp-L,25 mg/kg)、中(Imp-M,50 mg/kg)、高剂量(Imp-H,100 mg/kg)组、Imp-H+ERK特异性激活剂(EGF,100 mg/kg Imp+25 mg/kg EGF)组。干预结束后,主动脉采血,ELISA检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、环氧化酶-2(COX-2)水平;分离肺组织,HE、Tunel分别检测大鼠肺组织病理学变化及细胞凋亡情况;统计肺组织中结核杆菌菌落数;Western blot检测p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达水平。结果 与对照组相比,模型组肺组织严重病变,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达均显著增加(P<0.05);与模型组相比,Imp-L组、Imp-M组、Imp-H组病理损伤得到缓解,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著降低,以Imp-H组变化最为显著(P<0.05);与Imp-H组相比,Imp-H+EGF组病理损伤进一步加重,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著增加(P<0.05)。结论 Imp可降低肺结核炎症反应,与抑制ERK/MAPK信号通路的激活有关。

锌指蛋白-36缺陷抑制小鼠的成骨细胞分化:基于激活ERK/ MAPK通路

目的探究锌指蛋白-36(ZFP36)对成骨细胞分化的调控作用及机制。方法通过提取小鼠原代骨髓间充质干细胞,结合小鼠成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1,在体外成骨分化诱导状态下观察Zfp36(编码ZFP36)的表达变化。通过干扰RNA技术构建Zfp36缺陷的细胞,观察成骨分化作用的改变。通过第二代转录组测序技术探究Zfp36缺陷细胞成骨分化过程中的转录组水平改变。通过ERK/MAPK信号抑制分子U0126验证Zfp36缺陷对成骨分化作用的调控机制。结果小鼠原代骨髓间充质细胞以及MC3T3-E2细胞中Zfp36表达在成骨分化0~14d过程中呈逐渐升高趋势,在第7天到达峰值时较第0天升高3.85倍(P<0.0001)。抑制上述细胞Zfp36的表达后,成骨分化过程中碱性磷酸酶染色及茜素红染色弱于对照组,成骨分化标志基因Alpl(P<0.01)、Sp7(P<0.001)、Bglap(P<0.01)、Ibsp(P<0.0001)表达显著减弱。转录本测序结果提示Zfp36缺陷细胞的下调基因富集到骨矿化相关基因集中,且与ERK信号相关。蛋白表达检测显示Zfp36缺陷细胞的磷酸化ERK蛋白比例较对照组升高2.1倍(P=0.0274)。通过分子化合物U0126抑制Zfp36缺陷细胞中被激活的ERK/MAPK信号,可观察到表型挽救现象,并且呈剂量依赖。Zfp36缺陷细胞在10μmol/L度U0126作用下碱性磷酸酶染色增强,成骨细胞分化标志基因Runx2(P<0.05)及Bglap(P<0.05)表达显著增高。结论ZFP36参与了小鼠成骨细胞的分化调控过程,Zfp36缺陷会引起ERK/MAPK信号通路的激活,进而抑制成骨细胞向骨细胞的分化。

老年冠心病患者PCI术后心肌再灌注损伤与ERK/MAPK信号通路的相关性

目的探讨老年冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌再灌注损伤的影响因素及与细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路活化的相关性。方法选择2020年3月至2022年12月于郑州大学附属郑州中心医院心血管内科92例行PCI的老年冠心病患者作为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测患者术前ERK、p38-MAPK mRNA的表达,评估PCI术后心肌再灌注损伤情况,分析其影响因素及与ERK/MAPK信号通路指标的关系。结果92例患者中20例(21.74%)PCI术后出现心肌再灌注损伤(损伤组,n=20)。损伤组患者PCI术前血流分级≤2级、Killip分级≥2级比例显著高于非损伤组患者,术前血清ERK、p38-MAPK mRNA表达量高于非损伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素回归分析示,术前血流分级≤2级、Killip分级≥2级及血清ERK、p38-MAPK水平升高是老年冠心病患者PCI术后出现心肌再灌注损伤的影响因素(P<0.05)。结论除血流分级、Killip分级外,术前ERK/MAPK信号通路相关指标高表达可增加老年冠心病患者PCI术后心肌再灌注损伤风险,临床应予以密切监测,以尽早识别心肌再灌注损伤并采取针对性干预措施。

