ERK信号通路与MMP-9在肺腺癌表达中的相关性

目的研究细胞外信号调节激酶(ERK)通路与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肺腺癌表达中的相关性及意义。方法应用免疫组织化学(SP)法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)、MMP-9在67例肺腺癌组织中的表达。Western blot检测PD98059阻断ERK信号通路后肺癌细胞MMP-9蛋白表达水平的变化。结果 pERK蛋白在肺腺癌组织和正常组织中高表达率分别为65.6%、14.3%;MMP-9蛋白在肺腺癌组织和正常组织中高表达率分别为73.1%、21.4%。pERK与MMP-9表达存在正相关(r=0.57,P<0.05)。pERK、MMP-9的表达均与肺腺癌的TNM分期及淋巴转移状况相关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。用ERK阻断剂PD98059阻断ERK信号通路可降低MMP-9蛋白表达水平,并且随PD98059浓度升高MMP-9蛋白表达水平逐渐降低。结论 ERK信号通路可能通过上调MMP-9的表达促进肺腺癌的恶性进展,ERK信号通路可能是肺腺癌侵袭和转移的重要途径。

ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK、MMP-9基因表达的影响

目的:探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用.方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,采用MTT法观察胃癌细胞MGC-803增殖情况,Westernblot检测P-ERK的蛋白表达,RT-PCR法和Westernblot法检测RECK和基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA和蛋白表达.结果:MTT法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制胃癌MGC803细胞增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059的有效浓度为25μmol/L,在此浓度下有效时间为24h;Westernblot法检测结果显示PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调P-ERK1/2,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;RT-PCR法和Westernblot法检测结果显示PD98059能够浓度依赖性(25-100μmol/L)和时间依赖性(12-48h)刺激培养的胃癌MGC803细胞RECKmRNA和蛋白表达增加,MMP-9mRNA和蛋白表达下降.结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,上调RECK的表达,下调MMP-9的表达,从而抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖、生长.

IL-17A通过p38 MAPK/ERK1/2信号通路上调慢性鼻窦炎患者MMP-9的表达

目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)在介导慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的作用及机制,为临床治疗CRSwNP组织重塑寻找新靶点。方法:收集以CRSwNP为诊断的患者15名,鼻中隔偏曲患者15名。采用ELISA、RT-qPCR和免疫组织化学染色方法检测患者相关组织中IL-17A和MMP-9的表达水平;HE染色法观察患者钩突及鼻息肉组织黏膜的病变;Western blot检测鼻息肉原代细胞和人鼻黏膜上皮细胞(HNEpCs)中MMP-9和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的表达;细胞免疫荧光观察HNEpCs中MMP-9的表达变化。结果:CRSwNP患者IL-17A和MMP-9的表达明显增加,其鼻部组织黏膜炎症浸润明显。鼻息肉及IL-17A刺激的HNEpCs中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38磷酸化表达明显增加,而鼻息肉成纤维细胞或HNEpCs予以ERK1/2或p38抑制剂预处理可降低以上蛋白的表达水平。结论:IL-17A可能在CRSwNP的组织重塑中对MMP-9的调控发挥至关重要的作用,其机制可能与p38 MAPK/ERK1/2信号通路有关。

