基于ERK/p38 MAPK信号通路探究解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制

目的探究解毒活血汤调控ERK/p38 MAPK信号通路治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制。方法采用去势手术+苯甲酸雌二醇(EB)诱导慢性前列腺炎大鼠模型。36只SD大鼠随机分为空白组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、阳性药物对照组(前列康片混悬液,4 mL·kg^(-1))、解毒活血汤低(4 mL·kg^(-1))、中(8mL·kg^(-1))、高剂量组(12 mL·kg^(-1)),每组6只,所有实验动物连续给药30 d。苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠组织病理学变化;免疫组化法、RT-PCR、Western Blot技术检测相关炎症因子及蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,慢性前列腺炎大鼠前列腺组织增生及水肿明显、炎症浸润增加,而阳性药物对照组及解毒活血汤各剂量组大鼠前列腺组织病变减轻或消失、炎症浸润减少,且与解毒活血汤剂量成正比;免疫组化表示模型组p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达较高,阳性药物对照组、不同剂量解毒活血汤组的p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达呈下降趋势,且均低于模型组。RT-PCR结果显示阳性药物对照组及解毒活血汤低、中、高剂量组均能降低大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-2、IL-6的表达水平;Western Blot检测提示大鼠疾病发生进展过程中p38、P-p38、P-ERK1/2、STAT3、P-STAT3呈高表达状态,解毒活血汤能够降低其表达,从而降低相关炎症因子的过度激活。结论解毒活血汤能够抑制ERK/p38 MAPK信号通路的过度激活,从而降低IL-2、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,以改善前列腺组织炎症反应。

参苓白术散通过ERK/p38 MAPK信号通路干预溃疡性结肠炎大鼠结肠组织AQP3、AQP4的表达

目的探讨细胞外信号调节激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(ERK/p38MAPK)信号通路在参苓白术散调控脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织水通道蛋白(aquaporin,AQP)3、AQP4表达中的作用。方法将60只Wistar大鼠按照随机数字表均分为正常组、模型组(氯化钠注射液)、参苓白术散组、U0126+参苓白术散组、SB203580+参苓白术散组。除正常组外,脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠采用2,4,6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠,结合环境与饮食干预复制。14 d后采用蛋白质印迹法检测各组大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测其mRNA表达情况。结果模型组大鼠AQP3、AQP4蛋白表达及其mRNA的表达水平明显低于正常组(P<0.05),参苓白术散组大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白及mRNA表达较模型组明显升高,组间比较有显著性差异(P<0.05),SB203580+参苓白术散组及U0126+参苓白术散组大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白及mRNA表达较模型组有较小幅度升高,与正常组和参苓白术散组相比均有显著性差异(P<0.05)。结论参苓白术散可显著改善大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白及mRNA表达,ERK/p38 MAPK信号通路参与了参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织AQP3、AQP4表达的调节作用。

基于IRAK4/ERK/p38信号通路雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨雷公藤红素对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并揭示IRAK4/ERK/p38信号通路与雷公藤红素调控H929、ARP-1细胞增殖和凋亡的关系,探究雷公藤红素联合硼替佐米是否具有协同作用。方法:采用CCK-8法检测多发性骨髓瘤细胞株H929、ARP-1细胞经不同浓度雷公藤红素、硼替佐米以及二者联用后的细胞活力,并利用金氏公式判定协同药效。Annexin V/PI法检测H929细胞凋亡率和ARP-1细胞坏死率。蛋白免疫印迹法检测雷公藤红素对IRAK4/ERK/p38信号通路中关键蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果:雷公藤红素能够呈时间-浓度依赖性地显著抑制H929、ARP-1细胞的增殖(r=0.9018,0.9244),并诱导细胞的凋亡;与对照组比较,雷公藤红素能够明显上调H929、ARP-1细胞内PARP、cleaved caspase-3表达,下调p-IRAK4、p-ERK、p-p38表达。雷公藤红素、硼替佐米单用对H929、ARP-1细胞均有增殖抑制作用,而联合用药与单药相比,前者细胞存活率更低,凋亡率更高(P<0.05)。结论:雷公藤红素能抑制H929和ARP-1细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制IRAK4的磷酸化、阻断IRAK4/ERK/p38信号通路的激活有关;雷公藤红素联合硼替佐米具有协同作用,能更有效地抑制H929、ARP-1细胞增殖并诱导其凋亡。

