ERK-VEGF/MMP-9信号通路对肝癌HepG2细胞不良生物学行为的调控作用

目的:探究ERK-VEGF/MMP-9信号通路对肝癌HepG2细胞不良生物学行为的调控作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞,54个培养皿分为对照组,阻断组及转染组,各18。对照组不进行干预;阻断组使用特异性ERK-VEGF/MMP-9信号通路抑制剂GDC-0994;转染组转染ERK1质粒。MTT法检测HepG2细胞增殖情况;流式细胞仪检测HepG2细胞周期及凋亡变化;Transwell实验分析HepG2细胞迁移、侵袭情况;Western blot法检测ERK、VEGF以及MMP-9蛋白表达。结果:与对照组相比,阻断组细胞增殖率下降、S期及G_(2)/M期细胞占比增加、细胞凋亡率增加、细胞迁移及侵袭数降低(P<0.05),转染组细胞增殖率上升、S期及G_(2)/M期细胞占比减少、细胞凋亡率下降、细胞迁移及侵袭数增加(P<0.05)。与对照组相比,阻断组ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均下降(P<0.05);转染组ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均上升(P<0.05)。结论:阻断ERK-VEGF/MMP-9信号通路可抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭,促进其凋亡。

靶向siRNA阻断Wnt/β-catenin信号通路对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞VEGF、MMP-9表达的影响

目的通过观察人子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达,及利用siRNA靶向沉默β-catenin基因以阻断Wnt/β-catenin信号通路来观察其下游靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路在子宫内膜异位症发生机制中的作用。方法采用随机、对照设计,将体外分离、培养的24例子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞分成3组(n=8):空白组、阴性组(以含阴性荧光siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染)以及siRNA干扰组(以含β-catenin siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染),并以10例非子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞作为正常组。利用Real-time PCR和Western blot方法分别检测子宫内膜异位症在位子宫内膜空白组和非子宫内膜异位症正常组β-catenin的表达。转染24h后,用以上方法分别检测子宫内膜异位症空白组、阴性组和siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9的表达。结果子宫内膜异位症空白组β-catenin mRNA和蛋白的表达明显高于非子宫内膜异位症正常组(均P<0.05)。子宫内膜异位症siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9mRNA和蛋白的表达明显低于空白组和阴性组(均P<0.05),而空白组与阴性组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达明显高于非子宫内膜异位症患者,阻断Wnt/β-catenin信号通路后,其下游靶基因VEGF、MMP-9的表达明显受到抑制。因此,Wnt/β-catenin信号通路可能在子宫内膜异位症的发生机制中起重要作用。

Rho/ROCK信号通路对在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的探讨Rho/ROCK信号通路激活后,在异位子宫内膜间质细胞中NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的变化情况及可能的作用机制,为临床提供新的治疗靶点。方法取90例卵巢处子宫内膜在异位病灶以及90例正常子宫内膜,分离、纯化间质细胞,建立体外间质细胞培养模型。酶免疫吸附的方法分析ROCKⅠ激酶活性。QPCR法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的转录水平,免疫印迹(Western blot)法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达水平。结果在异位子宫内膜间质细胞多呈梭形或者多角形,贴壁和增殖较快;在异位子宫内膜间质细胞的ROCKⅠ激酶活性和转录水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01);在异位子宫内膜间质细胞的NF-κB、MMP-9转录水平和蛋白表达水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01),而TIMP-1的转录水平和蛋白表达水平显著低于正常子宫内膜(P<0.01)。结论在异位子宫内膜间质细胞中Rho/ROCK信号通路处于激活状态,Rho/ROCK信号通路激活以后,在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9的表达均升高,TIMP-1的表达降低。其机制可能与该通路激活后引起下游基因表达变化有关。