大建中汤介导ERK1/2信号通路调控脾阳虚胃癌动物模型MMP-9的表达

目的:探讨大建中汤对SD大鼠脾阳虚胃癌模型胃癌组织中细胞外调节蛋白激酶1、2(ERK1、ERK2)、基质金属蛋白酶-明胶酶(MMP-9)mRNA的影响。方法:将健康SD大鼠随机分为正常组(A)、模型组(B)、大建中汤高、低剂量组(C、D组,给药剂量为生药10.8、5.4 g/kg)、西药对照组(E组,给药剂量为0.019g/kg)。A组予生理盐水,1次/d;B、C、D、E组予番泻叶水浸液灌胃、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)储存液自由饮用,并使其饮食失节、疲劳过度复制脾阳虚胃癌动物模型。5个月后,B组予生理盐水,1次/d;C、D组予大建中汤,1次/d;E组予环磷酰胺,1次/d。15d后,处死大鼠。应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,检测大鼠ERK1、ERK2、MMP-9mRNA的表达量。结果:模型组ERK1、ERK2、MMP-9mRNA的表达量明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);大建中汤高、低剂量组、西药组ERK1、ERK2、MMP-9mRNA的量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大建中汤可通过调节ERK1/2信号通路调控MMP-9的表达。

ERK-VEGF/MMP-9信号通路对肝癌HepG2细胞不良生物学行为的调控作用

目的:探究ERK-VEGF/MMP-9信号通路对肝癌HepG2细胞不良生物学行为的调控作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞,54个培养皿分为对照组,阻断组及转染组,各18。对照组不进行干预;阻断组使用特异性ERK-VEGF/MMP-9信号通路抑制剂GDC-0994;转染组转染ERK1质粒。MTT法检测HepG2细胞增殖情况;流式细胞仪检测HepG2细胞周期及凋亡变化;Transwell实验分析HepG2细胞迁移、侵袭情况;Western blot法检测ERK、VEGF以及MMP-9蛋白表达。结果:与对照组相比,阻断组细胞增殖率下降、S期及G_(2)/M期细胞占比增加、细胞凋亡率增加、细胞迁移及侵袭数降低(P<0.05),转染组细胞增殖率上升、S期及G_(2)/M期细胞占比减少、细胞凋亡率下降、细胞迁移及侵袭数增加(P<0.05)。与对照组相比,阻断组ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均下降(P<0.05);转染组ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均上升(P<0.05)。结论:阻断ERK-VEGF/MMP-9信号通路可抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭,促进其凋亡。

靶向siRNA阻断Wnt/β-catenin信号通路对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞VEGF、MMP-9表达的影响

目的通过观察人子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达,及利用siRNA靶向沉默β-catenin基因以阻断Wnt/β-catenin信号通路来观察其下游靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路在子宫内膜异位症发生机制中的作用。方法采用随机、对照设计,将体外分离、培养的24例子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞分成3组(n=8):空白组、阴性组(以含阴性荧光siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染)以及siRNA干扰组(以含β-catenin siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染),并以10例非子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞作为正常组。利用Real-time PCR和Western blot方法分别检测子宫内膜异位症在位子宫内膜空白组和非子宫内膜异位症正常组β-catenin的表达。转染24h后,用以上方法分别检测子宫内膜异位症空白组、阴性组和siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9的表达。结果子宫内膜异位症空白组β-catenin mRNA和蛋白的表达明显高于非子宫内膜异位症正常组(均P<0.05)。子宫内膜异位症siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9mRNA和蛋白的表达明显低于空白组和阴性组(均P<0.05),而空白组与阴性组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达明显高于非子宫内膜异位症患者,阻断Wnt/β-catenin信号通路后,其下游靶基因VEGF、MMP-9的表达明显受到抑制。因此,Wnt/β-catenin信号通路可能在子宫内膜异位症的发生机制中起重要作用。

Rho/ROCK信号通路对在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的探讨Rho/ROCK信号通路激活后,在异位子宫内膜间质细胞中NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的变化情况及可能的作用机制,为临床提供新的治疗靶点。方法取90例卵巢处子宫内膜在异位病灶以及90例正常子宫内膜,分离、纯化间质细胞,建立体外间质细胞培养模型。酶免疫吸附的方法分析ROCKⅠ激酶活性。QPCR法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的转录水平,免疫印迹(Western blot)法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达水平。结果在异位子宫内膜间质细胞多呈梭形或者多角形,贴壁和增殖较快;在异位子宫内膜间质细胞的ROCKⅠ激酶活性和转录水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01);在异位子宫内膜间质细胞的NF-κB、MMP-9转录水平和蛋白表达水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01),而TIMP-1的转录水平和蛋白表达水平显著低于正常子宫内膜(P<0.01)。结论在异位子宫内膜间质细胞中Rho/ROCK信号通路处于激活状态,Rho/ROCK信号通路激活以后,在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9的表达均升高,TIMP-1的表达降低。其机制可能与该通路激活后引起下游基因表达变化有关。

