表没食子儿茶素-3-没食子酸酯通过ERK1/2通路对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)通过ERK1/2通路对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响。方法将体外培养的肝癌HepG2细胞分为空白组、EGCG组、EGCG+ERK抑制剂组。收集细胞裂解液,CCK-8检测细胞增殖,相差显微镜和Hoechst 33258染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测ERK mRNA水平,Western blotting分析ERK、磷酸化ERK、Bax和Bcl-2表达水平,并计算Bax/Bcl-2比值。结果EGCG可以显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01),并促进HepG2细胞的凋亡(P<0.01);加入ERK通路抑制剂可显著逆转EGCG对HepG2的作用。结论EGCG可通过ERK1/2信号通路发挥对肝癌HepG2细胞的抑制作用。

基于ERK1/2通路探讨八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制

目的通过观察八宝丹(BBD)对U2OS细胞生长的抑制作用以及对细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)通路的影响,以期揭示八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制。方法选用U2OS细胞株作为研究对象,实验分为对照组和八宝丹高、中、低剂量组,高剂量组药物浓度为1.5 mg/mL;中剂量组药物浓度为1.0 mg/mL、低剂量组药物浓度为0.5 mg/mL,干预结束后采用CCK8法检测八宝丹对U2OS细胞增殖的影响;流式细胞术检测八宝丹对细胞凋亡的影响;qPCR检测八宝丹对ERK1/2通路上游Ras、Raf基因表达水平的影响;Western blot检测八宝丹对Cy⁃clinD1、MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达量的影响。结果与对照组比较,不同浓度的八宝丹在干预24 h和48 h对U2OS细胞均有不同程度的生长抑制作用(P均<0.05);不同浓度八宝丹干预48 h均能明显降低Ras、Raf基因的表达,同时下调CyclinD1、MEK1/2蛋白的表达,下调ERK1/2与p-ERK1/2蛋白比率(P均<0.05)。结论八宝丹可抑制U2OS骨肉瘤细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制ERK1/2信号通路实现的。

miR-526b-3p调控ERK1/2通路对阿霉素所致大鼠心脏损害的干预作用

目的探究miR-526b-3p调控细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2通路对阿霉素(ADM)所致大鼠心脏损害干预作用。方法选取40只健康雌雄各半SPF级Wistar大鼠为研究对象,空白组10只,建立心脏损害模型,分为模型组、miR-526b-3p上调组、miR-526b-3p下调组,各10只。用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测miR-526b-3p表达水平,检测各组心功能各指标水平,采用碱性二甲基亚砜-鲁米诺化学发光法检测心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用酶联免疫双抗体夹心法检测心肌磷酸肌酸激酶(CPK)活性,采用Western印迹检测左心室组织ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的相对表达量。结果与模型组相比,miR-526b-3p上调组miR-526b-3p表达水平、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVEDs)、心搏出量(SV)、左心室射血分数(LVEF)水平、SOD活性、CPK活性、心肌组织ERK1/2、p-ERK1/2通路蛋白表达量均较高,miR-526b-3p下调组上述指标均较低;与miR-526b-3p下调组相比,miR-526b-3p上调组上述指标均较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-526b-3p高表达时ADM对心肌微小血管和心脏功能的损害作用加重,miR-526b-3p低表达时则能减弱上述损害作用,表明miR-526b-3p参与ADM引起心脏功能的损伤作用。

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721 ERK1/2通路和G_2/M期调控蛋白的影响

目的探讨斑蝥素酸镁对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路和周期相关蛋白的影响。方法将不同浓度的斑蝥素酸镁作用于人肝癌细胞SMMC-7721,免疫印迹法检测ERK1/2通路和周期相关蛋白表达的变化。结果与对照组比较,0.895、1.79μmol/L浓度组的ERK1/2蛋白磷酸化水平明显下降,同时周期相关蛋白Cdc25C、Cdc2表达显著下调。结论推测斑蝥素酸镁可能是通过抑制ERK1/2通路,进而调控Cdc25C、Cdc2的表达下调,使细胞发生G_2/M期阻滞,最终诱导细胞凋亡。

