补阳还五汤调节MEK/ERK通路对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响研究

目的研究补阳还五汤对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响,以及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号相关激酶(ERK)通路的调节作用。方法36只大鼠随机分为正常对照组(6只)及造模组(30只),造模组采用高糖高脂饲料喂养法联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病坐骨神经病变大鼠模型,造模完成后,造模组大鼠随机分为模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组及阳性对照组,每组6只。补阳还五汤低、中、高剂量组大鼠分别按照7.5、15.0、30.0 g/kg(以生药含量计)给予补阳还五汤灌胃,1次/d,连续给药12周。阳性对照组大鼠按照0.1 mg/kg腹腔注射给予PD98059,2次/周,连续12周。测定大鼠热缩足潜伏期及后足伸姿推力,使用肌电图仪测定运动神经传导速度(MNCV)及感觉神经传导速度(SNCV),使用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、总抗氧化能力(T-AOC)及坐骨神经谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,采用苏木精-伊红(HE)染色法检查坐骨神经病理学变化,采用缺口末端标记法(TUNEL)测定坐骨神经细胞凋亡率,采用免疫印迹法测定大鼠坐骨神经p-MEK、p-ERK水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显降低(P<0.05),后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显升高,且补阳还五汤低剂量组<补阳还五汤中剂量组<补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率及IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显降低,且补阳还五汤低剂量组>补阳还五汤中剂量组>补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤能够显著抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激损伤及炎症因子水平,修复坐骨神经病理性损伤,改善大鼠坐骨神经功能,抑制坐骨神经细胞凋亡,进而促进糖尿病大鼠坐骨神经损伤的恢复,其机制可能与调节MEK/ERK通路有关。

基于MEK/ERK通路研究桂枝茯苓丸改善慢性阻塞性肺疾病小鼠气道重塑的作用与机制

目的:研究桂枝茯苓丸通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路改善慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠气道重塑的作用与机制。方法:采用烟熏的方法建立COPD小鼠模型,将32只造模成功小鼠随机分为模型组、桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组,每组8只。另取8只未烟熏的小鼠为空白组。各组予相应药物灌胃14 d。采用小动物肺功能仪测定小鼠每分钟通气量(MV)、呼气峰值流速(PEF)和吸气峰值流速(PIF),HE染色评估肺组织炎症,Masson染色观察气道重塑改变,Western blotting检测COL1A1、COL3A1、MEK1、p-MEK1、ERK(1/2)和p-ERK(1/2)蛋白相对表达量。结果:模型组小鼠MV、PIF和PEF水平均低于空白组(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织出现明显炎症和气道重塑,且肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均高于空白组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PEF、PIF水平均高于模型组(P<0.05),肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠的肺组织炎症和气道重塑改善。桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PIF、PEF水平高于桂枝茯苓丸组和PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠MV、PIF和PEF水平与PD98059组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。结论:桂枝茯苓丸能显著改善COPD小鼠气道重塑过程,抑制MEK/ERK通路可能是其作用机制之一。

毛蕊异黄酮通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用机制

目的探讨毛蕊异黄酮(Calycosin)通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法将肺癌A549细胞分为空白对照组和毛蕊异黄酮20、40、80μmol/L 3个浓度组。MTT法检测细胞存活率;Western Blot检测肺癌A549细胞RAS、p-RAF、p-MEK和p-ERK蛋白的表达;细胞集落试验和划痕试验观察肺癌A549细胞的增殖和迁移。结果当毛蕊异黄酮浓度在80μmol/L以下时,毛蕊异黄酮无明显细胞毒性。毛蕊异黄酮可抑制RAS、p-RAF、p-MEK和p-ERK蛋白表达,且抑制效果呈剂量依赖性;毛蕊异黄酮对肺癌A549细胞增殖和迁移的抑制作用呈剂量依赖性。结论毛蕊异黄酮能够通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌A549细胞增殖和迁移。