正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控作用

目的观察人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对其下游基因MMP-2、MMP-7和MMP-9的影响。方法采用GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,提取胞核蛋白β-catenin,采用Western blotting检测胞核蛋白β-catenin的表达变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达变化。结果 Western blotting结果显示,GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于人滑膜细胞后,β-catenin在胞核蛋白中的表达水平明显升高,并随着GSK-3β选择性抑制剂作用时间的延长,β-catenin的表达逐渐增强,呈时间依赖性,而在其干预的第48小时,胞核蛋白β-catenin的表达变化最明显,是正常组滑膜细胞的5.8696倍,具有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附法(ELISA)结果显示,与正常组滑膜细胞比较,SB-216763干预的滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达分别是正常滑膜细胞的4.6188、3.2443和2.9979倍,具有统计学意义(P<0.05)。结论①SB-216763成功激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;②MMP-2、7、9在人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后其表达显著升高,证明激活Wnt/β-catenin信号通路对MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达有一定的调控作用。③Wnt/β-catenin信号通路在骨性关节炎患者中是激活的,而其对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控可能是导致关节软骨降解,促进骨关节炎形成的作用机制之一。该实验结果有助于从单一通路阐释Wnt/β-catenin信号通路对膝骨关节炎的作用机制。

丹参酮联合大黄素通过NF-κB信号通路抑制肝细胞癌细胞中MMP-9的表达

目的:探究丹参酮联合大黄素对人肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响的潜在分子机制。方法:将购买的HCC细胞系Hep G2进行复苏,分为Emodin(18μmol/L,EMO组)、Tan(10μmol/L,Tan组)、Emodin+Tan(Emodin:18μmol/L;Tan:10μmol/L,EMO+Tan组)和保持未处理(Ctrl组)分别培养,孵育后,对各组Hep G2细胞株行MTT检测,评估各组细胞增殖能力;使用流式细胞术检测,观察各组细胞凋亡率;使用细胞侵袭实验,观察各组细胞侵袭能力;使用细胞划痕修复试验,观察各组细胞迁移能力;使用qRT-PCR、荧光素酶测定检测各组细胞内MMP-9mRNA表达和启动子活性情况;使用蛋白免疫印迹实验分析细胞内MMP-9蛋白表达情况;使用Ch IP分析NF-κB与人MMP-9启动子的结合活性。结果:MTT检测结果发现,低浓度丹参酮联合大黄素组(EMO+Tan组)细胞增殖显著低于Ctrl组;流式细胞术检测结果观察到EMO+Tan组细胞凋亡率显著高于Ctrl组;细胞侵袭实验结果显示,EMO+Tan组细胞侵袭数量显著低于Ctrl组;细胞划痕修复试验结果显示,EMO+Tan组细胞迁移数量显著低于Ctrl组;qRT-PCR和荧光素酶测定结果显示,EMO+Tan组MMP-9mRNA和启动子活性显著低于对照组;蛋白免疫分析结果显示EMO+Tan组MMP-9蛋白表达显著低于Ctrl组;ChI P结果显示,EMO+Tan组NF-κB与MMP-9启动子的结合活性显著降低。上述各组实验中,低浓度EMO组和Tan组与Ctrl组相比均无显著差异性。结论:在低浓度时,丹参酮联合大黄素可以通过抑制NF-κB信号通路来抑制细胞内MMP-9表达,从而抑制HCC肿瘤细胞在体外的生长、侵袭和迁移。