柿叶提取物通过MAPK/ERK1/2通路减轻心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨柿叶提取物(PEL)减轻心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法 健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组(MIRI组)、柿叶提取物组(PEL组)、MAPK抑制剂组、MAPK抑制剂+PEL组。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30min后再灌注60min建立心肌缺血再灌注模型。PEL组大鼠灌胃50mg/(kg·d)柿叶提取物,MAPK抑制剂组大鼠尾静脉注射PD0325901;MAPK抑制剂+PEL组大鼠灌胃50mg/(kg·d)柿叶提取物前30min尾静脉注射PD0325901。假手术组和MIRI组灌胃等量生理盐水。每天相同时间给药1次,连续给药21d。全自动生化分析仪检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)水平,试剂盒检测心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,采用1%氯化三苯基四氯唑测定心肌梗死面积,WesternBlot检测心肌组织中Bcl-2、Bax和p-ERK1/2蛋白表达。结果 与假手术组比,MIRI组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积,心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著升高(P<0.05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与MIRI组比,PEL组和MAPK抑制剂+PEL组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P<0.05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达均显著升高(P<0.05);MAPK抑制剂组无显著差异(P>0.05)。与MAPK抑制剂组比,MAPK抑制剂+PEL组血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P<0.05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 PEL可能通过激活MAPK/ERK1/2信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。

北五味子多糖通过ERK1/2通路对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的作用机制

目的观察北五味子多糖(polysaccharide of Schisandra chinensis,SCP)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFb)增殖作用,并探讨其作用机制.方法以培养的新生Wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组、模型组、3个药物剂量组.采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb;四氮唑盐(MTT)比色法检测CFb增殖;羟脯氨酸(Hyp)法测定胶原含量;分光光度计测定CFb中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平;硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)水平;免疫组化技术检测CFb中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达.结果SCP能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖(P<0.05或P<0.01),降低Hyp含量,提高SOD活力,降低MDA水平(P<0.05,P<0.01),提高NOS活性及NO水平(P<0.05,P<0.01),减低ERK1/2蛋白表达(P<0.05,P<0.01).结论SCP可通过抑制ERK1/2信号通路提高NOS活性,并升高NO水平,增强抗AngⅡ诱导的CFb增殖能力.

血管紧张素Ⅱ通过ERK1/2通路促进血管内皮细胞钙化

目的探讨血管紧张素II通过ERK1/2通路促进血管钙化的病理生理学机制。方法体外培养HUVECs 5 d后,用不同浓度梯度血管紧张素Ⅱ刺激内皮细胞,筛选出诱导血管内皮细胞钙化的最适浓度。用血管紧张素Ⅱ刺激内皮细胞不同时间点(0、15、30、45、60 min),检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路磷酸化水平。用血管紧张素Ⅱ诱导5 d的钙化内皮细胞分为4组:对照组(用5%胎牛血清的ECM培养液)、血管紧张素Ⅱ组(100 nmol/L AngⅡ)、氯沙坦组(100 nmol/L AngⅡ+1μmol/L Losartan)、U0126组(100 nmol/L AngⅡ+U01261μmol/L)。通过Western blot、ELISA检测骨形态发生蛋白-2、4(BMP2、BMP4)钙化因子表达来探讨血管紧张素Ⅱ对血管内皮钙化的影响及其信号通路。结果血管紧张素Ⅱ增加人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的BMP2、BMP4钙化因子表达(P<0.05);而血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂和ERK1/2通路抑制剂U0126可下调血管紧张素Ⅱ对血管内皮BMP2、BMP4的表达(P<0.05)。结论血管紧张素Ⅱ可诱导HUVECs钙化,其途径是通过ERK1/2通路促进血管内皮细胞钙化。