正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控作用

目的观察人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对其下游基因MMP-2、MMP-7和MMP-9的影响。方法采用GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,提取胞核蛋白β-catenin,采用Western blotting检测胞核蛋白β-catenin的表达变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达变化。结果 Western blotting结果显示,GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于人滑膜细胞后,β-catenin在胞核蛋白中的表达水平明显升高,并随着GSK-3β选择性抑制剂作用时间的延长,β-catenin的表达逐渐增强,呈时间依赖性,而在其干预的第48小时,胞核蛋白β-catenin的表达变化最明显,是正常组滑膜细胞的5.8696倍,具有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附法(ELISA)结果显示,与正常组滑膜细胞比较,SB-216763干预的滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达分别是正常滑膜细胞的4.6188、3.2443和2.9979倍,具有统计学意义(P<0.05)。结论①SB-216763成功激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;②MMP-2、7、9在人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后其表达显著升高,证明激活Wnt/β-catenin信号通路对MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达有一定的调控作用。③Wnt/β-catenin信号通路在骨性关节炎患者中是激活的,而其对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控可能是导致关节软骨降解,促进骨关节炎形成的作用机制之一。该实验结果有助于从单一通路阐释Wnt/β-catenin信号通路对膝骨关节炎的作用机制。

ERK信号通路与MMP-9在肺腺癌表达中的相关性

目的研究细胞外信号调节激酶(ERK)通路与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肺腺癌表达中的相关性及意义。方法应用免疫组织化学(SP)法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)、MMP-9在67例肺腺癌组织中的表达。Western blot检测PD98059阻断ERK信号通路后肺癌细胞MMP-9蛋白表达水平的变化。结果 pERK蛋白在肺腺癌组织和正常组织中高表达率分别为65.6%、14.3%;MMP-9蛋白在肺腺癌组织和正常组织中高表达率分别为73.1%、21.4%。pERK与MMP-9表达存在正相关(r=0.57,P<0.05)。pERK、MMP-9的表达均与肺腺癌的TNM分期及淋巴转移状况相关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。用ERK阻断剂PD98059阻断ERK信号通路可降低MMP-9蛋白表达水平,并且随PD98059浓度升高MMP-9蛋白表达水平逐渐降低。结论 ERK信号通路可能通过上调MMP-9的表达促进肺腺癌的恶性进展,ERK信号通路可能是肺腺癌侵袭和转移的重要途径。

丹参酮联合大黄素通过NF-κB信号通路抑制肝细胞癌细胞中MMP-9的表达

目的:探究丹参酮联合大黄素对人肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响的潜在分子机制。方法:将购买的HCC细胞系Hep G2进行复苏,分为Emodin(18μmol/L,EMO组)、Tan(10μmol/L,Tan组)、Emodin+Tan(Emodin:18μmol/L;Tan:10μmol/L,EMO+Tan组)和保持未处理(Ctrl组)分别培养,孵育后,对各组Hep G2细胞株行MTT检测,评估各组细胞增殖能力;使用流式细胞术检测,观察各组细胞凋亡率;使用细胞侵袭实验,观察各组细胞侵袭能力;使用细胞划痕修复试验,观察各组细胞迁移能力;使用qRT-PCR、荧光素酶测定检测各组细胞内MMP-9mRNA表达和启动子活性情况;使用蛋白免疫印迹实验分析细胞内MMP-9蛋白表达情况;使用Ch IP分析NF-κB与人MMP-9启动子的结合活性。结果:MTT检测结果发现,低浓度丹参酮联合大黄素组(EMO+Tan组)细胞增殖显著低于Ctrl组;流式细胞术检测结果观察到EMO+Tan组细胞凋亡率显著高于Ctrl组;细胞侵袭实验结果显示,EMO+Tan组细胞侵袭数量显著低于Ctrl组;细胞划痕修复试验结果显示,EMO+Tan组细胞迁移数量显著低于Ctrl组;qRT-PCR和荧光素酶测定结果显示,EMO+Tan组MMP-9mRNA和启动子活性显著低于对照组;蛋白免疫分析结果显示EMO+Tan组MMP-9蛋白表达显著低于Ctrl组;ChI P结果显示,EMO+Tan组NF-κB与MMP-9启动子的结合活性显著降低。上述各组实验中,低浓度EMO组和Tan组与Ctrl组相比均无显著差异性。结论:在低浓度时,丹参酮联合大黄素可以通过抑制NF-κB信号通路来抑制细胞内MMP-9表达,从而抑制HCC肿瘤细胞在体外的生长、侵袭和迁移。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响,探讨其稳定AS易损斑块可能的作用机制。方法70只新西兰大耳白兔随机分为空白组(10只)和手术组(60只),采用高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤+基因转染+药物触发建立AS易损斑块兔模型。将手术组兔随机分为模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组和抑制剂组,直接灸组和隔药饼灸组取“巨阙”、双侧“天枢”“丰隆”和双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”,2组穴位隔日交替施灸,西药组予阿托伐他汀1.96 mg/(kg·d)口服,抑制剂组耳缘静脉注射盐酸法舒地尔10 mg/(kg·d),空白组和模型组只捆绑不干预,连续8周。ELISA检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,HE染色观察兔腹主动脉内膜和中膜形态,免疫组化染色检测腹主动脉Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho相关卷曲形成蛋白激酶1(ROCK1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,天狼猩红染色测定胶原纤维含量。结果与空白组比较,模型组兔血清HDL-C含量显著减少(P<0.01),LDL-C含量显著增加(P<0.01);腹主动脉结构紊乱,内膜增厚;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01),胶原纤维含量显著减少(P<0.01)。与模型组比较,隔药饼灸组兔血清HDL-C含量显著增加(P<0.05),LDL-C含量显著减少(P<0.01);斑块中细胞形态较模型组更为完整,内膜、中膜界限明显;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.01),胶原纤维含量显著增加(P<0.01)。结论隔药饼灸可调节AS易损斑块兔HDL-C、LDL-C含量,稳定易损斑块,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路、增加胶原纤维含量,进而增加纤维帽厚度有关。