基于Raf/MEK/ERK信号通路探讨内异康复片对hEM15A细胞的影响

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)内膜间质细胞hEM15A的影响。方法制备内异康复片含药血清,将hEM15A细胞分为空白对照组,阴性对照组,5%、10%、20%含药血清组。采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western blo法检测RKIP及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达。再将hEM15A细胞分为阴性对照组、10%含药血清组、si-RKIP-1组、si-RKIP-1+10%含药血清组,观察上述检测指标的变化。结果与阴性对照组比较,各浓度含药血清组hEM15A细胞活性降低(P<0.05),凋亡率、RKIP蛋白表达升高(P<0.05);10%及20%含药血清组hEM15A细胞迁移数、p-MEK及p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,si-RKIP-1组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-ERK1/2、p-MEK蛋白表达升高(P<0.05);与10%含药血清组比较,si-RKIP-1+10%含药血清组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05)。结论内异康复片可能通过调节RKIP及其介导的Raf/MEK/ERK信号通路抑制hEM15A细胞活性和迁移,促进ESC凋亡,发挥改善EMT的作用。

中医药靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路治疗肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种高度恶性肿瘤,具有特殊的多元难治性分子生物学机制。肝细胞癌的病理表现与病变细胞的分化程度有关,因此抑制肝癌细胞的分化、增殖是治疗该病的重要手段。中医药可以通过调控体内蛋白激酶(RaF)、丝原活化蛋白激酶(MEK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)及精准干预RaF/MEK/ERK通路来影响肝癌的发生进展,从而发挥治疗HCC的作用。该文主要针对RaF/MEK/ERK信号通路调控HCC发生发展的机制,以及中药单体及复方靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路进行综述。

盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响

目的研究盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响。方法选取苏州大学附属第二医院2020年8月—2022年8月收治的68例宫颈癌患者为研究对象,采用随机数字表法分为试验组(n=34)和对照组(n=34)。对照组接受常规化疗治疗,试验组在此基础上联合安罗替尼抗血管生成治疗。对比两组患者临床疗效,治疗前后血管新生能力[血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤微血管密度(MVD)],治疗后MEK/ERK通路分子水平。结果与对照组总有效率58.82%(20/34)相比,试验组88.23%(30/34)更高(χ^(2)=7.555,P<0.05);治疗后,两组患者VEGF、MVD水平均降低,且相比于对照组,试验组更低[对照组分别为(63.98±5.14)ng·g^(-1)、(13.02±1.65)个·mm^(-2),试验组分别为(48.06±5.35)ng·g^(-1)、(6.68±1.62)个·mm^(-2)](t=12.512、15.987,均P<0.05);与对照组患者相比,试验组患者MEK1、MEK2以及ERK1/2水平更低[对照组分别为(2.06±0.19)ng·mL^(-1)、(2.28±0.14)ng·mL^(-1)、(1.48±0.12)ng·mL^(-1),试验组分别为(1.23±0.21)ng·mL^(-1)、(1.06±0.15)ng·mL^(-1)、(0.84±0.11)ng·mL^(-1)](t=17.089、34.670、22.924,均P<0.05)。结论盐酸安罗替尼联合化疗能够有效抑制宫颈癌患者癌组织血管新生能力以及MEK/ERK通路分子水平,临床疗效较高。

赤凤迎源针刺法对面神经损伤模型大鼠Ras/MEK/ERK信号通路的影响

目的探讨赤凤迎源针刺法对面神经超微结构、丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及血清KRas蛋白表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、常规针刺组、赤凤迎源针刺组,每组8只。除空白对照组大鼠正常饲养外,其他各组大鼠用面神经颊支压榨法诱导面神经损伤模型。造模成功后,予以干预2周。干预结束后,行电镜检查观察大鼠的面神经超微结构;通过HE染色观察面神经组织形态组织学变化;ELISA法检测血清KRas的表达水平;Western blot检测面神经组织MEK、ERK蛋白的表达水平。结果造模后,与空白对照组比较,另外3组大鼠动物行为学评分均明显升高(P<0.01)。针刺2周后,常规针刺组及赤凤迎源针刺组大鼠评分明显低于模型组(P<0.01),且赤凤迎源针刺组评分低于常规针刺组(P<0.01)。针刺2周后,与模型组对比,常规针刺组及赤凤迎源针刺组面神经轴突纤维排列较紧密,内质网较多,KRas蛋白表达明显升高(P<0.05),面神经MEK蛋白、ERK蛋白表达升高(P<0.05),且赤凤迎源针刺组均高于常规针刺组(P<0.05)。结论赤凤迎源针刺法可改善面神经损伤模型大鼠动物行为学,上调KRas、MEK及ERK表达水平,可能与激活Ras/MEK/ERK信号通路有关,从而修复面神经损伤。