SIRT1激活ERK1/2通路抑制大鼠心肌缺血再灌注时内质网应激相关蛋白的表达

目的研究大鼠心肌缺血再灌注时沉默信息调节因子1(SIRT1)对心肌内质网应激相关凋亡的影响及其与ERK1/2信号通路的关系。方法将大鼠随机分为6组:假手术组、缺血再灌注组、白藜芦醇+缺血再灌注组、白藜芦醇+EX527+缺血再灌注组、白藜芦醇+PD98059+缺血再灌注组、PD98059+缺血再灌注组,每组12只。结扎大鼠冠状动脉左前降支建立大鼠心肌I/R损伤模型。TUNEL法检测心肌细胞凋亡;比色法检测LDH、CK-MB活性。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测心肌GRP78、caspase-12和CHOP mRNA的表达;Western印迹检测SIRTl、caspase-12、CHOP、磷酸化ERK1/2和总ERK1/2蛋白的表达。结果 Res+I/R组与I/R组相比,心肌凋亡指数降低(P<0.05),血清LDH及CK-MB活性降低,内质网应激相关凋亡的指标GRP78、caspase-12及CHOP的蛋白表达量和mRNA均降低(P<0.05);给予SIRT1抑制剂后与Res+I/R组相比,以上指标升高;Res+I/R组与I/R组相比,SIRT1及磷酸化ERK1/2蛋白的表达量均增加(P<0.05);而Res+EX+I/R组与Res+I/R组相比,SIRT1、磷酸化ERK1/2蛋白的表达量又降低(P<0.05)。结论 SIRT1能够抑制大鼠在体缺血再灌注心肌的内质网应激凋亡相关蛋白表达,发挥保护心肌的作用,其机制可能与ERK1/2通路激活有关。

DUSP6通过负向调控ERK1/2通路抑制IBV的增值

为了阐明ERK(extracellular signal-regulated protein kinases)1/2通路在传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)复制过程中的作用以及双特异性磷酸酶6(dual specificity phosphatase 6,DUSP6)对ERK的反馈性负向调控在IBV复制过程中的作用。本研究通过Western blot、Northern blot检测发现:IBV感染Vero和H1299细胞可导致ERK1/2的磷酸化水平和DUSP6表达均上调;利用MEK1/2特异性抑制剂U0126处理病毒感染的细胞后,可明显下调ERK1/2的磷酸化,同时抑制病毒的增殖;利用DUSP6的特异性抑制剂BCI抑制DUSP6的活性或者用siRNA阻断DUSP6的表达后,再感染IBV,发现ERK1/2的磷酸化水平增高,病毒蛋白的表达上调。综上,推测IBV感染细胞激活ERK1/2信号通路,有助于病毒的复制,同时,细胞通过诱导表达DUSP6,负向调控ERK1/2的磷酸化水平,抑制病毒增殖。

南葶苈子提取液对心肌缺血/再灌注大鼠心肌自噬及MAPK/ERK1/2通路的影响

目的观察南葶苈子提取液对心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)大鼠心肌自噬的影响并探讨其可能的作用机制。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、南葶苈子提取液低剂量组、南葶苈子提取液中剂量组、南葶苈子提取液高剂量组。采用结扎大鼠冠脉左前降支缺血30 min、再灌注120 min建立MI/RI模型。检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平以及心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化,透射电镜观察自噬小体变化,Western blotting测定心肌组织Beclin-1、LC3Ⅱ、B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、蛋白激酶p38(p38)和p-ERK1/2蛋白水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠心电图ST段抬高,血清LDH、CK-MB和cTnⅠ均升高,心肌组织MDA含量、Beclin-1、p38蛋白以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,SOD活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达降低(P <0.05)。与模型组比较,阳性对照组及南葶苈子提取液中、高剂量组大鼠心电图ST段、血清LDH、CK-MB和cTnⅠ、心肌组织MDA含量、Beclin-1、p38蛋白以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低,SOD活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达升高(P <0.05)。与阳性对照组比较,南葶苈子提取液低、中剂量组大鼠心电图ST段、血清LDH、CK-MB和cTnⅠ、心肌组织MDA含量均升高,心肌组织SOD活力、p-ERK1/2降低,且南葶苈子提取液高剂量组大鼠血清CK-MB降低,低剂量南葶苈子提取液Beclin-1、p38及不同剂量南葶苈子提取液LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高,南葶苈子提取液低剂量组Bcl-2降低(P <0.05)。心电图ST段、血清LDH、CK-MB和cTnⅠ、心肌组织MDA含量、Beclin-1、p38蛋白以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值随南葶苈子提取液剂量增加呈下降趋势,心肌组织SOD活力、p-ERK1/2蛋白表达随剂量增加呈上升趋势。结论南葶苈子提取液处理可通过降低MI/RI大鼠心肌自噬保护心肌损伤,其保护机制可能与MAPK/ERK1/2通路有关。