Yap抑制剂抑制NF-κB/MMP-9信号通路诱导结直肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨Yap抑制剂抑制NF-κB/MMP-9信号通路诱导结直肠癌细胞凋亡的研究。方法:对Control(结直肠癌细胞株SW480)、Yap mimics(结直肠癌细胞株+Yap促进)和Yap Inhibitor(结直肠癌细胞株+VGLL4)进行转染、通过qPCR、免疫印记、Western-blot、流式细胞检测Yap、NF-κB和MMP-9水平、E-cadherin和vimentin mRNA、细胞的凋亡情况。结果:Yap在结肠癌细胞株属于高表达,Control中的NF-κB和MMP-9表达水平显著低于Yap mimics(P<0.05),Yap mimics中的NF-κB和MMP-9表达水平明显高于Yap Inhibitor(P<0.05),与Control相比,Yap Inhibitor中的NF-κB和MMP-9表达明显降低(P<0.05);Control中的E-cadherin mRNA显著低于Yap mimics(P<0.05),Yap mimics中的E-cadherin mRNA明显高于Yap Inhibitor(P<0.05);Control中的vimentin mRNA显著高于Yap mimics(P<0.05);Yap Inhibitor结直肠癌细胞凋亡数量与Control和Yap mimics相比凋亡最多(P<0.05),与Control相比,Yap mimics结直肠癌细胞凋亡数量最少(P<0.05)。结论:Yap抑制剂通过阻碍NF-κB/MMP-9信号通路的发展,促进结肠癌细胞的凋亡,抑制细胞增殖,阻止结直肠癌继续发展。

奥美昔芬对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及ERK-VEGF/MMP-9通路的影响

目的观察奥美昔芬对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及ERK-VEGF/MMP-9通路的影响。方法构建子宫内膜异位症模型(EM)大鼠,将其随机分为模型组、奥美昔芬组,通过皮下注射等量的0.9%生理盐水、奥美昔芬100 mg/(kg·d),连续注射42 d,测量术后14 d和48 d各组大鼠异位病灶体积,光镜下观察各组大鼠异位内膜组织形态变化,Western blot法检测大鼠子宫内膜促血管生成素1(Ang-1)、促血管生成素2(Ang-2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平情况。结果术后14 d,与空白组相比,模型组、奥美昔芬组大鼠体内异位病灶体积显著升高(P<0.05),在术后48 d,与空白组相比,模型组、奥美昔芬组异位病灶体积显著升高(P<0.05),异位膜上皮细胞、血管增多,与模型组相比,奥美昔芬组异位病灶体积显著降低(P<0.05),异位膜上皮细胞萎缩、血管减少,大鼠体内Ang-1、Ang-2、ERK、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论奥美昔芬可能通过调控ERK-VEGF/MMP-9,降低Ang-1、Ang-2蛋白表达,抑制内膜血管生成。