灯盏花素对H9c2心肌细胞增殖凋亡及其对ERK1/2信号通路活化的影响

目的观察灯盏花素(Bregenin,Bre)对H9c2心肌细胞增殖与凋亡及其对ERK1/2信号通路活化的作用.方法H9c2心肌细胞分实验组及对照组,实验组均采用H2O2(200μmol/L)处理建立心肌细胞缺氧模型,随后分别以0(Model)、20、40、80μmol/L的Bre、ERK1/2抑制剂(50μmol/L PD98059)、Bre联合ERK1/2抑制剂(80μmol/L Bre+50μmol/L PD98059)处理,对照组则以等量生理盐水处理.48 h后采用MTT法检测细胞的增殖率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达的变化.结果对照组、模型组及低、中、高Bre组和PD98059组、Bre+PD98059组的细胞增殖率分别为(99.87±0.22)%、(65.37±4.52)%、(73.76±6.23)%、(81.25±5.16)%、(92.52±6.63)%、(67.09±3.81)%、(66.82±4.33)%,凋亡率分别为(6.26±0.17)%、(72.57±2.12)%、(59.36±2.85)%、(51.29±2.03)%、(30.71±1.39)%、(71.22±3.63)%、(70.56±2.91)%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01).各组H9c2心肌细胞ERK1/2蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05).与对照组相比,模型组及各剂量Bre组和PD98059组H9c2心肌细胞内p-ERK1/2蛋白表达均显著增加(P<0.05).与H2O2模型组比较,Bre的干预显著升高了p-ERK1/2表达量(P<0.01),PD98059处理后均显著抑制了p-ERK1/2的表达(P<0.01).结论灯盏花素对H9c2缺氧心肌细胞增殖与凋亡具有明显的调控作用,可能与活化ERK1/2信号通路有关.

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响,探讨其稳定AS易损斑块可能的作用机制。方法70只新西兰大耳白兔随机分为空白组(10只)和手术组(60只),采用高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤+基因转染+药物触发建立AS易损斑块兔模型。将手术组兔随机分为模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组和抑制剂组,直接灸组和隔药饼灸组取“巨阙”、双侧“天枢”“丰隆”和双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”,2组穴位隔日交替施灸,西药组予阿托伐他汀1.96 mg/(kg·d)口服,抑制剂组耳缘静脉注射盐酸法舒地尔10 mg/(kg·d),空白组和模型组只捆绑不干预,连续8周。ELISA检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,HE染色观察兔腹主动脉内膜和中膜形态,免疫组化染色检测腹主动脉Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho相关卷曲形成蛋白激酶1(ROCK1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,天狼猩红染色测定胶原纤维含量。结果与空白组比较,模型组兔血清HDL-C含量显著减少(P<0.01),LDL-C含量显著增加(P<0.01);腹主动脉结构紊乱,内膜增厚;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01),胶原纤维含量显著减少(P<0.01)。与模型组比较,隔药饼灸组兔血清HDL-C含量显著增加(P<0.05),LDL-C含量显著减少(P<0.01);斑块中细胞形态较模型组更为完整,内膜、中膜界限明显;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.01),胶原纤维含量显著增加(P<0.01)。结论隔药饼灸可调节AS易损斑块兔HDL-C、LDL-C含量,稳定易损斑块,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路、增加胶原纤维含量,进而增加纤维帽厚度有关。