高糖通过ERK1/2通路对人肾小管上皮细胞脂联素表达的影响

目的通过体外培养人肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cells,HK-2),观察高糖对HK-2脂联素(adiponectin,ADPN)表达水平的影响并探讨其可能机制。方法将培养的HK-2细胞分为4组:①低糖对照组(5.6 mmol/L葡萄糖);②PD98059(职K1/2信号传导通路的抑制剂)组(5.6 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059);③高糖组(30 mmol/L葡萄糖);④高糖+PD98059组(30 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059)。各组分别培养48 h后荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HK-2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activator receptor,PPAR-γ)及脂联素mRNA的表达,免疫印迹(Western blotting)法检测各组脂联素蛋白的表达水平。结果 HK-2细胞表达脂联素;PD98059组与低糖对照组相比,PPAR-γmRNA及脂联素的mRNA和蛋白表达的差异均无统计学意义(均P>0.05);与低糖对照组相比,高糖组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+PD98059组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖可以降低HK-2细胞脂联素mRNA和蛋白的表达;高糖作用于HK-2细胞可能是通过激活ERK1/2信号传导通路降低PPAR-γ的表达,从而影响其脂联素的表达。

紫草素对心肌梗死大鼠心脏功能及MAPK/ERK1/2通路的影响

目的:探讨紫草素对心肌梗死大鼠心脏功能及MAPK/ERK1/2通路的影响。方法:将SPF级雄性SD大鼠进行心肌梗死造模,另设正常对照组(20只),将造模成功的100只大鼠随机分为模型组、硫氮卓酮(2.61 mg/kg)组及紫草素高(25 mg/kg)、中(4 mg/kg)、低(1 mg/kg)剂量组,每组20只,灌胃给药,模型组及正常对照组采用等体积生理盐水进行灌胃,连续6周。通过多普勒超声心动图对大鼠进行心脏血流动力学检测,处死大鼠,提取心肌组织,通过HE染色法检测心肌组织病变,TCC染色法检测心肌梗死情况,ELISA法检测血清CK-MB、LDH水平,试剂盒检测心肌组织MDA、SOD、GSH-Px水平,Western blot法检测心肌组织ERK1/2、p-ERK1/2、P38 MAPK、p-P38 MAPK蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组心肌梗死面积显著增加,左心室LVEDD、LVESD及血清CK-MB、LDH、MDA水平显著升高,左心室+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、LVEF、FS及血清SOD、GSH-Px水平和ERK1/2、p-ERK1/2、P38 MAPK、p-P38 MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组心肌梗死面积显著减小,左心室LVEDD、LVESD及血清CK-MB、LDH、MDA水平显著降低,+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、LVEF、FS及血清SOD、GSH-Px水平和ERK1/2、p-ERK1/2、P38 MAPK、p-P38 MAPK蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:紫草素可改善心肌梗死大鼠心肌梗死情况,改善心功能、氧化应激及血流动力学,其机制可能与MAPK/ERK1/2通路有关。