搜风愈喘方基于ERK/p38MAPK信号通路对支气管哮喘模型大鼠气道炎症的作用机制探讨

目的探讨祛风、化痰、活血法并施的搜风愈喘方对哮喘大鼠气道炎症的作用机制以及对ERK/p38MAPK信号通路的调节作用。方法将32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、搜风愈喘方组。先以卵蛋白(OVA)致敏及雾化激发制备哮喘大鼠模型。造模成功后,各组大鼠给予相应药物干预治疗21d。ELISA法检测血清及肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色、PAS染色观察大鼠肺组织病理形态学变化;RT-PCR法检测肺组织匀浆中IL-13、ERK1、ERK2、p38MAPK的mRNA表达;Western Blot法检测肺组织中ERK、p-ERK、p-38MAPK、p-p38MAPK的表达。结果ELISA法测定结果显示,与正常组比较,模型组血清中IL-13、TNF-α的含量升高(P<0.05),肺组织中IL-13、ERK1、ERK2、p38MAPK的mRNA表达及p-ERK、p-38MAPK的蛋白表达均明显增强(P<0.05);与模型组相比,地塞米松组及搜风愈喘方组可降低血清中IL-13、TNF-α的含量、肺组织中IL-13、ERK1、ERK2、p38MAPK的m RNA表达及p-ERK、p-38MAPK蛋白表达(均P<0.05)。HE染色和PAS染色结果显示,与正常组比,模型组支气管黏膜固有层增厚,并伴以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润、杯状细胞增生及黏液分泌,肺组织病理评分明显上升(P<0.05);经搜风愈喘方干预后,上述病理变化明显减轻(P<0.05)。结论搜风愈喘方可减轻哮喘大鼠肺组织的炎症病变及炎症因子水平,并抑制ERK/p38MAPK信号通路。

肺癌血管介入治疗后继发肺部感染患者的ERK/p38MAPK信号通路活化情况及意义

目的 探讨肺癌血管介入治疗后继发肺部感染患者的ERK/p38MAPK信号通路活化情况及意义。方法 选择2020年7月至2022年9月郑州大学附属洛阳中心医院收治的肺癌血管介入治疗患者作为研究对象,将继发感染及未继发感染的患者分别纳入感染组(n=11)及非感染组(n=55)。收集两组患者临床参数,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测ERK、p38MAPK基因mRNA的表达,分析两组患者ERK、p38MAPK基因mRNA表达水平的差异,分析指标与继发肺部感染的相关性。结果 (1)感染组患者年龄≥65岁、合并糖尿病、白蛋白<30 g/L比例显著高于非感染组患者(P<0.05)。(2)感染组患者外周血ERK、p38-MAPK表达水平显著高于非感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)Logistic多因素分析示,外周血ERK、p38-MAPK表达水平与肺癌介入治疗后术后感染具有回归相关关系(P<0.05)。(4)外周血ERK、p38MAPK诊断感染的曲线下面积分别为0.768、0.739,约登指数最大时的截断值为0.640、0.459。结论 肺癌血管介入治疗后继发肺部感染的患者存在ERK/p38MAPK信号通路的活化,ERK、p38MAPK的表达可为诊断肺部感染发生提供一定参考。

