聚合酶链反应快速检测多重耐药葡萄球菌实验研究

目的 :应用聚合酶链反应检测葡萄球菌属菌株所携带耐甲氧西林mecA基因和红霉素抗性基因ermA、ermC与临床药敏试验比较。方法 :根据上述抗性基因保守区域选用引物经聚合酶链反应检测成都地区临床分离78株耐药葡萄球菌与临床药敏试验比较并追踪其预后。结果 :mecA基因型与表型符合率 79 5 % ,ermA、ermC基因型与表型符合率 82 2 % ,检测mecA、ermA、ermC基因均阳性患者与上述基因阴性患者死亡率存在显著性差异(P <0 0 1)。结论 :多重PCR检测mecA、ermA、ermC基因敏感、快速 ,可作为判断预后参考指标。

内质网线粒体结构偶联在NLRP3炎症小体形成与活化中的作用及机制研究进展

内质网线粒体结构偶联(endoplasmic reticulum–mitochondria contacts,ERMC)在细胞内不同的信号通路中发挥着重要作用,其结构异常可导致机体出现多种病理状态,进而引起多种疾病。近年来,有学者发现ERMC异常可促进内质网内钙离子转移至线粒体内最终引起线粒体钙超载,线粒体钙超载能够生成的大量活性氧(reactive oxygen species,ROS),ROS可以促进NLRP3炎症小体的过度活化[1]。本综述主要针对ERMC在细胞内炎症小体形成过程中的作用。

克林霉素耐药型金黄色葡萄球菌耐药基因与生物膜形成能力分析

目的分析克林霉素耐药型金黄色葡萄球菌耐药基因与生物膜的形成能力的关系。方法收集重庆市沙坪坝区人民医院2019年9月至2020年9月分离的克林霉素耐药型金黄色葡萄球菌36株,应用聚合酶链反应检测erm耐药基因,结晶紫染色法检测生物膜形成能力,并比较生物膜在不同基因型的分布情况。结果36株克林霉素耐药型金黄色葡萄球菌均能形成生物膜,ermA在cMLSB型中的表达显著高于iMLSB型中的表达(P=0.004),而ermC在iMLSB型中的显著高于cMLSB型中的表达(P=0.012)。进一步分析耐药基因与生物膜阳性数量关系发现,存在ermA耐药基因的菌株中生物膜阳性数量显著高于无ermA耐药基因携带组(P=0.024)。结论生物膜在ermA基因阳性菌株中形成能力较强,ermA耐药基因与生物膜表达显著相关,在临床检验工作中应重点关注此类菌株对疾病感染的影响。

小鼠肺组织内质网线粒体结构偶联的分离与鉴定

目的:分离并鉴定C57BL/6小鼠肺组织中内质网线粒体结构偶联(ERMC)。方法:选取8~10周C57BL/6雄性小鼠10只,处死小鼠后,取1 g肺组织匀浆后,采用梯度离心法分别分离出肺组织细胞内的内质网、粗提线粒体、ERMC和纯化线粒体,然后采用Western blotting方法对上述结构进行鉴定。结果:通过梯度离心在离心管中间一层白色条带中含有ERMC,底层白色沉淀物为纯化的线粒体,随后将分离纯化的ERMC和其他组分进行鉴别,结果发现蛋白质二硫键异构酶(PDI)主要表达在内质网和ERMC,Cyto C主要分布在线粒体,而钙连蛋白主要表达在内质网,三磷酸肌醇受体-Ⅰ(IP3R-1)作为内质网上的钙离子通道,在内质网和ERMC均有表达,此外,Sigma-1受体分子伴侣(Sig-1R)多表达在ERMC和线粒体中。结论:上述特征性蛋白分子表达分布特点说明本次研究分离提纯肺组织内ERMC的方法有效,可将其应用于后续的实验。

葡萄球菌对红霉素和克林霉素的诱导耐药性研究

目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素对克林霉素诱导耐药率及诱导耐药基因。方法按美国临床实验室标准化委员会推荐的纸片扩散方法测定并判读金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,并以D试验测定红霉素对克林霉素的诱导耐药表型,聚合酶链反应检测诱导耐药基因。结果甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素同时耐药分别占62.7%和54.8%。D试验阳性占所检测葡萄球菌的17.7%。在单一纸片红霉素耐药而克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中,D试验阳性即对克林霉素具有诱导耐药性者分别为67.6%和45.3%。红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,占74.5%。结论临床微生物室开展D试验检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素。