基于MAPK/ERK信号通路探讨孟鲁司特通过自噬改善哮喘模型小鼠肺损伤的机制

目的探究孟鲁司特是否可改善哮喘小鼠肺损伤,并基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路介导的自噬探究其改善肺损伤的机制。方法选取60只无特定病原体(SPF)级BALB/c小鼠:对照组、哮喘组、孟鲁司特组及司美替尼(Selumetinib)组,每组15只。肺功能仪检测小鼠第0.15秒用力呼气容积(FEV_(0.15))、最高呼气流速(PEF)。苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠肺组织病理学形态。Masson染色检测肺组织平滑肌增生与胶原沉积水平。Western blotting检测肺组织中MAPK、ERK、Beclin1及微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)蛋白水平。免疫组织化学检测肺组织中MAPK、ERK蛋白水平。结果与对照组比较,哮喘组小鼠FEV_(0.15)、PEF均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与哮喘组比较,孟鲁司特组FEV_(0.15)、PEF均增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,哮喘组小鼠可见支气管壁增厚、炎性浸润显著等病理学形态损伤;孟鲁司特组可见肺组织病理学形态损伤改善。Masson染色结果显示,哮喘组小鼠支气管平滑肌增厚,且其周围可见胶原大量沉积;孟鲁司特组小鼠支气管平滑肌增生减轻,周围胶原沉积减少。Western blooting检测结果显示,与对照组比较,哮喘组小鼠肺组织中MAPK、ERK、Beclin1、LC3Ⅱ表达水平增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与哮喘组比较,孟鲁司特组小鼠肺组织中MAPK、ERK、Beclin1、LC3Ⅱ表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,哮喘组小鼠FEV_(0.15)、PEF降低,MAPK、ERK、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与哮喘组比较,Selumetinib组FEV_(0.15)、PEF均增加,MAPK、ERK、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论孟鲁司特可改善哮喘小鼠肺损伤,其机制可能与MAPK/ERK信号通路介导的自噬相关。

基于MAPK/ERK信号通路探讨加味芍药甘草汤对AM病灶细胞的干预机制

目的通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路,探讨加味芍药甘草汤治疗子宫腺肌病(Adenomyosis,AM)的可能机制。方法临床收集因AM和宫颈病变行全子宫切除术患者的组织标本,分别作为病例组和对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫蛋白印迹法(Western blot)检测AM组异位病灶与对照组正常肌层及两组间在位内膜中MAPK/ERK信号通路因子蛋白表达水平的差异。对AM病灶细胞分别用加味芍药甘草汤含药血清、正常血清、MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126、米非司酮进行干预,采用qRT-PCR、Western blot检测不同干预方法对病灶细胞MAPK/ERK信号通路因子蛋白表达水平的差异。结果AM组异位病灶ERK2 mRNA、MEK-2蛋白的表达量高于对照组正常肌层,差异有统计学意义(P<0.05)。筛选10%含药血清组为药物血清浓度。U0126组与空白对照组相比,ERK1 mRNA表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);10%含药血清组、米非司酮组、U0126组与10%正常大鼠血清组、空白对照组相比,ERK2 mRNA表达量均有减低,差异有统计学意义(P<0.05);与米非司酮组、10%正常大鼠血清组、空白对照组相比,U0126组中MEK-2表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);与10%正常大鼠血清组、空白对照组相比,U0126组中ERK1/2表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);U0126组、10%含药血清组与其他组相比,NF-κB表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);两组之间表达量差异无统计学意义;U0126组与米非司酮组、空白对照组相比,c-Fos表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味芍药甘草汤含药血清:10%的含药血清能减低MAPK/ERK信号通路中ERK2的表达,抑制AM病灶细胞的过度增殖,进而减缓AM的进展。