壮筋养血汤介导MAPK/P38-ERK通路调控成骨成脂分化的作用机制

目的探讨壮筋养血汤(Zhuangjin Yangxue Decoction,ZJYXD)通过LncRNA ANRIL介导的MAPK/P38-ERK通路调控成骨成脂分化的作用机制。方法提取骨髓间充质干细胞(BMSCs),并采用ANRIL慢病毒转染BMSCs;制备ZJYXD含药血清用于培养转染后的BMSCs。通过CCK-8检测BMSCs增殖活力;运用碱性磷酸酶、茜素红及油红O染色检测各组细胞成骨成脂分化情况;通过qRT-PCR、Western Blot法检测成骨、成脂、MAPK/P38-ERK信号通路相关基因及蛋白的表达。选取24只SPF级C57BL/6雄性小鼠用于制作股骨横断骨折模型,造模后给予不同转染的BMSCs治疗并给予ZJYXD。通过X-ray与Micro-CT检测对照组、对照组+ZJYXD组、ANRIL过表达组、ANRIL过表达+ZJYXD组小鼠骨愈合情况。结果与0%含药血清相比,6%ZJYXD含药血清对BMSCs细胞增殖能力最强(P<0.01)。ZJYXD干预后成骨染色加深,成骨相关基因OPN、RUNX2 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01);成脂染色减弱,相关基因PPARγ、C/EBPαmRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)。同时ZJYXD促进了P-ERK、P38蛋白表达(P<0.01)。X-ray及Micro-CT显示ZJYXD促进了小鼠骨折后愈合。当ANRIL过表达后,ZJYXD调节成骨成脂细胞分化作用消失,无法有效的促进骨折愈合。结论壮筋养血汤具有促进成骨分化、抑制成脂分化的作用,而这种作用通过LncRNA ANRIL调控MAPK/P38-ERK信号通路实现。

柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及ERK/p38 MAPK信号通路的影响

目的：观察柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及细胞外信号调节激酶（ERK）／p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的影响。方法：sD大鼠随机分为空白组、模型组、柴朴汤低、中、高（0．75，1．5，3．0g·kg^-1）组，地塞米松组。采用卵蛋白（OVA）致敏激发建立大鼠哮喘模型。柴朴汤低、中、高剂量组于激发前0．5h给予相应剂量柴朴汤灌胃；地塞米松组于激发前0．5h给予地塞米松（0．005g·kg^-1）灌胃；模型组于激发前0．5h给予等体积生理盐水灌胃；空白组以生理盐水代替OVA进行腹腔注射及雾化吸入；隔日1次，共激发28d。观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类细胞计数的变化；酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织磷酸化ERK（p-ERK），磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）的活性；实时荧光定量PCR（Real-timePCR）分析检测ERK，p38MAPKmRNA的表达；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测ERK，p-ERK，p38MAPK，p-p38MAPK蛋白的表达；光镜下观察病理组织形态学变化及进行炎症评分。结果：模型组大鼠BALF中细胞总数和分类细胞计数；肺组织p-ERK，p-p38MAPK的活性，ERK，p38MAPKmRNA的表达，p-ERK，p-p38MAPK的表达，炎症评分均明显高于空白组（P〈0．01）；柴朴汤低、中、高剂量组和地塞米松组上述指标则明显低于模型组（P〈0．05，P〈0．01）。结论：柴朴汤可改善哮喘模型大鼠气道炎症，其机制可能与其抑制ERK／p38MAPK信号通路有关。

ERK和P38 MAPK升高MLC_(20)磷酸化调节大鼠平滑肌低氧反应性

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)亚类ERK、P38 MAPK和JNK在低氧血管平滑肌收缩反应性调节中的作用,并从肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化的钙敏感性调节途径上初步探讨其机制。方法用低氧培养血管平滑肌细胞(VSMC)模型和大鼠失血性休克模型,用荧光法检测VSMC收缩反应,用Western blot检测血管平滑肌MLC20磷酸化水平,用离体血管张力测定技术观察休克血管钙敏感性。结果低氧损伤使VSMC对去甲肾上腺素(NE)诱导的收缩反应性明显降低,同时休克血管平滑肌MLC20磷酸化水平和血管钙敏感性降低;给予具有MAPK激动作用的AngⅡ处理可恢复低氧VSMC的收缩反应性、升高休克血管MLC20磷酸化水平和钙敏感性。PD98059(ERK抑制剂)、SB203580(P38 MAPK抑制剂)和SP600125(JNK抑制剂)均可拮抗AngⅡ诱导低氧VSMC反应性升高的作用;同时ERK和P38 MAPK的抑制剂也拮抗了AngⅡ诱导的休克血管MLC20磷酸化水平和钙敏感性升高,而JNK抑制剂无明显作用。结论 ERK、P38 MAPK和JNK都参与了低氧VSMC收缩反应性的调节,其中ERK和P38MAPK的作用机制可能与MLC20磷酸化的钙敏感性调节途径有关,而JNK可能通过其他途径发挥调节低氧VSMC反应性的作用。

