白藜芦醇通过MEK/ERK-SIRT1通路的激活调节酒精诱导的HepG2细胞凋亡损伤

目的:探讨白藜芦醇在酒精诱导的HepG2细胞凋亡中的调节能力,揭示白藜芦醇抗酒精性肝损伤的作用机制.方法:白藜芦醇预处理HepG2细胞24 h后,用酒精诱导凋亡的产生.MTT方法检测白藜芦醇处理组与非处理组HepG2细胞的细胞活力;用ELISA试剂盒检测不同实验组的细胞内总超氧化物浓度(total superoxide)和细胞总抗氧化能力(oxygen radical antioxidant capacity,O R A C);同时检测了含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteine-requiring aspartate protease,Caspase3)蛋白表达及应用荧光倒置显微镜观察了吖啶橙(acridine orange,AO)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色的细胞形态学改变;采用RT-PCR方法检测氧化应激调节凋亡通路中关键基因Caspase3,细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),ERK激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)和沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 1,SIRT-1)mRNA的表达.结果:MTT结果显示,与对照组比较,25-100μmol/L白藜芦醇可有效对抗300 mmol/L酒精对HepG2引起的细胞不良反应使细胞保持较高的活力;AO/PI活细胞凋亡检测显示了酒精处理组有大量的橙色凋亡细胞,而白藜芦醇预处理组橙色细胞明显减少;Caspase3结果显示不同浓度的白藜芦醇均可以降低被酒精激活的Caspase3的活性,其Caspase3的活性降为2.12、1.46、0.90和0.75倍;细胞内总超氧化物浓度结果显示预处理100、50、25μmol/L白藜芦醇组含量明显低于酒精诱导组;而未经白藜芦醇预处理的酒精诱导组ORAC(45.26±2.75)明显低于100、50、25μmol/L白藜芦醇预处理组(65.74±1.64、68.14±6.06、70.81±6.35).RT-PCR结果显示,与300 mmol/L酒精比较,不同浓度白藜芦醇均可上调SIRT1与ERK mRNA表达量;50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇均可明显上调MEK mRNA表达量;50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇均可显著下调Caspase3基因mRNA的表达量.结论:本研究提示酒精可诱导氧化应激相关的凋亡产生,而白藜芦醇通过调节MEK/ERKSIRT1通路中基因的表达发挥抗凋亡作用从而削弱酒精诱导的氧化应激及凋亡的损伤作用.

苏黄止咳胶囊中五味子醇甲对感冒后咳嗽的改善作用

目的探讨苏黄止咳胶囊中五味子醇甲对感冒后咳嗽(PIC)的改善作用。方法气管滴注脂多糖(LPS)并联合香烟烟雾刺激建立体内PIC小鼠模型,小鼠随机分为对照组、模型组、苏黄止咳胶囊组(14 g/kg)、孟鲁司特钠组(阳性对照,3 mg/kg)和五味子醇甲低、高剂量组(10、30 mg/kg);LPS刺激人支气管上皮细胞(BEAS-2B)建立体外PIC模型,细胞分为对照组、模型组、苏黄止咳胶囊组(10μg/mL)和五味子醇甲低、高浓度组(3、10μmol/L)。HE和Masson染色检测肺及支气管组织病理变化,ELISA法检测肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS、MDA、SOD、GSH水平,RT-qPCR法检测BEAS-2B细胞IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达,Western blot法检测小鼠肺组织和BEAS-2B细胞中p-PI3K、p-Akt、NOX4、SIRT1、p-ERK、Fibronectin、E-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达。结果与模型组比较,五味子醇甲和苏黄止咳胶囊均可延长PIC小鼠咳嗽潜伏期(P<0.01),减少咳嗽次数(P<0.01),减轻肺组织炎性细胞浸润和胶原沉积,降低肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS、MDA水平和Fibronectin、Vimentin、α-SMA、p-ERK、p-PI3K、p-Akt、NOX4蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高肺组织SOD、GSH水平和E-cadherin、SIRT1蛋白表达(P<0.05,P<0.01);降低BEAS-2B细胞ROS水平、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和p-ERK、p-PI3K、p-Akt、NOX4蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高BEAS-2B细胞SIRT1蛋白表达(P<0.01)。结论五味子醇甲可通过调节SIRT1/ERK信号通路抑制炎症,通过调节PI3K/Akt/NOX4信号通路抑制氧化应激,发挥对PIC的止咳作用,是苏黄止咳胶囊的主要止咳功效成分之一。