Notch信号通路与兔深Ⅱ度烧伤创面血管相关因子的表达

目的:探讨Notch信号通路与兔深Ⅱ度烧伤模型创面血管相关因子表达的关系。方法:120只新西兰大白兔,随机分为阻滞剂组、模型组、对照组。其中阻滞剂组于造模前1 d及造成深Ⅱ度烫伤后连续14 d按2 mg/kg注射γ-分泌酶阻滞剂(gamma-secretase inhibitor,GSI),每天1次;模型组同期注射生理盐水,每天1次;对照组不予造模,余同模型组。每组分别于第3,7,14,21,28天随机抽取8只处死,采用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)的表达。结果:模型组与阻滞剂组造模后21 d内VEGF和VEGFR-2的表达逐步上升,第21天后有所下降,而MMP-2和MMP-9的表达逐步下降,第21天后有所上升,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);各时间点模型组VEGF和VEGFR-2的表达均高于阻滞剂组,MMP-2和MMP-9的表达均低于阻滞剂组,差异具有统计学意义(P<0.05),阻滞剂组在造模后21 d内,VEGFR-2的表达与VEGF呈正相关,而MMP-2和MMP-9则与VEGF呈负相关。结论:在兔深Ⅱ度烧伤模型创面中,Notch信号通路被阻滞能够减弱创面血管生成因子VEGF和VEGFR-2的表达,而上调抑制因子MMP-2和MMP-9的表达。

经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及TGF-β_1水平的影响

目的:探讨经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎(KOA)患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及转化生长因子β_1(TGF-β)1水平的影响。方法:将KOA患者98例(98膝)随机分为2组各49例,对照组给予嘎日迪-15味丸治疗,实验组在对照组基础上给予经筋微创松解疗法,疗程均为2个月;观察2组治疗效果,比较2组治疗前后膝关节WOMAC评分、关节液中前列腺素E_2(PGE)2、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、TGF-β_1水平、关节软骨中Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB (NF-κB)蛋白表达。结果:总有效率实验组为89.90%,对照组为71.43%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组功能、关节疼痛、僵硬等评分均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项评分均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节积液TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节软骨MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达水平较治疗前降低,且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。结论:经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸治疗KOA疗效显著,其作用机制可能与降低MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达及TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平有关。

载脂蛋白E影响星形胶质细胞基质金属蛋白酶-9表达的机制研究

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)影响星形胶质细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的机制。方法(1)体外培养C57BL/6J种属的野生型(WT)和ApoE基因敲除型(ApoE-/-)乳鼠的星形胶质细胞,利用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体行免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞。(2)将WT和ApoE-/-乳鼠星形胶质细胞分别分为空白对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)和阳性沉默组(KD组),Control组不加任何病毒,NC组加入阴性对照慢病毒,KD组加入沉默p65基因的阳性慢病毒,用siRNA慢病毒沉默星形胶质细胞核因子-κB(NF-κB)p65基因,抑制NF-κB信号转导,应用Western blot检测NF-κB p65蛋白的表达,ELISA法检测细胞MMP-9和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。(3)用TNF-α刺激上述各组细胞24h,ELISA法检测刺激前后各组细胞MMP-9的浓度。结果(1)KD组两种细胞NF-κB p65蛋白的表达水平、MMP-9和TNF-α的浓度均显著低于Control组和NC组(P<0.05);而Control组和NC组细胞NF-κB p65蛋白的表达水平、MMP-9和TNF-α的浓度间的差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ApoE-/-细胞MMP-9和TNF-α的浓度在Control组和NC组中均高于WT细胞(P<0.05);而在KD组中与WT细胞无明显差异(P>0.05)。(3)TNF-α刺激24h后,Control组和NC组两种细胞MMP-9的浓度均升高(P<0.05);而KD组MMP-9的浓度无明显变化(P>0.05)。结论ApoE可能通过TNF-α/NF-κB信号通路影响星形胶质细胞MMP-9表达,从而影响血脑屏障的完整性。

MMP-9信号通路调控乳腺癌发展的机制

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤,早期症状多不明显,晚期可发生癌细胞远处转移,出现全身多器官病变,增加临床治疗难度,严重影响患者生活质量和生命安全。目前,乳腺癌的发病机制尚不明确,研究乳腺癌的发生、发展,尤其是转移相关的调控机制对乳腺癌的治疗具有重要意义。近年来研究表明MMP-9相关信号通路与乳腺癌的发生发展密切相关。本文就MMP-9的结构与生物学功能及其介导的乳腺癌侵袭及转移机制与预后作一综述,以期为临床治疗提供参考。