不同浓度硼替佐米对柔红霉素诱导的K562耐药细胞株ERK、JNK及P38表达的影响

本研究旨在观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib,PS-341)对柔红霉素(daunorubicin,DNR)诱导的K562白血病耐药细胞株ERK、JNK及P38表达的影响,探讨硼替佐米逆转耐药的分子机制。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)进行耐药细胞株和硼替佐米细胞毒性的判定。以100nmol/L DNR单用或联合应用1及10nmol/L PS-341作用于K562耐药细胞株36小时,检测各组ERK、JNK及P38的表达情况,检测各组细胞凋亡率。结果表明:与DNR组相比,PS-341联合DNR可抑制ERK和P38的表达,增加JNK的表达(p<0.05)。结论 :PS-341可显著抑制K562耐药细胞株ERK和P38的表达,增加JNK的表达;PS-341通过MAPK途径逆转细胞耐药,促进细胞凋亡。

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织ERK、p38 MAPK蛋白表达的影响

目的探讨脾虚湿困型溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠结肠组织中ERK、p38MAPK蛋白表达的变化及参苓白术散的干预作用。方法 40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、柳氮磺吡啶组、参苓白术散组,每组10只。采用环境与饮食干预结合TNBS/乙醇灌肠法复制脾虚湿困型UC大鼠模型,应用免疫组织化学法检测各组大鼠结肠组织中ERK、p38MAPK蛋白表达情况。结果模型对照组大鼠结肠组织ERK、p38MAPK表达明显增多,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。柳氮磺嘧啶组和参苓白术散组大鼠结肠组织ERK、p38MAPK的表达与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。参苓白术散组大鼠结肠组织ERK、p38MAPK的表达与柳氮磺嘧啶组比较差异亦有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论脾虚湿困型UC大鼠结肠组织ERK、p38MAPK表达明显增强,参苓白术散治疗可显著降低其ERK、p38MAPK的表达水平。

MCP-1通过p38和ERK/MAPK途径在人单核细胞中诱导Stat3丝氨酸磷酸化

为了探讨人单核细胞中,人单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)诱导信号转导激活转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,Stat3)磷酸化以及导致磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路途径在其中的作用,首先采用针对Stat3 705位酪氨酸和727位丝氨酸特异性抗体进行磷酸化时间和剂量的检测,发现MCP-1仅导致Stat3丝氨酸磷酸化并且呈剂量和时间依赖性,而酪氨酸并没有磷酸化.在此基础上,采用不同时间点的方法对MAPK途径成员细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38、JNK进行检测,发现MCP-1在人单核细胞中仅诱导ERK、p38活化并呈时间依赖性,而不能诱导激活JNK途径.为了确证ERK、p38途径在人单核细胞中参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,采用ERK、p38途径活化的小分子抑制化合物不同浓度处理单核细胞,对Stat3丝氨酸磷酸化检测发现,MCP-1通过ERK、p38两条途径参与Stat3丝氨酸磷酸化.这些结果表明,MCP-1在人单核细胞中仅诱导Stat3丝氨酸磷酸化而不是酪氨酸磷酸化;MAPK成员中ERK、p38两条途径均参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,而JNK途径没有活化参与Stat3丝氨酸磷酸化.

ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病(CML)细胞周期的调控作用。以RT-PCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达(其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38)及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明:CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关(P<0.01),与P27蛋白表达呈负相关(P<0.01)。G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显著性差异。结论:CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。