雷公藤红素通过FAK/MEK/ERK信号通路对肝癌细胞耐药性的影响

目的探究雷公藤红素(CSL)对肝癌细胞耐药性的影响。方法采用仑伐替尼(Len)构建耐药人肝癌细胞Huh7/Len,分为对照组,CSL低、中、高浓度组(1、2.5、5μmol/L),CSL高浓度+Zn27[黏着斑激酶(FAK)激活剂]组(5μmol/L CSL+2 nmol/L Zn27),每组设置6个复孔。检测细胞增殖(以吸光度计)和克隆能力、凋亡率、侵袭数、迁移数,以及细胞中活性氧(ROS)水平和磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,CSL低、中、高浓度组细胞的吸光度、克隆数、侵袭数、迁移数和p-FAK、p-MEK、p-ERK、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低,细胞凋亡率、ROS水平和Bax、caspase-3蛋白相对表达量均显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与CSL高浓度组比较,CSL高浓度+Zn27组细胞中上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论CSL能增强氧化应激,促进细胞凋亡,抑制肝癌细胞恶性进展和化疗耐药性,其机制可能与抑制FAK/MEK/ERK信号通路有关。

连翘脂素调节Ras/Raf/MEK/ERK信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究连翘脂素(PG)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化的影响及机制。方法 培养HCT116结直肠癌细胞,采用10~200μmol/L的连翘脂素处理细胞,检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度。将细胞分为对照组(Control组),连翘脂素低、中、高浓度组(PG-L组、PG-M组、PG-H组),连翘脂素高浓度+转染慢病毒阴性对照组(PG-H+NC组),连翘脂素高浓度+Ras慢病毒组(PG-H+Ras组)。平板克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞术以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测上皮间质转化(EMT)标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及信号通路相关蛋白p-Raf、p-MEK、p-ERK表达;建立荷瘤小鼠模型评价连翘脂素对结直肠癌肿瘤生长的影响。结果 10~200μmol/L的连翘脂素处理HCT116结直肠癌细胞,可以显著抑制细胞存活率,经计算IC50值为(140.4±2.147)μmol/L,选择10、50、100μmol/L连翘脂素进行后续实验;与Control组比较,PG-L组、PG-M组、PG-H组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著降低,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PG-H+NC组比较,PG-H+Ras组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著升高,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著降低(P<0.05);连翘脂素可以显著抑制结直肠癌移植瘤的生长。结论 连翘脂素可以抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化,其作用机制可能与抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路激活有关。

自分泌IL-6经Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路促进卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的研究

目的探讨内源性IL-6表达改变对卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的影响及相关信号转导通路。方法利用以往构建的内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞系和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌SKOV-3细胞,分别采用细胞体外黏附实验、Transwell小室体外侵袭实验、免疫印迹技术等观察IL-6对卵巢癌细胞黏附、侵袭能力的影响,并对其可能的信号通路进行研究。结果与对照组相比,内源性过表达IL-6可促进卵巢癌细胞的体外黏附和侵袭功能;抑制IL-6表达则可抑制卵巢癌细胞的上述功能。过表达或抑制表达IL-6可增加或减少卵巢癌细胞磷酸化ERK、Akt的表达水平,应用ERK或Akt特异性信号阻断剂可显著抑制高表达IL-6的卵巢癌细胞黏附和侵袭作用,提示可能与其活化Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路有关。结论卵巢癌细胞产生的IL-6可经Ras/MEK/ERK和PI3K/Akt通路增强自身的黏附和侵袭能力,调节IL-6表达及相关信号转导通路可能是未来临床控制卵巢癌进展的一种良好策略。

Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展

自噬是机体保守的自我防御机制,是将细胞内变形坏死的细胞器和多余蛋白降解为小分子,以供循环利用。自噬在生理和病理状态下均发挥重要作用,可通过多条信号通路影响胞内物质的表达。目前已知Ras/Raf/MEK/ERK信号通路不仅广泛参与调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等多个生理病理过程,并且参与调控自噬,并具有促进肿瘤细胞发生自噬性死亡的作用,但是其具体参与调控自噬的作用机制尚未完全阐明。本文就Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与调控自噬的作用的研究进展进行详细阐述,以期为研究Ras/Raf/MEK/ERK信号通路调控自噬的作用机制提供参考。

Ras Raf Mek Erk信号传导通路在肝细胞癌发生中的作用机制及在靶向治疗中的应用

肝细胞癌(HCC)是我国原发性肝癌最常见的一种类型,也是全球癌性死亡中最重要的一个因素。因此,研究肿瘤生长的细胞机制对于探索新的有效治疗方法非常重要。目前已知,所有真核细胞中均存在Ras/Raf/Mek/Erk这一高度保守的细胞信号传导通路,这一信号传导通路广泛参与细胞的生长、增殖、分化、凋亡、转移等过程。Ras/Raf/Mek/Erk信号传导通路是"MAPK"众多通路中的一个,它在多种致瘤性疾病中通常是上调的。同样,该信号传导通路的异常激活与肝细胞癌的发生及恶性进展密切相关。Ras基因的突变,EGF、VEGF、PDGF等生长因子及相应的膜受体过度表达均可使其激活,诱导肝癌细胞异常增殖,侵袭生长和转移,从而参与和促进肝细胞癌的发生、发展。因此,抑制Ras/Raf/Mek/Erk信号通路的传导将成为肝细胞癌的一种有效治疗方法。

Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血早期作用的研究

目的探讨高血糖加重脑梗死机制与Ras/Raf/丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路的关系。方法通过大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及大脑中动脉闭塞(MCAO)术造成大鼠糖尿病脑缺血模型。将大鼠分成假手术组、健康大鼠脑缺血组、2型糖尿病(T2DM)大鼠脑缺血组、PD98059组,每组12只。PD98059组于MCAO术前30min尾静脉注射PD98059(3mL/kg)。MCAO术后2h给各组大鼠做神经学评分,取脑组织标本。应用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)测定大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,应用TUNEL检测神经细胞凋亡情况。结果除假手术组外,其他3组均有不同程度的神经功能缺损、神经细胞凋亡,且差异有统计学意义(P<0.01)。p-ERK1/2蛋白在假手术组偶见表达,在健康大鼠脑缺血组、T2DM大鼠脑缺血组表达明显升高(P<0.01),且T2DM大鼠脑缺血组升高更加明显(P<0.01)。PD98059组p-ERK1/2蛋白表达较少。免疫组织化学和Western blotting结果基本一致。结论 Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在局灶性脑缺血早期能促进神经细胞的凋亡,糖尿病加重脑梗死与Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路有关。

基于Raf/MEK/ERK信号通路探讨黄芪建中汤治疗大鼠脾胃虚寒型十二指肠溃疡的作用机制

目的探讨黄芪建中汤通过Raf/MEK/ERK信号通路治疗大鼠脾胃虚寒型十二指肠溃疡(DU)的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、埃索美拉唑组(4.17 mg·kg^(-1))以及黄芪建中汤高、低剂量组(18.54、9.27 g·kg^(-1))。采用“苦寒泻下+劳倦过度”法联合阿司匹林、无水乙醇构建脾胃虚寒型DU大鼠模型。灌胃给药,每天1次,连续4 d。观察大鼠十二指肠黏膜损伤情况并计算溃疡指数和治疗指数;采用HE染色法观察十二指肠黏膜组织病理形态学改变;采用酶联免疫吸附试验检测十二指肠组织中前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫荧光法检测十二指肠黏膜磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Raf)、磷酸化有丝分裂原活化蛋白激酶激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1(p-ERK1)蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠的十二指肠溃疡指数显著升高(P<0.01);小肠绒毛脱落,隐窝脓肿,小肠绒毛长度和隐窝深度均显著降低(P<0.01);肠黏膜PGE2、IL-10含量均明显降低(P<0.01),TNF-α含量显著增加(P<0.01);肠黏膜p-Raf、p-MEK1/2和p-ERK1蛋白表达量均明显增加(P<0.01)。与模型组比较,黄芪建中汤各剂量组的大鼠十二指肠溃疡指数均明显降低(P<0.01);肠黏膜损伤得到明显改善,黏膜形态趋于完整,小肠绒毛长度和隐窝深度均明显增加(P<0.01);肠黏膜PGE2和IL-10含量均明显提高(P<0.01),TNF-α含量显著降低(P<0.01);肠黏膜p-Raf、p-MEK1/2和p-ERK1蛋白表达均显著下调(P<0.01)。结论黄芪建中汤对脾胃虚寒型DU大鼠具有治疗作用,其机制可能与调控PGE2、TNF-α、IL-10等炎症介质水平,抑制Raf/MEK/ERK信号通路活化有关。