基于P38 MAPK/ERK自噬通路探讨五眼果水提物对草酸钙晶体致HKC细胞损伤的抑制作用

目的基于P38 MAPK/ERK通路探讨五眼果水提物抑制一水合草酸钙(COM)晶体致HKC细胞损伤的作用机制。方法将HKC细胞分为正常组、模型组和五眼果水提物高、中、低剂量组(160、80、40μg/mL),除正常组外其余各组用100μg/mL COM晶体构建HKC细胞损伤模型,药物组同时给予相应质量浓度药物。采用MTT法检测细胞存活率,微板法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和粘附在细胞表面钙离子(Ca^(2+))水平,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)结合激光共聚焦显微镜检测自噬流,Western blot法检测细胞LC3B、Beclin1、P62、mTOR、p-mTOR、ERK1/2、p-ERK1/2、P38和p-P38蛋白表达。结果与模型组比较,五眼果水提物组细胞存活率升高(P<0.05),细胞上清液LDH活性和粘附在细胞表面Ca2+水平降低(P<0.05),细胞自噬体和自噬溶酶体形成减少(P<0.05),p-ERK1/2/ERK1/2、LC3BⅡ/LC3BⅠ和Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05),P62、p-P38/P38和p-mTOR/mTOR蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论五眼果水提物通过调控P38 MAPK/ERK信号通路抑制自噬,降低COM晶体与细胞的黏附性,从而减轻草酸钙晶体对肾小管上皮细胞的损伤。

基于MAPK/ERK/NF-κB通路探讨祛瘀温经汤治疗寒凝血瘀证原发性痛经的作用机制

目的探究祛瘀温经汤调控MAPK/ERK/NF-κB信号通路治疗寒凝血瘀证原发性痛经(PD)的机制。方法将60只SPF级雌性未孕SD大鼠分为空白(Control)组10只和造模组50只。造模组大鼠采用苯甲酸雌二醇联合缩宫素+冰水浴法制备寒凝血瘀证PD大鼠模型,再将造模组大鼠随机分为模型(Model)组、少腹逐瘀颗粒(S-F)组、祛瘀温经汤低(Q-L)、中(Q-M)、高(Q-H)剂量组。药物灌胃干预11d后观察大鼠的一般情况、扭体反应;血液黏度仪检测血液流变学指标;HE染色观察子宫组织病理形态;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western Blot法检测细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、细胞核内转录因子(NF-κB)蛋白表达水平;qRT-PCR法检测ERK1、ERK2、NF-κB mRNA转录水平。结果与空白组比较,各组大鼠血液流变学指标、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κB蛋白表达及mRNA转录水平、IL-6、TNF-α含量均显著升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠血液流变学指标、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κB蛋白表达及mRNA转录水平、IL-6、TNF-α含量均降低(P<0.05,P<0.01),且呈剂量相关性。结论祛瘀温经汤治疗寒凝血瘀证PD的作用机制可能与其下调MAPK/ERK/NF-κB信号通路中ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κB的高表达、降低血液流变学指标及IL-6、TNF-α的含量有关,通过抑制炎性因子过度刺激,减缓PD发生发展。

沙眼衣原体T3SS效应蛋白CT622通过激活ERK/p38 MAPK信号通路抑制Hela299细胞凋亡

目的探究沙眼衣原体Ⅲ型分泌系统(T3SS)效应蛋白CT622对Hela299细胞凋亡的影响机制。方法设置不同质量浓度CT622蛋白刺激Hela299细胞,筛选最佳刺激质量浓度。将细胞实验分为PBS组(空白对照)、肿瘤坏死因子(TNF)-α组(阳性对照)、CT622组、CT622+TNF-α组、CT622+PD98059(ERK1/2抑制剂)组、CT622+SB203580(p38抑制剂)组、CT622+TNF-α+PD98059组、CT622+TNF-α+SB203580组。Hoechst33258染色和流式细胞术检测Hela299细胞的凋亡情况。Western blotting检测凋亡相关蛋白裂解的Caspase-3(cleaved-Casepase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和凋亡信号通路中信号分子ERK/p38 MAPK蛋白的表达。结果5 mg/L CT622蛋白为Hela299细胞最佳刺激质量浓度。CT622蛋白显著抑制Hela299细胞的凋亡,并上调ERK1/2、p38 MAPK和Bcl-2蛋白表达,下调Bax和Caspase-3蛋白表达。分别利用ERK1/2和p38 MAPK抑制剂与CT622联合处理可以明显增加Hela299细胞凋亡程度。结论T3SS效应蛋白CT622通过激活ERK/p38 MAPK信号通路抑制Hela299细胞凋亡。