抑制剂SB203580对肠易激综合征大鼠后连合核中小胶质细胞P38、ERK表达的影响

目的探讨MAPK-P38特异性抑制剂SB203580对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠后连合核(dorsalcommissural nucleus,DCN)中促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKase)信号通路细胞因子的影响,为研究IBS内脏敏化提供理论依据。方法 10只正常大鼠随机分为2组:正常对照组(A组,n=5)、正常结肠扩张刺激组(B组,n=5);另15只IBS大鼠随机分为3组:IBS组(C组,n=5)、IBS结肠扩张刺激组(D组,n=5)、抑制剂组(E组,n=5)。给予B、D、E组结肠扩张刺激,另外给予E组大鼠椎管内注射抑制剂SB203580。采用免疫荧光组织化学及电生理方法观察大鼠DCN中MAPKase信号通路细胞因子P38、ERK表达及腹直肌肌电的变化。结果与IBS扩张刺激组比较,抑制剂组P38表达明显下降(P<0.01),ERK表达亦明显下降(P<0.05),与正常对照组大鼠对比无显著差异(P>0.05)。结论 IBS大鼠内脏敏化与DCN中的MAPK信号转导途径密切相关,内脏敏化的完成可能是通过该途径实现的。

锦红片对急性胆源性感染大鼠JNK、P38、ERK mRNA及蛋白表达调控的研究

目的:探讨锦红片对急性胆源性感染大鼠MAPK通路信号分子JNK、P38、ERK mRNA及蛋白表达的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、锦红片组及庆大霉素组,每组10只。采用胰胆管内注入大肠杆菌法建立急性胆源性感染大鼠模型,假手术组仅开腹关腹;各药物组在造模后第1天予相应剂量药物灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃。各组均在药物干预后第5天取材,分别用HE染色和电镜观察小肠大体形态及超微结构变化,Real time-PCR和Western blot分别检测小肠JNK、P38、ERK mRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠大体形态和超微结构均有不同程度病理改变,锦红片和庆大霉素能一定程度上改善。模型组大鼠小肠组织JNK、P38及ERK mRNA表达均高于假手术组(P<0.01);锦红片及庆大霉素组大鼠小肠组织JNK、P38及ERK mRNA表达低于模型组(P<0.01);锦红片组大鼠小肠组织ERK mRNA表达低于庆大霉素组(P<0.01)。模型组大鼠小肠组织本底及磷酸化JNK、P38及ERK蛋白表达高于假手术组(P<0.01);锦红片组大鼠小肠组织本底及磷酸化JNK及P38蛋白表达低于模型组(P<0.05或P<0.01),庆大霉素组大鼠小肠组织本底JNK蛋白表达低于模型组(P<0.01);锦红片组大鼠小肠组织本底JNK蛋白表达低于庆大霉素组(P<0.01);锦红片组和庆大霉素组大鼠小肠组织本底及磷酸化ERK蛋白表达与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:"下调MAPK信号通路中JNK、P38及ERK信号分子—抑制肠黏膜上皮细胞过度凋亡—保护肠黏膜屏障—防止炎症二次打击"可能是锦红片治疗急性胆道感染的重要作用途径之一。

P-ERK、P-P38及iNOS、GLUT4在冠心病患者冬眠心肌中表达及意义

目的:探讨冬眠心肌细胞内P-ERK、P-P38、GLUT4i、NOS的变化和意义,分析冬眠心肌细胞内P-ERK、P-P38与GLUT4i、NOS的关系。方法:行冠脉旁路手术(CABG)的冠心病患者10例,术前1周内用多巴酚丁胺超声负荷试验(DSE)结合多普勒组织成像(DTI)确定冬眠心肌及正常心肌的存在部位,CABG术中根据检测结果进行取材(分别取正常心肌和冬眠心肌),并经电镜证实。取材心肌用免疫印迹法(Western-blot)检测磷酸化的ERK、P38及iNOS、GLUT4的表达情况,分析磷酸化的ERK、P38与iNOS、GLUT4的相关性。结果:冬眠心肌细胞内磷酸化ERK、P38及GLUT4i、NOS水平较正常心肌高;冬眠心肌细胞内P-ERK与GLUT4表达相关(r=0.665P<0.05);P-P38与GLUT4i、NOS表达相关(r=0.708、0.676P<0.05)。结论:心肌缺血缺氧时,可触发ERK、P38的活化,活化的ERK、P38促使心肌细胞增加GLUT4及iNOS表达,促进冬眠心肌的形成。