红花多糖对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及侵袭作用机制研究

目的:研究红花多糖对人宫颈癌细胞(hela)体外增殖、凋亡及侵袭蛋白表达的影响。方法:将宫颈癌细胞分为4组(3组为实验组,1组为对照组),3个实验组红花多糖质量浓度分别为0.16、0.32、0.64g/L,连续干预培养48h,进行形态学观察,并采用MTT法检测各诱导组与对照组第12、24、36、48h的OD值,绘制各组细胞生长曲线,并计算不同浓度红花多糖对hela的增殖抑制率。采用Annexin VFITC/PI双标法检测48h各组细胞凋亡率,采用RT-PCR检测各组中VEGF,Notch1,Notch2的表达,westening blotting检测各组MMP-9的表达,进行各组对比研究。结果:4组间的细胞增殖曲线、增殖抑制率有明显差异(P<0.05),明确红花多糖能抑制人宫颈癌细胞的生长、増殖,呈现时间和浓度效应关系。流式细胞仪分析结果提示红花多糖促进人宫颈癌细胞凋亡。VEGF、Notch1、Notch2mRNA在3组实验组的表达量较对照组低(P<0.05),MMP-9蛋白在3组实验组的表达较对照组低(P<0.05)。结论:红花多糖能促进宫颈癌细胞凋亡,可抑制宫颈癌细胞增殖,其作用机制可能与VEGF、Notch信号通路有关,抑制癌细胞转移机制与MMP-9蛋白表达减少有关。

SIS3抑制TGF-β1/Smad3信号通路对大鼠宫腔粘连的影响及其机制

目的探讨转录调节因子Smad3抑制剂(SIS3)抑制TGF-β1/Smad3信号通路对大鼠宫腔粘连的影响及其与子宫内膜组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的关系。方法将30只健康雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组(采用机械损伤联合脂多糖感染法造模)和干预组(相同方法造模后给予SIS3),每组10只。造模后2周收集大鼠子宫组织,采用HE染色和Masson染色检测子宫内膜的腺体数量和胶原纤维增加程度,计算子宫内膜的纤维化半定量评分;采用逆转录-PCR技术和蛋白印迹法检测各组大鼠TGF-β1、CTGF和MMP-9 mRNA和蛋白的表达量,并与纤维化评分进行相关性分析。结果(1)子宫内膜的纤维化半定量评分:模型组、干预组及对照组的子宫内膜纤维化半定量评分分别为(7.0±0.8)、(4.1±1.0)和0分,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)子宫内膜组织中TGF-β1、CTGF、MMP-9表达量的比较:模型组TGF-β1、CTGF、MMP-9 mRNA和蛋白的表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05);干预组TGF-β1、CTGF mRNA和蛋白的表达量均高于对照组(P均<0.05),但两组MMP-9 mRNA和蛋白的表达量差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组与干预组相比,仅CTGF mRNA和蛋白的表达量升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(3)TGF-β1、CTGF、MMP-9 mRNA和蛋白的表达量与纤维化评分的关系:模型组TGF-β1、CTGF mRNA和蛋白的表达量均与纤维化评分均呈正相关(P均<0.05),干预组仅CTGF mRNA和蛋白的表达量与纤维化评分呈正相关(P<0.05)。结论TGF-β1、CTGF、MMP-9可能参与宫腔粘连的发生过程;抑制TGF-β1/Smad3信号通路可减轻宫腔粘连的程度;TGF-β1、CTGF与宫腔粘连程度呈正相关;CTGF可作为宫腔粘连的潜在分子标志物。

沉默SEMA4D对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制

目的:研究沉默SEMA4D对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,并探索其作用机制。方法:体外培养人骨肉瘤HOS和U2OS细胞并转染SEMA4D-siRNA(si-SEMA4D)。采用CCK-8、Annexin-V/PI双染、Caspase 3/7活性细胞凋亡、Transwell实验检测si-SEMA4D对细胞增殖、凋亡和侵袭等的影响。结果:SEMA4D在骨肉瘤组织和细胞中高表达。转染si-SEMA4D可有效地抑制HOS和U2OS细胞中SEMA4D的表达,同时转染si-SEMA4D显著降低了HOS和U2OS细胞的增殖能力和侵袭能力,诱导了HOS和U2OS细胞的凋亡。此外,转染si-SEMA4D显著抑制了MMP2/9、RhoA、ROCK1/2的表达。结论:SEMA4D在骨肉瘤组织和细胞中表达上调。抑制SEMA4D可能通过调控RhoA-ROCK信号通路和MMP2/9的表达诱导骨肉瘤细胞凋亡并抑制细胞增殖和侵袭。