丙泊酚联合BMSC移植修复对脊髓损伤大鼠运动功能及ERK1/2通路的影响

目的探究丙泊酚联合骨髓间充质干细胞(BMSC)移植修复对脊髓损伤大鼠运动功能及ERK1/2通路的影响。方法建立脊髓损伤大鼠模型,随机分为模型组、丙泊酚组、BMSC移植组、丙泊酚+BMSC移植组,每组12只;另取12只设为假手术组。分组处理后,以斜板试验、运动功能量表评分(BBB)评价5组大鼠的运动功能;采用诱发电位仪检测运动诱发电位和体感诱发电位,判断大鼠神经电生理恢复情况;分别检测脊髓组织中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平;采用免疫组织化学方法及免疫印迹法检测脊髓组织中ERK1/2、p-ERK1/2的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠BBB评分、斜板实验功能值、体感及运动诱发电位波幅、脊髓组织中SOD水平均降低(P<0.05),体感及运动诱发电位潜伏期、脊髓组织中MDA及p-ERK1/2水平均增高(P<0.05);与模型组相比,丙泊酚组、BMSC移植组、丙泊酚+BMSC移植组大鼠BBB评分、斜板实验功能值、体感诱及运动诱发电位波幅、脊髓组织中SOD水平均增高(P<0.05),体感及运动诱发电位潜伏期、脊髓组织中MDA及p-ERK1/2水平均降低(P<0.05);分别与丙泊酚组、BMSC移植组相比,丙泊酚+BMSC移植组大鼠BBB评分、斜板实验功能值、体感及运动诱发电位波幅、脊髓组织中SOD水平均增高(P<0.05),体感及运动诱发电位潜伏期、脊髓组织中MDA及p-ERK1/2水平均降低(P<0.05);各组ERK1/2表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚联合BMSC移植修复可改善脊髓损伤大鼠运动功能,且比各自单独应用疗效好,可能是通过下调ERK1/2通路实现的。

Glypican-6在胃肠道间质瘤组织中的表达及其通过ERK1/2通路促进细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探究Glypican-6对胃肠道间质瘤的作用及其可能的作用机制。方法:收集胃肠道间质瘤组织及其癌旁组织27例,RT-PCR和Western blot检测组织中Glypican-6的表达。选取胃肠道间质瘤细胞系GIST-T1进行体外研究。RT-PCR实验检测细胞中Glypican-6 mRNA的表达;Western blot检测细胞中Glypican-6、E-cadherin、N-cadherin、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白的表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与癌旁组织相比,癌组织中Glypican-6 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05)。与si-NC组相比,si-Glypican-6组细胞中Glypican-6 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞24 h、48 h和72 h的增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白和p-ERK1/2/ERK1/2比值显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05);与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-Glypican-6组细胞中Glypican-6 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),细胞24 h、48 h和72 h的增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白表达和p-ERK1/2/ERK1/2比值显著升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05);与pcDNA3.1-Glypican-6组相比,pcDNA3.1-Glypican-6+PD98059组细胞24 h、48 h和72 h的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白表达和p-ERK1/2/ERK1/2比值显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05),Glypican-6蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Glypican-6在胃肠道间质瘤组织中高表达,Glypican-6通过ERK1/2通路促进胃肠道间质瘤细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力和N-cadherin蛋白表达,抑制E-cadherin蛋白表达。

电针对缺血性脑卒中后神经行为学评分及ERK1/2通路影响研究

目的:观察电针曲池、足三里穴对大鼠神经行为学评分的影响及其与ERK1/2信号通路的关系。方法:采用随机数字表法,将30只大鼠分为3组,分别为假手术组、模型组、电针组,每组各10只。造模后待缺血再灌注2h后予以神经行为学评估,每天1次;造模后第1天对电针组大鼠进行电针干预,30min/次/天,疗程为3天,其余两组大鼠不作任何处理;Western Blot检测大鼠ERK1/2、p-ERK1/2表达情况并观察ERK1/2通路激活情况。结果:电针干预3天后,电针组大鼠神经行为学评分显著低于模型组(P<0.05),差异具有统计学意义;Western Blot示电针组大鼠p-ERK1/2蛋白水平显著高于模型组(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:电针干预治疗后大鼠神经行为学明显改善,可能与激活ERK1/2信号通路有关。