乳凝集素通过ERK、p38 MAPK通路调节未成熟树突状细胞分泌IL-12和IL-10的研究

目的探讨乳凝集素通过ERK、p38 MAPK信号通路对未成熟树突状细胞(iDCs)分泌白介素(IL)-12和IL-10的影响。方法脐带血中分离得到单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(50 ng/mL)和重组人白介素-4(10 ng/mL),同时按照不同组合加入乳凝集素(10μg/mL)和信号通路阻滞剂,诱导分化为iDCs。分组如下:①对照组;②乳凝集素组;③ERK通路阻滞组;④ERK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑤p38MAPK通路阻滞组;⑥p38MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑦JNK通路阻滞组;⑧JNK通路阻滞剂+乳凝集素组。采用Western blotting检测ERK、JNK、p38MAPK蛋白磷酸化水平,ELISA法检测iDCs分泌IL-12和IL-10的变化。结果与对照组比较,乳凝集素组ERK蛋白磷酸化水平升高(P<0.05),p38 MAPK蛋白磷酸化水平降低(P<0.05),JNK蛋白磷酸化水平无明显差异(P>0.05),IL-12和IL-10的分泌量显著降低(P<0.05),IL-12/IL-10比值显著升高(P<0.05)。ERK通路阻滞组和ERK通路阻滞剂+乳凝集素组中ERK蛋白磷酸化水平几乎为零;ERK阻滞剂+乳凝集素组IL-12和IL-10的分泌量显著高于乳凝集素组(P<0.05),IL-12/IL-10比值显著低于乳凝集素组(P<0.05)。p38 MAPK通路阻滞组和p38 MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组中p38 MAPK蛋白磷酸化水平几乎为零;p38 MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组IL-12和IL-10的分泌量显著低于乳凝集素组(P<0.05),IL-12/IL-10比值显著高于乳凝集素组(P<0.05)。结论乳凝集素可能通过激活ERK通路的活化及抑制p38MAPK通路的活化调节iDCs分泌IL-10和IL-12。

芪参益气滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的MAPK/p38/JNK/ERK信号通路的研究

目的探讨芪参益气滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的MAPK/p38/JNK/ERK信号通路的研究。方法随机将大鼠分为假手术组(Sham)和心肌缺血再灌注组(I/R),后者又分为:模型组(I/R),芪参益气高剂量组(QSYQ-H)和低剂量组(QSYQ-L);血流动力学检测左心室收缩压峰值(LVSP)及左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax);ELISA法检测血浆中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌细胞p38,JNK,ERK mRNA和蛋白的水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVSP和±dp/dtmax明显较低(P<0.01);与模型组相比,芪参益气滴丸高低剂量组大鼠LVSP和±dp/dtmax均显著升高,且芪参益气滴丸高及低剂量组呈浓度依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血浆中TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量明显升高(P<0.01);与模型组相比,芪参益气滴丸高低剂量组大鼠血浆中TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量明显降低,且芪参益气滴丸高及低剂量组呈浓度依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01);与假手术组相比,模型组对大鼠心肌细胞p38、JNK和ERK mRNA和蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,芪参益气滴丸高低剂量组大鼠心肌细胞p38、JNK和ERK mRNA和蛋白含量明显升高,且芪参益气滴丸高及低剂量组呈浓度依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01)。结论芪参益气滴丸能减小大鼠心肌缺血再灌注的损伤程度,有可能是通过p38/JNK/ERK激活,抑制炎症相关因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达。

清金化痰汤调节ERK/p38MAPK信号通路改善哮喘大鼠模型气道炎症的研究

目的:研究清金化痰汤是否通过ERK/p38MAPK信号通路缓解哮喘大鼠模型气道炎症。方法:将40只雄性SD大鼠按8只/组随机分为5组:空白组、模型组、清金化痰汤低、高剂量组(1.86、7.44g/kg)和地塞米松组(阳性对照组)。观察各组大鼠肺组织的病理学变化并炎症评分、肺泡灌洗液中细胞总数及分类细胞计数变化;通过ELISA法检测肺泡灌洗液中标志炎症因子[白细胞介素(IL-1β、IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)]的含量;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和蛋白印记(Western Blot)法检测大鼠肺组织中ERK、p-ERK、p38和p-p38mRNA和蛋白的表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中细胞总数和分类细胞计数、相关炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)和ERK、p38的表达均极显著升高(P<0.01);经清金化痰汤和地塞米松灌胃处理后,与模型组相比上述指标显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:清金化痰汤可能是通过ERK/p38MAPK信号通路缓解哮喘大鼠模型的炎症反应。