Yap抑制剂抑制NF-κB/MMP-9信号通路诱导结直肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨Yap抑制剂抑制NF-κB/MMP-9信号通路诱导结直肠癌细胞凋亡的研究。方法:对Control(结直肠癌细胞株SW480)、Yap mimics(结直肠癌细胞株+Yap促进)和Yap Inhibitor(结直肠癌细胞株+VGLL4)进行转染、通过qPCR、免疫印记、Western-blot、流式细胞检测Yap、NF-κB和MMP-9水平、E-cadherin和vimentin mRNA、细胞的凋亡情况。结果:Yap在结肠癌细胞株属于高表达,Control中的NF-κB和MMP-9表达水平显著低于Yap mimics(P<0.05),Yap mimics中的NF-κB和MMP-9表达水平明显高于Yap Inhibitor(P<0.05),与Control相比,Yap Inhibitor中的NF-κB和MMP-9表达明显降低(P<0.05);Control中的E-cadherin mRNA显著低于Yap mimics(P<0.05),Yap mimics中的E-cadherin mRNA明显高于Yap Inhibitor(P<0.05);Control中的vimentin mRNA显著高于Yap mimics(P<0.05);Yap Inhibitor结直肠癌细胞凋亡数量与Control和Yap mimics相比凋亡最多(P<0.05),与Control相比,Yap mimics结直肠癌细胞凋亡数量最少(P<0.05)。结论:Yap抑制剂通过阻碍NF-κB/MMP-9信号通路的发展,促进结肠癌细胞的凋亡,抑制细胞增殖,阻止结直肠癌继续发展。

炎症微环境作用下BMP9通过ERK5/KLF4信号通路促进牙周膜干细胞成骨分化

目的:探讨骨形态蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)在炎症环境中是否通过ERK5/KLF4信号通路促进牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化。方法:利用重组腺病毒技术,在TNF-α刺激的PDLSCs中过表达BMP9,通过RT-PCR和Western印迹法检测成骨相关基因及蛋白的表达变化。随后,通过转染技术使KLF4在PDLSCs中过表达,在炎症条件下观察其对成骨分化及相关基因表达的效应。在KLF4敲低的背景下过表达BMP9,观察其对成骨分化的影响。添加ERK5抑制剂BIX02189,揭示ERK5在BMP9诱导的成骨分化中的关键作用。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:BMP9在炎症环境下显著促进PDLSCs成骨分化,并增强KLF4表达。KLF4过表达进一步加强了PDLSCs成骨分化。然而,当KLF4被敲低时,BMP9对PDLSCs成骨促进效应受到明显抑制。BMP9处理显著增加ERK5磷酸化水平,但在ERK5被抑制后,BMP9对成骨分化的促进效应大幅减弱。结论:BMP9可在炎症环境中通过ERK5/KLF4信号通路显著促进PDLSCs成骨分化。

Apelin-13对H9c2心肌细胞增殖及ERK1/2信号通路活化的影响

目的分析Apelin-13对H9c2心肌细胞增殖及ERK1/2信号通路活化的影响。方法体外培养后的H9c2心肌细胞分为对照组、Apelin-13组、U0126(ERK1/2抑制剂)组和Apelin-13+U0126四组。对照组:只使用10%的FBS和DMSO处理;Apelin-13组:在对照组基础上分别加入浓度为0.0001,0.001,0.01和0.1μmol/L的Apelin-13(n=5);U0126干预组:在对照组基础上加入浓度为10μmol/L的U0126;Apelin-13+U0126组:在对照组基础上分别加入0.1μmol/L的Apelin-13和10μmol/L的U0126。各组依次恒温培养24 h后,采用MTT法测定H9c2心肌细胞在490 nm处各组的光密度值(OD值,n=5)并计算其细胞增值率,采用Western blot法测定各实验组ERK1/2信号通路磷酸化水平。结果与对照组比较,U0126干预组所测各细胞指标差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,Apelin-13组的干预显著升高各组H9c2心肌细胞的OD值,促进了H9c2心肌细胞的增殖,升高了心肌细胞的p-ERK1/2表达量;并且0.001～0.1μmol/L Apelin-13四组间,细胞增值率及p-ERK1/2表达量有显著的统计学差异,随Apelin-13剂量的增加,各组的OD值、细胞增殖率及p-ERK1/2表达量亦显著升高(P<0.05)。与Apelin-13组比较,Apelin-13+U0126组H9c2心肌细胞的OD值、细胞增值率及p-ERK1/2表达量显著降低(P<0.05)。结论 Apelin-13促进了H9c2心肌细胞的增殖,并存在显著的剂量依赖性,Apelin-13通过ERK1/2信号通路调控了H9c2心肌细胞的细胞增殖。