肝星状细胞条件培养基激活ERK1/2通路诱导肝癌细胞增殖及上皮间质转化

目的探讨肝星状细胞(HSC)对肝癌细胞(HCC)恶性生物学行为的影响及其相关机制。方法分别培养SMMC-7721肝癌细胞、Hep G2肝癌细胞和LX-2 HSC,采用LX-2 HSC条件培养基(LX2-CM)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂U0126处理肝癌细胞,TranswellTM小室检测肝癌细胞的侵袭和迁移能力,CCK-8法检测细胞的增殖情况,实时定量PCR和Western blot法分别检测两种肝癌细胞磷酸化的胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2、c-Myc、波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏素(E-cadherin)的mRNA和蛋白水平。结果 LX2-CM能促进SMMC-7721细胞和Hep G2细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用可被U0126阻断。LX2-CM可以上调p-ERK1/2、c-Myc、vimentin的水平,下调E-cadherin的水平;U0126处理细胞后,p-ERK1/2、c-Myc、vimentin的水平显著降低,E-cadherin水平明显升高。结论 LX2-CM能通过ERK1/2通路激活c-Myc,促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导上皮间质转化。

丙泊酚通过抑制JNK/ERK1/2通路抑制鼻咽癌C666-1细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨丙泊酚对鼻咽癌C666-1细胞的作用及机制。方法C666-1细胞分为4组:对照组、丙泊酚22、33、44μmol/L组。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡、侵袭和迁移能力;Western印迹检测凋亡和侵袭相关蛋白表达。JNK抑制剂SP600125或ERK1/2抑制剂U0126与丙泊酚(44μmol/L)单独或联合处理细胞后,Western印迹检测JNK和ERK1/2蛋白磷酸化,CCK-8检测细胞活性。构建裸鼠移植瘤,免疫组化检测瘤组织中p-JNK、p-ERK1/2和Ki67的表达,TUNEL检测瘤组织细胞凋亡。结果与0μmol/L组比较,丙泊酚33μmol/L及以上浓度明显抑制C666-1细胞活力(P<0.05)。与对照组比较,丙泊酚33和44μmol/L组C666-1细胞中凋亡相关蛋白表达升高(P<0.05),细胞凋亡数增加(P<0.05);细胞侵袭和迁移数减少(P<0.05),侵袭相关蛋白及JNK和ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05),SP600125或U0126与丙泊酚单独或联合组均降低细胞存活率(P<0.05)。丙泊酚显著抑制移植瘤生长并促进凋亡(P<0.05)。结论丙泊酚通过抑制JNK/ERK1/2通路诱导鼻咽癌C666-1细胞凋亡,抑制增殖、侵袭和移植瘤生长。

ERK1/2信号通路基因3'UTR多态性与非小细胞肺癌的相关性

目的探究4个ERK1/2信号通路的基因3'UTR区域的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点(MAPK1基因中的rs9340,NRAS基因中的rs14804,KRAS基因中的rs712和rs7973450)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的相关性。方法纳入了478名NSCLC患者及480名健康对照者,利用TaqMan探针法对其进行基因分型检测,并分析上述4个SNP与NSCLC的相关性。结果rs9340位点的等位基因在对照组与非小细胞鳞状细胞癌组(squamous cell carcinoma,SCC)中分布频率的差异具有统计学意义(P=0.009),该结果表明rs9340位点的G等位基因可能是非小细胞肺鳞癌的保护性因素(OR=0.67,95%CI:0.50~0.91)。同时,在<50岁年龄组中,rs9340位点的等位基因在对照组和NSCLC组中的分布频率差异具有统计学意义(P=5.07×10^(-4)),该结果表明rs9340等位基因G可能是NSCLC的保护性因素(OR=0.46,95%CI:0.29~0.72)。结论MAPK1基因SNP位点rs9340可能与NSCLC的发生风险相关。