基于MAPK/ERK通路探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征的作用和机制研究

目的:探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征模型的作用及其机制。方法:70只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、空白对照组、达英35组和益肾调经丸低、中、高剂量组,每组10只。采用来曲唑+高脂饲料造模,造模成功后,各治疗组和空白对照组使用相应剂量的药物灌胃28 d。ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,计算LH/FSH;观察卵巢形态改变;HE染色法观察卵巢镜下观;Real-time PCR法检测卵巢组织中CYP17A1、CYP19A1 mRNA表达;Western blot检测p-ERK1/2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠卵巢可见多囊样改变,血清T、LH水平升高,FSH降低,LH/FSH升高,卵巢呈多囊样改变,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达升高,CYP19A1 mRNA表达降低,p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组对比,空白对照组各检测指标无明显变化,各给药组大鼠卵巢多囊样改变缓解,血清T、LH水平降低,FSH升高(P<0.05),卵巢多囊样改变减轻,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达降低,CYP19A1 mRNA表达升高(P<0.05),治疗组p-ERK1/2蛋白表达水平有不同程度改善,其中益肾调经丸各治疗组的改善比较差异有统计学意义(P<0.05),达英35组的变化比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾调经丸能够改善PCOS大鼠性激素水平,减轻卵巢多囊样改变。益肾调经丸可能是通过MAPK/ERK信号通路降低CYP17A1、上调CYP19A1表达,降低雄激素水平,从而改善PCOS大鼠卵巢多囊样改变及高雄激素状态。

基于MAPK/ERK/NF-κB信号通路探讨中西医结合治疗原发性痛经的研究进展

痛经(Dysmenorrhea)是临床常见妇科疾病,中医亦称“经行腹痛”,是指女性在行经前后或月经期,下腹部出现痉挛性疼痛,亦可放射至腰骶部,伴或不伴有恶心呕吐、腹泻及头晕乏力等全身症状。痛经可分为原发性和继发性两类,其中原发性痛经指生殖器官无器质性病变者;继发性痛经则是由于盆腔器质性疾病,如子宫内膜异位症、子宫腺肌症、子宫肌瘤、盆腔炎或宫颈狭窄等引起者。目前西医治疗原发性痛经多以解痉止痛的药物治疗,疗效虽显著而快速,但是副作用较大,停药后易复发;而中医在临床上四诊合参,辨证论治,不仅可以标本同治,也有助于预防调摄。通过梳理归纳近10年国内外原发性痛经的文献资料,基于MAPK/ERK/NF-κB信号通路探析原发性痛经的中西医研究进展,以期为中医药防治原发性痛经提供理论依据。现将原发性痛经的研究现状综述如下。

青藤碱通过MAPK/ERK/mTOR通路诱导自噬抑制人食管癌TE-1细胞增殖

目的:研究青藤碱对人食管癌TE-1细胞增殖、自噬的作用和机制。方法:将TE-1细胞分成对照组、青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组。对照组不做处理,青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组分别予以相应浓度的青藤碱干预。光学显微镜观察细胞形态改变,Hochest染色检测活细胞数,CCK8法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,透射电镜观察自噬小体情况,免疫荧光检测LC3表达情况,Western blotting检测LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、ERK1/2、p-ERK1/2、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量。结果:在200、400、800 mg/L青藤碱的作用下,TE-1细胞皱缩、变圆,漂浮在培养液中,活细胞数不断减少。青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组活细胞数比例显著低于对照组(P<0.01),细胞抑制率、细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组TE-1细胞内自噬小体多于对照组;青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组TE-1细胞LC3表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达量均显著高于对照组(P<0.01),p-ERK1/2/ERK1/2及p-mTOR/mTOR比值均显著低于对照组(P<0.01)。结论:青藤碱能抑制人食管癌TE-1细胞增殖,其机制与抑制MAPK/ERK/mTOR通路和诱导自噬有关。

MAPK/ERK信号通路在益气解毒方水提物诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的 研究益气解毒方水提物对鼻咽癌细胞凋亡的影响,并从MAPK/ERK信号通路探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 CCK-8法检测益气解毒方水提物对CNE1、CNE2细胞增殖的影响;Hoechst 33342染色法、JC-10染色法、荧光双染流式细胞仪检测其对CNE1、CNE2细胞凋亡的影响;Western blot法检测其对CNE1、CNE2细胞蛋白表达的影响。结果 益气解毒方水提物能抑制CNE1、CNE2细胞增殖( P <0.05)、诱导凋亡( P <0.05);药物作用48 h后,Survivin、XIAP、Bcl-2表达下降,Bax表达上升,MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf、p-MEK、p-ERK表达下降( P <0.05);在此基础上,加入激活剂ISO和益气解毒方水提物后,与单用益气解毒方水提物相比,p-c-Raf、p-MEK、p-ERK1/2表达上调,Survivin、XIAP、Bcl-2表达增加,Bax表达下降,促凋亡效应也降低( P <0.05)。结论 益气解毒方水提物可诱导鼻咽癌细胞凋亡,该效应与其抑制MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf、p-MEK、p-ERK1/2表达,进而下调Survivin、XIAP、Bcl-2表达,上调Bax表达有关。