七氟醚通过靶向miR-203调控ERK/MMP-9通路抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨七氟醚对结直肠癌细胞(CRC)的迁移和侵袭的影响,分析miR-203及ERK/MMP-9通路在其中的调节作用。方法将人CRC细胞系SW620分为2组:对照组和七氟醚组。七氟醚组通入4%的七氟醚、5%CO2-95%O2,对照组通入5%CO2-95%O2,持续通入6 h。划痕实验检测2组细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western Blot检测ERK和MMP-9蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测miR-203及其靶基因Robo1 mRNA的表达。结果与对照组相比,七氟醚组的细胞迁移速率及穿膜细胞数显著降低(P<0.05),p-ERK和MMP-9的表达显著降低(P<0.05),而ERK的表达无显著变化。经TargetScan软件预测miR-203在Robo13’UTR端有2个结合位点。七氟醚组miR-203的表达显著高于对照组(P<0.05),而Robo1 mRNA和Robo1蛋白的表达显著低于对照组(P<0.05)。结论七氟醚可抑制CRC细胞的迁移和侵袭,机制可能与其调控miR-203/Robo1的表达,进一步阻断ERK/MMP-9通路有关。

细胞外信号调节激酶信号通路与基质金属蛋白酶-26在肺腺癌表达中的关系

目的研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路与基质金属蛋白酶-26(matrix metalloproteinase-26,MMP-26)在肺腺癌表达的相关性及意义。方法应用免疫组织化学(S-P)法检测pERK、pp38MAPK及MMP-26在44例肺腺癌组织中的表达。Western blot检测U0126阻断ERK信号通路后肺腺癌A549细胞MMP-26蛋白表达水平的变化。分析pERK和MMP-26表达与肺腺癌预后的关系。结果pERK、pp38MAPK及MMP-26蛋白在肺腺癌组织中高表达率分别为59.1%、20.4%、54.5%,pERK与MMP-26表达存在正相关(r=0.63,P<0.05),并与肺腺癌的临床分期及淋巴转移状况有统计学差异(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无统计学差异(P>0.05)。pp38MAPK与MMP-26表达无关(r=0.01,P>0.05),与患者年龄、淋巴转移、肿瘤大小、临床分期均无统计学差异(P>0.05)。用ERK阻断剂U0126阻断ERK信号通路可降低MMP-26蛋白表达水平,并且随U0126浓度升高MMP-26蛋白表达水平逐渐降低。肺腺癌组织pERK、MMP-26蛋白的表达与肿瘤的预后显著相关(分别为Log-Rank=5.52、Log-Rank=7.01,P=0.019、P=0.008)。结论ERK信号通路可能通过上调MMP-26的表达促进肺腺癌的恶性进展,ERK信号通路可能是肺腺癌侵袭和转移的重要途径,pERK和MMP-26的表达可辅助用于肺腺癌的预后评估。