GCS通过MEK/ERK通路调控白血病多药耐药细胞凋亡相关基因bcl-2的表达

目的:探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)是否通过MEK/ERK信号通路调控凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导人白血病K562/A02细胞多药耐药。方法:用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰K562/A02细胞中GCS的表达,real-time PCR、Western blotting检测Bcl-2、磷酸化及总ERK水平;用MEK特异性化学抑制剂U0126抑制MEK/ERK信号通路的活化,real-time PCR与Western blotting技术分别检测Bcl-2 mRNA与蛋白水平;CCK-8试剂盒检测细胞存活情况。结果:与阴性对照组比较,GCS siRNA明显抑制K562/A02细胞GCS和Bcl-2的表达,并抑制MEK/ERK信号通路的活化;U0126使Bcl-2 mRNA及蛋白水平呈浓度依赖性下降,并使K562/A02细胞ADM敏感性增加。结论:GCS通过MEK/ERK信号通路调控K562/A02细胞株中凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导白血病细胞多药耐药。

舒尼替尼联合多西他赛对A549细胞增殖、凋亡、细胞周期及c-met、mek、erk mRNA表达的影响

目的:探讨舒尼替尼单药以及联合多西他赛不同顺序给药对A549细胞增殖、凋亡、细胞周期及c-met、mek、erkmRNA表达的影响。方法:取对数生长期的A549细胞进行以下实验。实验Ⅰ:对照组加入RPMI1640培养基;多西他赛单药组给予多西他赛(终质量浓度16mg/L,下同);舒尼替尼单药组给予舒尼替尼(终浓度7.5μmol/L,下同);舒尼替尼+多西他赛组,加入同时含两药的培养液。实验Ⅱ:多西他赛→舒尼替尼组(D→S组)先加入100μL含多西他赛的培养液培养24h,洗脱,再加入100μL含舒尼替尼的培养液继续培养24h;舒尼替尼→多西他赛组(S→D组),同上反向处理。采用MTT法检测以上各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡,RT-PCR检测A549细胞c-met、mek、erkmRNA的表达水平。结果:Ⅰ:联合用药组较单独用药组细胞增殖抑制率、晚期凋亡率和总凋亡率升高,S期细胞减少,erk表达上调(P<0.05)。Ⅱ:D→S组较S→D组细胞增殖抑制率和凋亡率升高,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增多,c-met、mekmRNA表达下调,erkmRNA表达上调(P<0.05)。结论:舒尼替尼和多西他赛均能抑制A549细胞的生长,联合用药优于单独用药;多西他赛后序贯舒尼替尼能产生明显的协同效应,效果优于舒尼替尼后序贯多西他赛。

贝母素乙对肺纤维化大鼠肺组织MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化的影响

目的探讨贝母素乙对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化的影响。方法大鼠麻醉后,经气管软骨环间隙向心端穿刺,注入博莱霉素5mg/kg建立大鼠肺纤维化模型,假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等容积生理盐水。术后第2天开始每天灌胃给药,假手术组和模型组给予蒸馏水,地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液,贝母素乙A组、B组分别给予等容积贝母素乙5、2.5mg/kg蒸馏水溶液。灌胃28d后,麻醉并颈动脉取血后处死大鼠,肺组织固定,包埋切片,常规脱蜡,行免疫组化SABC法检测肺组织MEK1/2、ERK1/2水平,Western blot法检测p-MEK1/2、pERK1/2水平。结果贝母素乙可显著降低肺纤维化大鼠的肺组织ERK1/2、MEK1/2水平(P<0.01),与地塞米松作用相似(P>0.05),贝母素乙A组、B组之间比较未见明显差异(P>0.05)。贝母素乙可以显著降肺纤维化大鼠的肺组织p-MEK1/2、p-ERK1/2水平(P<0.01),较地塞米松更为显著(P<0.01),贝母素乙B组较贝母素乙A组更为显著(P<0.01)。结论贝母素乙减轻博莱霉素致肺纤维化大鼠的MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化水平可能是其抗纤维化的作用机理之一。