电针对膝骨关节炎大鼠脊髓背角CB2R、p-P38和p-ERK表达的影响

目的观察电针对膝骨关节炎(KOA)大鼠痛性行为学及脊髓背角大麻素受体2(CB2R)、p-P38、p-ERK表达的影响,探讨电针治疗KOA慢性疼痛的作用机制。方法48只SD大鼠随机分为空白组、盐水组、模型组、电针组、CB2R阻断组、CB2R阻断+电针组,每组8只。除空白组和盐水组外,采用左膝关节腔注射谷氨酸钠碘乙酸制备KOA慢性疼痛模型,盐水组左膝关节腔注射生理盐水。注射后第15日,电针组于左侧“阳陵泉”“内膝眼”行电针刺激,15 min/次,1次/d,CB2R阻断组腹腔注射CB2R阻断剂,CB2R阻断+电针组腹腔注射CB2R阻断剂后行电针干预,5次为1个疗程,共2个疗程。每个疗程结束后间歇1 d进行痛性行为学评价,免疫荧光检测大鼠左侧脊髓背角CB2R表达及脊髓背角神经元CB2R、p-P38和p-ERK定位表达。结果与空白组比较,模型组大鼠左侧机械痛缩足阈和左后肢负重能力显著降低(P<0.01),左侧脊髓背角CB2R表达及CB2R/NeuN、p-P38/NeuN、p-ERK/NeuN双染阳性细胞数显著增加(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,电针组、CB2R阻断+电针组大鼠左侧机械痛缩足阈和左后肢负重能力显著升高(P<0.01),且电针组优于CB2R阻断+电针组(P<0.05,P<0.01),电针组大鼠左侧脊髓背角CB2R表达和CB2R/NeuN双染阳性细胞数显著增加(P<0.01),p-P38/NeuN和p-ERK/NeuN双染阳性细胞数显著减少(P<0.01)。结论电针“阳陵泉”“内膝眼”可抑制KOA大鼠痛性行为,其机制可能与激活脊髓背角CB2R,抑制P38/ERK信号通路激活有关。

氧化铜纳米颗粒经p38和ERK信号通路诱导巨噬细胞自噬性损伤

目的:分析氧化铜纳米颗粒(copper oxide nanoparticles,CuONPs)对Raw264.7巨噬细胞自噬的影响,并探讨调节自噬的相关信号通路。方法:用透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观察CuONPs的形态特征;利用Raw264.7巨噬细胞进行体外实验;不同浓度梯度的CuONPs处理巨噬细胞24 h,用MTS法检测细胞活力;TEM观察自噬小体的形成情况;自噬小体报告质粒GFP-LC3瞬时转染细胞,激光共聚焦显微镜观察CuONPs处理前后Raw264.7细胞胞质中GFP-LC3蛋白绿色点状聚集情况;利用Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达情况及相关的p38和ERK信号通路磷酸化水平。结果:CuONPs可显著抑制Raw264.7细胞活力,并呈一定的剂量依赖关系(F=35.987,P=0.000);TEM结果显示,CuONPs颗粒沉积于自噬体;激光共聚焦结果表明GFP-LC3转染细胞后,CuONPs处理组GFP-LC3点状聚集明显多于对照组,此外Western blot结果显示LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平明显呈剂量依赖性上升(F=156.585,P=0.000),上述结果说明CuONPs能促进巨噬细胞中自噬小体的生成;而且Western blot结果表明10μg/mL的CuONPs处理细胞,能明显上调p-p38、p-ERK蛋白水平,并呈现时间依赖性升高(p-p38:F=72.899,P=0.000;p-ERK:F=123.300,P=0.000)。结论:CuONPs能抑制细胞活力,并诱导巨噬细胞自噬活化,并且p38和ERK通路可能参与了自噬的分子调控。