Notch信号通路与兔深Ⅱ度烧伤创面血管相关因子的表达

目的:探讨Notch信号通路与兔深Ⅱ度烧伤模型创面血管相关因子表达的关系。方法:120只新西兰大白兔,随机分为阻滞剂组、模型组、对照组。其中阻滞剂组于造模前1 d及造成深Ⅱ度烫伤后连续14 d按2 mg/kg注射γ-分泌酶阻滞剂(gamma-secretase inhibitor,GSI),每天1次;模型组同期注射生理盐水,每天1次;对照组不予造模,余同模型组。每组分别于第3,7,14,21,28天随机抽取8只处死,采用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)的表达。结果:模型组与阻滞剂组造模后21 d内VEGF和VEGFR-2的表达逐步上升,第21天后有所下降,而MMP-2和MMP-9的表达逐步下降,第21天后有所上升,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);各时间点模型组VEGF和VEGFR-2的表达均高于阻滞剂组,MMP-2和MMP-9的表达均低于阻滞剂组,差异具有统计学意义(P<0.05),阻滞剂组在造模后21 d内,VEGFR-2的表达与VEGF呈正相关,而MMP-2和MMP-9则与VEGF呈负相关。结论:在兔深Ⅱ度烧伤模型创面中,Notch信号通路被阻滞能够减弱创面血管生成因子VEGF和VEGFR-2的表达,而上调抑制因子MMP-2和MMP-9的表达。

经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及TGF-β_1水平的影响

目的:探讨经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎(KOA)患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及转化生长因子β_1(TGF-β)1水平的影响。方法:将KOA患者98例(98膝)随机分为2组各49例,对照组给予嘎日迪-15味丸治疗,实验组在对照组基础上给予经筋微创松解疗法,疗程均为2个月;观察2组治疗效果,比较2组治疗前后膝关节WOMAC评分、关节液中前列腺素E_2(PGE)2、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、TGF-β_1水平、关节软骨中Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB (NF-κB)蛋白表达。结果:总有效率实验组为89.90%,对照组为71.43%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组功能、关节疼痛、僵硬等评分均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项评分均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节积液TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节软骨MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达水平较治疗前降低,且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。结论:经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸治疗KOA疗效显著,其作用机制可能与降低MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达及TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平有关。

载脂蛋白E影响星形胶质细胞基质金属蛋白酶-9表达的机制研究

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)影响星形胶质细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的机制。方法(1)体外培养C57BL/6J种属的野生型(WT)和ApoE基因敲除型(ApoE-/-)乳鼠的星形胶质细胞,利用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体行免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞。(2)将WT和ApoE-/-乳鼠星形胶质细胞分别分为空白对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)和阳性沉默组(KD组),Control组不加任何病毒,NC组加入阴性对照慢病毒,KD组加入沉默p65基因的阳性慢病毒,用siRNA慢病毒沉默星形胶质细胞核因子-κB(NF-κB)p65基因,抑制NF-κB信号转导,应用Western blot检测NF-κB p65蛋白的表达,ELISA法检测细胞MMP-9和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。(3)用TNF-α刺激上述各组细胞24h,ELISA法检测刺激前后各组细胞MMP-9的浓度。结果(1)KD组两种细胞NF-κB p65蛋白的表达水平、MMP-9和TNF-α的浓度均显著低于Control组和NC组(P<0.05);而Control组和NC组细胞NF-κB p65蛋白的表达水平、MMP-9和TNF-α的浓度间的差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ApoE-/-细胞MMP-9和TNF-α的浓度在Control组和NC组中均高于WT细胞(P<0.05);而在KD组中与WT细胞无明显差异(P>0.05)。(3)TNF-α刺激24h后,Control组和NC组两种细胞MMP-9的浓度均升高(P<0.05);而KD组MMP-9的浓度无明显变化(P>0.05)。结论ApoE可能通过TNF-α/NF-κB信号通路影响星形胶质细胞MMP-9表达,从而影响血脑屏障的完整性。

MMP-9信号通路调控乳腺癌发展的机制

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤,早期症状多不明显,晚期可发生癌细胞远处转移,出现全身多器官病变,增加临床治疗难度,严重影响患者生活质量和生命安全。目前,乳腺癌的发病机制尚不明确,研究乳腺癌的发生、发展,尤其是转移相关的调控机制对乳腺癌的治疗具有重要意义。近年来研究表明MMP-9相关信号通路与乳腺癌的发生发展密切相关。本文就MMP-9的结构与生物学功能及其介导的乳腺癌侵袭及转移机制与预后作一综述,以期为临床治疗提供参考。