结直肠癌中MEK2/ERK信号传导通路的研究

目的 研究丝裂原激活化蛋白激酶 (MAPK )中MEK2 /ERK信号传导通路在结直肠癌发生发展中的作用。方法 ( 1)采用Westernblot检测 5 2例结直肠癌组织及其邻近肠黏膜中MEK 2蛋白的表达。 ( 2 )用丝裂原细胞外激酶 (MEK )抑制剂作用于结肠癌细胞系SW 480 ,然后以MTT法检测细胞增殖状态 ;用Westernblot检测MEK2 ,p ERK及其靶基因产物C myc的表达。结果 结直肠癌组织中MEK2蛋白表达水平明显高于邻近的肠黏膜 (P <0 .0 5 ) ,且与肿瘤的分化、Dukes分期及淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。应用MEK的抑制剂后SW 480细胞中MEK2 ,p ERK ,C myc表达水平随作用时间延长而下降。结论 MEK2活性增高与结直肠癌细胞侵袭力有关 ,阻断MEK2 /ERK信号传导通路可以抑制结肠癌细胞的增殖 ,促进其凋亡。

复心合剂对心衰大鼠信号通路Raf-MEK-ERK的影响

目的:初步探索复心合剂对信号通路Raf-MEK-ERK的影响。方法:75只Wistar雄性大鼠,随机分为5组,对照组、卡托普利组、复心合剂低剂量组、复心合剂高剂量组均为15只。实验过程中阿霉素干预4周后测定大鼠心功能;6周后应用Western blot法检测大鼠心肌组织中Raf、MEK、ERK蛋白表达情况。结果:(1)与正常对照组比较,模型组大鼠BNP值显著升高(P<0.01),心衰模型成功建立。(2)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织Raf水平显著升高(P<0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织Raf水平显著降低(P<0.01),与卡托普利组相比,复心汤高剂量组大鼠心肌组织Raf无统计学意义(P>0.05)。(3)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织MEK水平显著升高(P<0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织MEK水平显著降低(P<0.01)。(4)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌ERK蛋白表达明显升高(P<0.01),卡托普利组及复心合剂高剂量组ERK蛋白表达无显著差异性(P>0.05),与模型组相比,复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织ERK水平显著降低(P<0.01)。结论:复心合剂对心衰大鼠信号通路Raf-MEK-ERK的蛋白激活具有一定的抑制作用,延缓心衰进程。

MEK/ERK通路阻断剂对黑素瘤细胞增殖的影响

目的研究MEK/ERK通路阻断剂U0126对黑素瘤细胞A375增殖的影响,并探讨其作用机制。方法噻唑蓝法(MTT)测定U0126和传统抗癌药物达卡巴嗪(DTIC)分别及联合作用时对黑素瘤细胞A375的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同药物处理组的细胞周期及凋亡情况;Western blot检测U0126处理后细胞p-ERK1/2的表达。结果药物作用24h时U0126单一用药组对细胞的增殖抑制率高于DTIC单一用药组(P<0.01);联合应用U0126和DTIC对细胞的增殖抑制率明显高于DTIC用药组(P<0.01);U0126组与对照组相比,G1期细胞比例数提高了21.83%(P<0.01),凋亡率提高了13.96%(P<0.01),联合用药组与对照组相比G1期比例增加了26.64%(P<0.01),凋亡率亦明显提高了25.20%(P<0.01);不同浓度U0126处理细胞后,细胞的p-ERK1/2均明显降低(P<0.01)。结论 MEK/ERK通路阻断剂U0126可显著抑制黑素瘤细胞的增殖,其机制可能与降低p-ERK1/2的表达从而参与细胞周期调控有关;联合U0126用药有望成为治疗黑素瘤新的有效途径。