少腹逐瘀汤对子宫内膜异位症大鼠MAPK/ERK信号通路的影响

目的:观察少腹逐瘀汤对子宫内膜异位症大鼠丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响,探讨少腹逐瘀汤治疗子宫内膜异位症的分子机制。方法:健康雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、痛经宝阳性对照组及少腹逐瘀汤低、中、高剂量组。构建大鼠子宫内腹异位症模型,药物处理4周后,HE染色观察异位子宫组织的病理变化; ELISA法检测宫腔组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及IL-8的含量; RT-qPCR检测宫腔组织中ERK、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA表达量; Western blot检测宫腔组织中核因子-κB(NF-κB)、MAPK和MAPK-ERK激酶(MEK)的蛋白含量。结果:与模型组相比,少腹逐瘀汤中、高剂量组大鼠子宫组织中TNF-α、IL-6及IL-8含量显著降低(P <0. 05),ERK、VEGF和MMP-9的m RNA表达量显著降低(P <0. 05),NF-κB、MEK和MAPK的蛋白表达显著下降(P <0. 05)。结论:少腹逐瘀汤通过调节MAPK/ERK信号通路中关键分子的作用,达到治疗子宫内膜异位症的效果。

纳布啡通过激活MAPK/ERK信号通路减轻心肌缺血再灌注大鼠心脏损伤

目的:探究纳布啡(NAL)对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠心脏损伤的影响及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的关系。方法:经在体冠脉阻断法构建MIR大鼠模型,随机分为MIR组、NAL组和NAL+PD98059[MAPK激酶1/2(MEK1/2)抑制剂]组,另设假手术(sham)组,每组10只。系活结30 min后,各组大鼠给予相应的生理盐水、2.5 mg/kg NAL和10 mg/kg PD98059腹腔注射。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)、HE及TUNEL染色分别检测心肌梗死面积、病理变化及细胞凋亡情况;试剂盒检测血清肌酸激酶(CK)、心肌钙蛋白T(cTnT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,以及心肌丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和总抗氧化能力(T-AOC)水平;Western blot检测心肌凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白水平。结果:相比于sham组,MIR组心肌纤维断裂,心肌细胞变形,可见炎症细胞浸润,心肌梗死面积增大,细胞凋亡率,心肌cleaved caspase-3蛋白水平,血清CK、cTnT和LDH水平,以及心肌MDA和ROS水平显著升高(P<0.05),而心肌SOD和T-AOC水平及Raf、MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05)。相比于MIR组,NAL干预可减轻心肌病理损伤,缩小心肌梗死面积,降低细胞凋亡率和心肌cleaved caspase-3蛋白水平,降低血清CK、cTnT和LDH水平及心肌MDA和ROS水平(P<0.05),升高SOD和T-AOC水平及Raf、MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平(P<0.05),而PD98059能在一定程度上减弱NAL的保护作用。结论:NAL可能通过激活MAPK/ERK信号通路调节氧化应激和凋亡,从而减轻MIR导致的心脏损伤。

齐墩果酸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区MAPK/ERK通路相关蛋白表达的影响

目的探讨MAPK/ERK信号转导通路在阿尔茨海默病中的变化,以及中药女贞子有效成分齐墩果酸治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的部分作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和齐墩果酸组,采用侧脑室注射聚集态β-淀粉样蛋白25-35建立AD大鼠模型。齐墩果酸组大鼠予20mg·kg-1齐墩果酸,假手术和模型组予等体积蒸馏水,各组均每日灌胃1次,共灌胃4周。采用Western blot法检测各组大鼠海马区Ras、Raf-1、B-Raf、MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达的变化。结果与假手术组比较,模型组Ras、Raf-1、MEK1/2、ERK1/2、pERK1/2相对表达量和p-ERK1/2与ERK1/2相对表达量比值均显著增加,B-Raf表达量显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,齐墩果酸组Raf-1、MEK1/2、p-ERK1/2表达量和p-ERK1/2与ERK1/2相对表达量比值均显著下降,B-Raf表达量显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MAPK/ERK通路在AD模型大鼠脑中被过度激活,齐墩果酸可能是通过调控MAPK/ERK通路活性,从而达到治疗AD的作用。