WNK2通过抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路延缓肝细胞癌的增殖和侵袭

目的探讨WNK2对肝细胞癌(hepatocellocellua carcinoma,HCC)中ERK1/2/ROS/SHP2信号通路的影响,并探讨其在HCC细胞增殖和迁移中的作用。方法将WNK2-mimic和sh-RNA WNK2以及相应的阴性对照转染HepG2细胞,采用BALB/c裸鼠皮下成瘤实验检测WNK2对肝细胞癌增殖能力的影响;采用Western Blot检测瘤组织中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用SHP2抑制剂PHPS1进行处理之后,采用Western Blot检测HepG2细胞中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用细胞划痕实验和Transwell检测HepG2细胞的迁移能力和侵袭能力;采用单克隆增殖实验和CCK-8检测HepG2细胞的增殖能力。结果与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组裸鼠的瘤体体积显著增大(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组裸鼠的瘤体体积显著减小(P<0.01);Western Blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组WNK2的表达显著升高(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著降低(P<0.01);在体外实验当中,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);相对于sh-NC+PHPS1组,sh-RNA WNK2+PHPS1组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),而p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达则被逆转并且与sh-NC+PHPS1组不具有显著性差异(P>0.05);细胞划痕实验和Transwell结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著升高(P<0.01);sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05);单克隆增殖实验结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的增殖能力显著升高(P<0.01),而sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的增殖能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05)。结论WNK2可以抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路,从而抑制ERK1/2/AKT信号通路,延缓HCC的增殖和迁移。

调补肺肾三法通过抑制ERK1/2信号通路改善COPD大鼠气道黏液高分泌

目的 探究调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)稳定期大鼠气道黏液高分泌的影响及作用机制。方法 90只大鼠随机分为对照(Control)组、模型(COPD)组、补肺健脾(Bu-Fei Jian-Pi Formula, BJF)组、补肺益肾(Bu-Fei Yi-Shen Formula, BYF)组、益气滋肾(Yi-Qi Zi-Shen Formula, YZF)组、ERK1/2抑制剂(PD98059)组、补肺健脾联合抑制剂(BJF+PD98059)组、补肺益肾联合抑制剂(BYF+PD98059)组和益气滋肾联合抑制剂(YZF+PD98059)组。第1~8周采用香烟烟雾暴露联合细菌反复感染的方法建立COPD大鼠模型,9~16周Control组和COPD组给予生理盐水每只2 mL,BJF组、BYF组和YZF组分别给予对应的调补肺肾三方灌胃,第16周PD98059组、BJF+PD98059组、BYF+PD98059组和YZF+PD98059组给予PD98059腹腔注射7 d。16周结束后取材,检测大鼠肺功能、肺组织形态、肺组织水含量、BALF中炎性细胞计数和血清炎性因子水平。AB-PAS染色和免疫组化法分别检测杯状细胞比例和Muc5AC、Muc5B表达。PCR检测ERK1、ERK2、ENaC、CFTR、AQP5 mRNA表达。Western Blot测定肺组织中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达。结果 与Control组相比,COPD组大鼠TV、MV、FVC、FEV_(0.1)及FEV_(0.1)/FVC均显著下降(P<0.01);肺病理显示肺泡紊乱,肺泡壁大量断裂,气管壁严重皱缩增厚,周围有大量炎性细胞浸润;肺组织水含量明显升高(P<0.01);BALF中巨噬细胞比例显著降低(P<0.01),中性粒细胞和淋巴细胞比例显著升高(P<0.01);血清炎性因子TNF-α、IL-1β水平显著增高(P<0.05,P<0.01);气道上皮杯状细胞比例和Muc5AC、Muc5B表达水平均显著升高(P<0.01);肺组织ERK1、ERK2、ENaC mRNA表达量均明显升高(P<0.01),CFTR和AQP5 mRNA的表达均明显降低(P<0.01);肺组织P-ERK1/2, ERK1/2表达明显升高(P<0.01);与COPD组相比,各治疗组能不同程度改善上述指标变化(P<0.05,P<0.01),调补肺肾三方联合PD98059组治疗效果优于单一治疗组(P<0.05,P<0.01)。结论 调补肺肾三法通过抑制ERK1/2信号通路改善COPD大鼠气道黏液高分泌。