基于PI3K/Akt/NF-κB途径探究补肾活血方治疗子宫内膜异位症的作用机制研究

[目的]探究补肾活血方(BSHXR)治疗子宫内膜异位症(EMS)的作用机制。[方法]采用自体子宫内膜移植术建立EMS大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、BSHXR高、中、低剂量组、LY294002(PI3K抑制剂)组,每组10只。给药28 d后,测定大鼠异位子宫内膜病灶体积,苏木精-伊红(HE)染色观察异位子宫内膜组织病理变化,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的水平,免疫组化染色检测异位子宫内膜组织血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测异位子宫内膜组织血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA水平,Western blot法检测异位内膜组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子κB(NF-κB)通路蛋白表达水平。[结果]与假手术组比较,EMS大鼠异位子宫内膜病灶体积显著增加,血清炎症因子水平升高,CD31阳性细胞数量增加,VEGF、MMP-9 mRNA水平升高,PI3K/Akt/NF-κB信号通路被活化(P<0.05)。与模型组比较,BSHXR可缩小大鼠异位子宫内膜病灶体积,降低血清炎症因子水平,减少CD31阳性细胞数量,降低VEGF、MMP-9 mRNA表达水平,抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路活化,其作用呈剂量依赖性(P<0.05)。[结论]BSHXR对大鼠EMS具有治疗作用,其作用机制与抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路活化有关。

七氟醚对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及对microRNA-203的调控作用机制研究

目的观察七氟醚对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及对microRNA-203(miR-203)的调控作用,探讨其可能作用机制。方法将HCT116细胞分为对照组(5%CO2培养+未转染)、七氟醚组(4%七氟醚+5%CO2培养+未转染),miR-203组(5%CO2培养+转染miR-203 mimics)、miR-203+七氟醚组(4%七氟醚+5%CO2培养+转染miR-203 mimics),miR-203-NC+七氟醚组(4%七氟醚+5%CO2培养+转染miR-203 mimicsNC)。CCK-8实验检测细胞增殖能力;qRT-PCR法检测细胞的miR-203表达;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blotting法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果miR-203+七氟醚可抑制细胞增殖,降低细胞迁移能力,减少穿膜细胞数,降低细胞中p-ERK、MMP-9蛋白表达。结论七氟醚可抑制HCT116细胞侵袭、迁移,可能是通过上调miR-203表达、阻断ERK/MMP-9信号通路发挥作用。

异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的探讨异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法分别以30、60和120μg/ml异丙酚处理Eca109细胞,采用平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测细胞的克隆形成能力、侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达情况。结果 30μg/ml异丙酚对Eca109细胞的克隆形成能力无显著影响,但60和120μg/ml异丙酚能够显著抑制Eca109细胞克隆形成能力;异丙酚能够呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的侵袭和迁移,且抑制MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT蛋白的表达。结论异丙酚能够抑制食管癌Eca109细胞的侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

JAK2激酶抑制剂AG490对胃癌细胞侵袭的影响

目的 观察JAK2激酶抑制剂AG4 90对胃癌细胞侵袭以及对基质金属蛋白酶类(MMPs)、组织型基质金属蛋白酶抑制物 (TIMPs)表达的影响 ,探讨STAT3信号转导通路在胃癌侵袭转移调控中的作用。方法 应用JAK2激酶抑制剂AG4 90处理胃癌BGC 82 3细胞 ,Matrigel肿瘤体外侵袭模型检测肿瘤细胞侵袭 ;Westernblot检测STAT3、MMP 2、MMP 9蛋白表达及活性 ;RT PCR检测MMPs、TIMPsmRNA的表达。结果 AG4 90可抑制JAK2 /STAT3信号转导通路活化及胃癌BGC 82 3细胞侵袭 ,在此过程中AG4 90在mRNA和蛋白水平抑制MMP 2和MMP 9表达 ,同时上调TIMP 1、TIMP 2mRNA的表达。结论 STAT3信号转导通路参与胃癌细胞侵袭调控 ,阻断STAT3通路活化可以抑制胃癌细胞侵袭 ,这一作用可能是通过抑制MMP 2和MMP 9表达以及上调TIMP 1和TIMP 2表达实现的。